Trillium tschonoskii maxim extract attenuates abnormal Tau phosphorylation

Large-scale epidemiological studies have found that hyperhomocysteinemia is a powerful, independent risk factor for Alzheimer＇s disease. Trillium tschonoskii maxim is a traditional Chinese medicine that is used to promote memory. However, scientific understanding of its mechanism of action is limited. This report studied the potential neuroprotective effects of Trillium tschonoskii maxim extract against homocysteine-induced cognitive deficits. Rats were intravenously injected with homocysteine（400 μg/kg） for 14 days to induce a model of Alzheimer＇s disease. These rats were then intragastrically treated with Trillium tschonoskii maxim extract（0.125 or 0.25 g/kg） for 7 consecutive days. Open field test and Morris water maze test were conducted to measure spontaneous activity and learning and memory abilities. Western blot assay was used to detect the levels of Tau protein and other factors involved in Tau phosphorylation in the hippocampus. Immunohistochemical staining was used to examine Tau protein in the hippocampus. Golgi staining was applied to measure hippocampal dendritic spines. Our results demonstrated that homocysteine produced learning and memory deficits and increased levels of Tau phosphorylation, and diminished the activity of catalytic protein phosphatase 2A. The total number of hippocampal dendritic spines was also decreased. Trillium tschonoskii maxim extract treatment reversed the homocysteine-induced changes. The above results suggest that Trillium tschonoskii maxim extract can lessen homocysteine-induced abnormal Tau phosphorylation and improve cognitive deterioration such as that present in Alzheimer＇s disease.

Main Components of Polyphenols of Trillium tschonoskii Maxim. and Changes under Different Se Concentrations

[Objectives] To analyze main components of polyphenols of Trillium tschonoskii Maxim. and study changes under different Se concentrations. [Methods] In this experiment,the Trillium tschonoskii Maxim. was used and spectrophotometry was applied to measure the total phenols in stems,leaves and rhizomes of Trillium tschonoskii Maxim. [Results]Total phenols in stems and leaves and rhizomes of Trillium tschonoskii Maxim. were 3. 026% and 0. 513% respectively,the content of total phenols in stems and leaves was 5. 9 times of that in rhizomes; total phenol extracting solution was analyzed through UV-Vis scanning,HPLC detection,and LC-MS; 3 main polyphenol compounds were obtained: chlorogenic acid,caffeic acid and rutin,in which chlorogenic acid and caffeic acid were firstly discovered in Trillium tschonoskii Maxim. and rutin was firstly discovered in stems and leaves of Trillium tschonoskii Maxim. HPLC method was used to measure the content of chlorogenic acid,caffeic acid,and rutin in stems and leaves of Trillium tschonoskii Maxim. under different Se concentrations. [Conclusions]The content of chlorogenic acid in stems and leaves of Trillium tschonoskii Maxim. increases with the increase of Se concentration,showing Se promotes Se accumulation and the maximum content of chlorogenic acid is 2. 58%; the content of caffeic acid in stems and leaves of Trillium tschonoskii Maxim. increases slightly with the Se concentration,showing the promotion of Se to accumulation of caffeic acid is not significant;the content of rutin in stems and leaves of Trillium tschonoskii Maxim. firstly increases then declines with the increase in Se concentration,at25 mg/kg Se concentration,rutin reached the maximum value,showing the promotion of Se to rutin accumulation is not significant.

延龄草总皂苷的黑曲霉发酵工艺及提取条件研究

该文对延龄草总皂苷的最佳提取方法进行筛选,并通过紫外分光光度法与高效液相色谱法对发酵前后药液进行对比分析,在单因素实验的基础上,采用Box-Behnken响应面实验研究了黑曲霉接种量、发酵时间和发酵温度对延龄草中总皂苷提取率的影响。结果表明:延龄草总皂苷最佳提取方法为75%乙醇回流法,其最佳发酵条件为黑曲霉接种量2.25%,发酵时间6d,发酵温度27℃,在此条件下总皂苷提取率为8.620%,与预测结果基本一致。

延龄草总皂苷对2-VO模型大鼠认知功能及神经血管单元的作用

目的观察延龄草总皂苷(TST)对大鼠的血管性认知障碍及其神经血管单元(NVU)和神经环路完整性的作用。方法将48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、TST组及多奈哌齐组,每组12只。除假手术组外,其他3组大鼠均采用双侧颈总动脉结扎(2-VO)法建立脑缺血后认知障碍模型。造模后,TST组给予TST100mg/kg灌胃,多奈哌齐组给予盐酸多奈哌齐0.45mg/kg灌胃,对照组及模型组给予同体积的生理盐水,1次/d,连续28d。采用水迷宫实验检测各组大鼠的认知功能;HE、尼氏染色观察大鼠脑组织病理改变;免疫组织化学染色观察大鼠海马突触核蛋白(SYN)的表达情况;高尔基染色观察海马神经元树突棘的变化;Westernblotting检测各组大鼠海马组织白细胞介素(IL)-1β、IL-10、血管内皮生长因子A(VEGFA)、突触后致密蛋白95(PSD95)和生长关联蛋白43(GAP43)表达水平。结果水迷宫实验结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠的逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数和在目标象限的停留时间比均减少(P<0.05);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组逃避潜伏期缩短(P<0.01),穿越平台次数和在目标象限的停留时间比增多(P<0.05)。与假手术组比较,模型组海马CA1区神经元、尼氏小体、树突棘数量和SYN表达量减少(P<0.05);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组神经元、尼氏小体、树突棘数量和SYN表达量增多(P<0.05)。Westernblotting结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠海马组织IL-1β、VEGFA表达水平升高(P<0.05),PSD95、GAP43表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,TST组和多奈哌齐组IL-1β表达水平均降低(P<0.05),VEGFA、IL-10、GAP43表达水平均升高(P<0.05)。结论TST可能通过促进突触可塑性和NVU重塑减轻2-VO模型大鼠的认知障碍,有望用于卒中的治疗。

延龄草总皂苷对脑缺血大鼠皮层微结构及氨基酸类神经递质的影响

目的观察延龄草总皂苷(total saponins of Trillium tschonoskii Maxim.,TSTT)对脑缺血大鼠皮层微结构及氨基酸类神经递质的影响,探讨其抗脑缺血损伤的药理机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血模型,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组及TSTT低剂量(33 mg/kg)组、TSTT中剂量(65 mg/kg)组、TSTT高剂量(130 mg/kg)组,每组8只。各组大鼠分别进行相应干预,连续干预15天后,采用透射电镜观察皮层组织神经元、线粒体和突触超微结构;OPA-柱前衍生高效液相色谱荧光检测法检测谷氨酸(glutamic acid,Glu)和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量。结果(1)透射电镜观察结果显示:模型组大鼠神经元及线粒体微结构损伤,突触数量减少,突触间隙模糊不清,突触后致密物(postsynaptic density,PSD)长度变短,厚度变薄;与模型组比较,TSTT中剂量组(P<0.01)显著降低了神经元评分,神经元核膜较为完整。TSTT低、中、高剂量组均显著降低了线粒体评分(P<0.01),减轻了线粒体双层膜破损程度,内部嵴结构仍可见。TSTT高剂量组显著增加了突触数量(P<0.01);TSTT低、中剂量组显著增加了突触数量、PSD长度和厚度(P<0.01)。(2)高效液相色谱检测结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠皮层Glu/GABA比值明显增高(P<0.05);TSTT中剂量组大鼠皮层GABA含量明显升高,Glu/GABA比值明显降低(P<0.05)。结论TSTT可通过减轻脑缺血大鼠线粒体、神经元和突触等结构损伤,下调Glu和GABA递质氨基酸的比值,提高突触可塑性发挥脑保护作用。

延龄草总皂苷通过抑制Keap-1/Nrf2/HO-1、Nrf2/SLC7A11/GPX4通路介导的铁死亡减轻脑缺血/再灌注损伤

目的观察延龄草总皂苷(total saponins from Trillium tschonoskii maxim,TST)对大鼠脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)的神经保护作用,并探讨铁死亡相关机制。方法建立CIRI模型后,将雄性SD大鼠分为TST(0.1 g·kg^(-1))组、盐酸多奈哌齐(0.45 mg·kg^(-1))组、模型组以及假手术组。通过Morris水迷宫实验评估大鼠的学习记忆能力,利用Zea-Longa法评估神经功能变化,同时,使用TTC染色观察脑梗死面积,利用HE和Nissl染色检查脑组织的病理变化;为了进一步阐明其作用机制,我们利用透射电子显微镜观察线粒体结构的变化,并测定GSH-PX、SOD、MDA的含量。最后,通过免疫组化、免疫荧光法检测GPX4、Nrf2蛋白的表达。并采用Western blot检测大鼠Keap1/Nrf2/HO-1、Nrf2/SLC7A11/GPX4通路蛋白的表达。结果与假手术组大鼠相比,模型组表现出学习记忆能力下降,脑梗死面积明显增大,神经功能评分较高(P<0.01),神经元排列松散紊乱,尼氏小体减少。同时,线粒体呈现铁死亡状态。铁死亡相关:SOD、GSH-PX活力降低(P<0.01),MDA升高(P<0.01)。GPX4、Nrf2阳性细胞的表达明显减少,GPX4荧光强度降低。此外,海马的Keap1、Nrf2、HO-1、SLC7A11、GPX4的蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。给予TST后得到改善。结论TST具有神经保护作用,提升了学习记忆能力,降低了氧化应激水平,其机制可能与抑制Keap-1/Nrf2/HO-1、Nrf2/SLC7A11/GPX4通路介导的铁死亡有关。

延龄草总皂苷对缺血卒中后认知障碍大鼠Tau蛋白磷酸化及p38MAPK/NF-κB通路的影响

目的基于Tau蛋白磷酸化及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/核因子-κB(NF-κB)通路探讨延龄草总皂苷对缺血卒中后认知障碍大鼠的神经保护作用。方法将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和延龄草总皂苷低、中、高剂量组,每组10只。除假手术组外,其余组大鼠均采用大脑中动脉闭塞(MCAO)法建立缺血卒中后认知障碍模型。术后延龄草总皂苷低、中、高剂量分别给予延龄草总皂苷50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg灌胃(灌胃量5 mL/kg),假手术组、模型组给予等量双蒸水灌胃,均1次/d,连续灌胃8周。末次灌胃结束后,采用Zausinger六分法对大鼠进行神经功能缺损程度评分,Morris水迷宫试验评估大鼠的认知功能情况,尼氏染色观察海马神经元损伤情况,RT-qPCR技术检测海马组织中桥接整合因子1(Bin1)mRNA表达情况,Western blot法检测海马组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、Tau、磷酸化Tau(p-Tau)、p38MAPK、NF-κB蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠出现明显神经功能缺损和认知功能障碍,海马皮质区及CA1区神经元数量较少,尼氏小体数量明显减少(P<0.05),海马组织中Bin1 mRNA相对表达量和NLRP3、Tau、p-Tau、p38MAPK、NF-κB蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,延龄草总皂苷各组大鼠神经功能缺损评分均明显降低(P均<0.05),逃避潜伏期均明显缩短(P均<0.05),穿越平台次数均明显增加(P均<0.05),海马CA1区尼氏小体数量明显增多(P均<0.05),海马组织中Bin1 mRNA相对表达量和NLRP3、Tau、p-Tau、p38MAPK、NF-κB蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论延龄草总皂苷对缺血卒中后认知障碍大鼠具有神经保护作用,可改善大鼠的认知功能,机制可能与其抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路,下调NLRP3、Tau、p-Tau、p38MAPK、NF-κB蛋白表达有关。

基于STAT3/VEGF信号通路探究头顶一颗珠正丁醇萃取物对肝癌大鼠的抑制作用及其机制

目的探讨头顶一颗珠正丁醇萃取物对二乙基亚硝胺(DEN)诱发的大鼠原发性肝癌的抑制作用,探讨其对STAT3/VEGF信号通路的影响,并研究其对抗肝癌血管生成的分子机制。方法将大鼠随机分为G1组(正常对照组)、G2组(模型组)、G3组(华蟾素组)、G4组(头顶一颗珠低剂量组)、G5组(头顶一颗珠高剂量组),除G1组外所有大鼠腹腔注射二乙基亚硝胺建立肝癌大鼠模型。使用头顶一颗珠正丁醇萃取物处理肝癌大鼠,检测大鼠肝脏指数、脾脏指数;检测大鼠的血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白蛋白(ALB)和总胆红素(TBIL)的水平;ELISA法检测血清TGF-β1和VEGF的水平;同时采用Western blot检测VEGF、KDR、STAT3、p-STAT3蛋白水平。结果与G1组比较,G2组大鼠肝脏指数、ALT、AST和TBIL的水平显著增加,ALB的水平显著降低,血清TGF-β1和VEGF的水平显著升高,肝组织VEGF、KDR、STAT3、p-STAT3蛋白水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,头顶一颗珠正丁醇萃取物组大鼠肝脏指数显著降低,血清AST和TBIL水平显著降低,血清TGF-β1和VEGF的水平显著降低,肝组织VEGF、KDR、STAT3、p-STAT3蛋白水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论头顶一颗珠正丁醇萃取物通过抑制STAT3/VEGF信号通路,发挥抗肝癌血管生成作用。

延龄草皂苷对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响

目的观察延龄草皂苷(TSTT)对脑缺血大鼠梗死灶周围皮层少突胶质细胞GSK-3/β-catenin/CRMP2信号表达的影响,探讨其改善脑缺血损伤的作用机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、TSTT 65 mg/kg组、TSTT 33 mg/kg组和金纳多组,各给药组灌胃相应药物,连续15 d。HE染色观察脑组织病理变化,LFB染色观察脑组织神经纤维损伤,免疫荧光染色检测梗死灶周围皮层2′,3′-环核苷酸-3′-磷酸二酯酶(CNPase)、蛋白聚糖(NG2)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达,实时荧光定量PCR检测梗死灶周围皮层GSK-3、β-catenin、脑衰蛋白反应调节蛋白-2(CRMP2)基因表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠患侧脑组织明显坏死,神经细胞大量死亡,胞体皱缩,单位面积神经细胞数量显著减少(P<0.01),神经纤维丢失、排列混乱,髓鞘中有大量空泡,神经纤维相对积分光密度显著减少(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠神经细胞形态有所改善,单位面积神经细胞数量显著增加(P<0.05,P<0.01),神经纤维排列较有序,髓鞘中空泡较少,神经纤维相对积分光密度显著增加(P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层CNPase阳性表达显著降低,NG2阳性表达显著升高(P<0.01),NG2/GSK-3β、NG2/β-catenin、CNPase/GSK-3β、CNPase/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.01);与模型组比较,TSTT 65、33 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层CNPase、NG2表达显著升高,CNPase/GSK-3β、NG2/GSK-3β阳性细胞显著减少,CNPase/β-catenin、NG2/β-catenin阳性细胞显著增加(P<0.05,P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3αmRNA表达显著升高(P<0.05),β-catenin、CRMP2 mRNA表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,TSTT 65 mg/kg组大鼠梗死灶周围皮层GSK-3α、GSK-3βmRNA表达显著降低,β-catenin和CRMP2 mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论TSTT可减轻脑缺血大鼠脑组织损伤,保护少突胶质细胞,促进少突胶质前体细胞存活,其机制可能与下调GSK-3表达,上调β-catenin、CRMP2表达有关。

延龄草总皂苷对D-gal诱导的衰老大鼠认知功能及线粒体自噬的影响

目的探讨延龄草总皂苷(total saponins from Trillium tschonoskii maxim,TST)对D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老大鼠认知功能及线粒体自噬的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组(D-gal,皮下注射)、干预组(TST,灌胃给予低、中、高3个剂量),每组10只,连续给药6周。Morris水迷宫评价大鼠认知功能;HE、Nissl染色观察海马及皮质组织形态;免疫组织化学法检测Pink1、Parkin的定位表达;Western blot检测Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、p62、Beclin1的表达水平。结果与正常对照组相比,D-gal模型组逃避潜伏期时间延长、穿越平台次数减少(P<0.05);大鼠海马组织内神经元数量明显减少;海马组织Pink1、Parkin阳性细胞表达减少;Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达明显下降,p62的表达明显升高(P<0.05)。与D-gal模型组相比,TST各剂量组逃避潜伏期时间缩短、穿越平台次数增多、停留在平台所在象限时间增加(P<0.05);海马神经元数量明显增多;海马组织Pink1、Parkin阳性细胞表达增多;Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达明显升高,p62的表达明显降低(P<0.05)。结论TST具有明确的神经保护作用,对D-gal所致衰老大鼠的学习记忆降低具有改善作用,其机制可能与Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ及Beclin1蛋白表达升高、激活线粒体自噬有关。

延龄草总皂苷通过调控GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路抑制内质网应激而减轻PSCI大鼠海马神经元损伤

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)对卒中后认知障碍(PSCI)大鼠海马神经元的保护作用及分子机制。方法:将采用改良Zea Longa线栓法造模成功的大鼠随机分为模型(model)组、TST(100 mg/kg)组和盐酸多奈哌齐(DON;0.45 mg/kg)组,另设假手术(sham)组,每组10只,连续给药4周。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;TTC染色检测大鼠脑梗死体积变化,HE、Nissl和TUNEL染色观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫组化及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、胱天蛋白酶12(caspase-12)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果:与sham组相比,model组大鼠逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数及目标象限停留时间显著减少(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著增大,神经元尼氏小体数量显著减少,凋亡细胞显著增多;海马组织中GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与model组比较,TST组及DON组大鼠逃避潜伏期显著缩短,穿越平台次数及目标象限停留时间显著增加(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著缩小,神经元尼氏小体数量显著增多,凋亡细胞显著减少;GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著降低,Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:TST对PSCI大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能与减轻内质网应激、减少神经元凋亡并抑制GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路有关。

延龄草总皂苷对卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力和神经元突触损伤的影响

目的探讨延龄草总皂苷对卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力和神经元突触损伤的影响及作用机制。方法采用改良线栓法制备卒中后认知障碍大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、延龄草总皂苷组(100 mg/kg)和盐酸多奈哌齐组(0.45 mg/kg),每组10只,另设假手术组10只,给药组分别予相应药物灌胃,连续4周。Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能,HE和尼氏染色观察脑组织病理变化,TUNEL染色观察海马CA1区神经元凋亡情况,高尔基染色观察海马树突棘变化,Western blot检测海马组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、SYN、PSD-95、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著增加(P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间比显著减少(P<0.01);海马CA1区及皮质区神经元排列紊乱、尼氏体减少,凋亡神经元数量增加,树突棘密度减小(P<0.01);海马组织Bcl-2、SYN、PSD-95、PI3K、p-Akt蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,延龄草总皂苷组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期显著减少(P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间比显著增加(P<0.05,P<0.01);海马CA1区及皮质区神经元饱满、尼氏体增多,凋亡神经元数量减少,树突棘密度增加(P<0.01);海马组织Bcl-2、SYN、PSD-95、PI3K、p-Akt蛋白表达显著升高(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论延龄草总皂苷可显著改善卒中后认知障碍大鼠学习记忆能力,抑制神经元和突触损伤,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路、抑制神经元凋亡有关。

基于指纹图谱化学模式识别的头顶一颗珠产地差异评价

目的通过头顶一颗珠HPLC指纹图谱化学模式识别,评价秦巴及不同产地间药材的质量差异。方法采用Hibar C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,建立头顶一颗珠HPLC指纹图谱,经相似度评价,聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)研究秦巴及外产地10批样品的质量差异。结果头顶一颗珠指纹图谱匹配得到23个共有色谱峰,其中21~23号峰依次指认为重楼皂苷Ⅶ、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-〔O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)〕-O-β-D-葡萄糖苷及重楼皂苷Ⅵ,各批次相似度在0.706~0.958之间。经化学模式识别10批药材样品可聚为3类,其中秦巴产的湖北神农架及陕西药材PCA综合得分较高,质量较好。OPLS-DA筛选出11个影响各批药材质量差异的色谱峰。结论建立的中药指纹图谱化学模式识别方法能明确秦巴产头顶一颗珠的道地品质,为其开发利用提供了质量评价依据。

四川省珍稀濒危植物延龄草遗传多样性分析

采用ISSR分子标记技术,对延龄草7个自然居群的遗传多样性水平和遗传结构进行了研究.用12个引物对7个居群共105个样品进行了扩增,共得到135条清晰的扩增位点,其中多态性位点46个,多态位点百分率(PPB)为34.07%.POPGENE分析结果表明:同其他一些濒危植物相比,延龄草具有较低的遗传多样性(He=0.0759,Ho=0.1200).卧龙居群的遗传多样性水平最高(PPB=18.52%,He=0.0417,Ho=0.0684),大坝子居群的遗传多样性水平最低(PPB=8.89%,He=0.0220,Ho=0.0348).Neis遗传多样性分析和AMOVA分析表明:7个自然居群间出现了一定程度的遗传分化(Gst分别为0.5554和0.5253),可能是基因流障碍和遗传漂变引起的;而居群间的限制性基因流(Nm=0.4002)可能由种子的有限传播距离、居群的地理隔离或自交等因素导致.通过对延龄草居群遗传多样性和遗传结构的分析,结合群落学调查研究,该文提出了一些保护策略.

延龄草提取物抗炎、镇痛和凝血作用的研究

目的研究延龄草乙醇提取物、醋酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物抗炎、镇痛和凝血作用,筛选其活性部位。方法采用角叉菜胶致大鼠足跖肿胀模型和检测NO含量评价延龄草乙醇提取物的抗炎活性;用扭体法观察延龄草乙醇提取物的镇痛作用;采用玻片法、毛细管法测凝血时间研究延龄草乙醇提取物的凝血作用。结果通过测定大鼠体内NO含量,延龄草乙醇提取物有抗炎活性,与模型组相比有显著性差异;延龄草乙醇提取物、醋酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀均有显著的抑制作用,其中正丁醇萃取物比醋酸乙酯萃取物的作用更显著;对醋酸致痛有明显的镇痛作用,同时延龄草乙醇提取物有显著的促凝血作用。结论延龄草乙醇提取物、醋酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物有显著的抗炎、镇痛和促凝血作用。

延龄草化学成分的分离与鉴定

目的研究延龄草(Trillium tschonoskii Maxim.)根及根茎的化学成分。方法利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、ODS(反相C18键合硅胶)柱色谱、高效液相色谱等色谱技术对延龄草的化学成分进行分离和纯化,通过理化性质和NMR等波谱数据分析确定化合物的结构。结果从延龄草根及根茎70%(φ)乙醇提取物中分离得到11个已知成分,分别确定为重楼皂苷Ⅵ(chonglouosideⅥ,1)、偏诺皂苷元-3β-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(penogenin-3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-O-β-D-glu-copyranoside,2)、重楼皂苷Ⅶ(chonglouosideⅦ,3)、偏诺皂苷元-3β-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(trikamsteroside B,4)、(25S)-27-羟基偏诺皂苷元-3β-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷((25S)-27-hydroxypenogenin-3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-O-β-D-glucopyranoside,5)、(25S)-27-羟基偏诺皂苷元-3β-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷((25S)-27-hydroxypenogenin-3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-O-β-D-glucopyranoside,6)、(25S)-27-羟基偏诺皂苷元-3β-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(polyphyllosideⅢ,7)、(23S,24S,25S)-螺甾-5-烯-1β,3β,21,23,24-五羟基-1β-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[O-β-D-吡喃木糖基-(1→3)]-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(trikamsteroside E,8)、3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-O-β-D-glucopyranosylhomo-aro-cholest-5-ene-26-O-β-D-glucopyranoside(parispseudoside B,9)、3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-O-β-D-glucopyranosylhomo-aro-cholest-5-ene-26-O-β-D-glucopyranoside(aethioside A,10)、3β-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-α-L-rham-nopyranosyl-(1→4)-[O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-O-β-D-glucopyranosylhomo-aro-cholest-5-ene-26-O-β-D-glucopyranoside(parispseudoside A,11)。结论化合物9-11为首次从百合科植物中分离得到,7为首次从延龄草属植物中分离得到,4-6、8为首次从延龄草中分离得到。

头顶一颗珠醇提物对新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤的保护作用

目的探讨头顶一颗珠醇提物对新生大鼠缺血/缺氧性脑损伤(HIBD)的保护作用及可能机制。方法 50只7日龄SD大鼠随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=20)、头顶一颗珠治疗组(n=20),各组分别予以3 d相应的生理盐水及头顶一颗珠醇提物腹腔注射。分别通过氯化三苯基四氮唑(TTC)和尼氏染色检测脑缺血及神经细胞死亡情况,通过Western blot检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 HIBD模型组可见脑组织稍有肿大,且右侧脑部可见缺血的白色坏死区;治疗组可见大脑形态完好,未见明显肿胀及坏死,TTC染色后,模型组可见右侧脑部出现明显缺血区,经治疗后缺血区域减少。尼氏染色结果提示模型组可见神经元细胞减少,而治疗后神经元细胞增加。Western blot显示HIBD后Bcl-2表达减少(P<0.01),Bax表达增加(P<0.01),而经过头顶一颗珠治疗后,Bcl-2表达增加(P<0.01),Bax表达降低(P<0.01)。结论头顶一颗珠对HIBD具有保护作用,其机制可能与降低神经元细胞凋亡有关。

头顶一颗珠提取液对大鼠脊髓损伤后CNTF及CNTFRα表达的影响

目的观察百合科延龄草属植物头顶一颗珠干燥根茎提取液对大鼠急性脊髓损伤模型睫状神经营养因子(CNTF)及其受体(CNTFRα)表达的影响。方法健康成年Wistar大鼠45只,随机分为对照组、模型组及实验组(n=15),模型组及实验组参照Allen's法建立脊髓损伤模型,对照组不损伤脊髓。实验组于术前2周开始给予头顶一颗珠提取液灌胃,模型组和对照组给予同剂量蒸馏水灌胃。分别于伤后1d、7d,14d处死动物,取脊髓组织行HE染色观察组织病理学改变,Nissl染色观察Nissl小体的变化,并通过免疫组化染色、Western-blotting及RT-PCR检测观察CNTF、CNTFRαm RNA及蛋白的表达情况。结果 HE染色显示实验组脊髓结构比较清晰,神经细胞水肿、坏死较模型组减轻;Nissl染色见模型组和实验组损伤后各时相点脊髓前角运动神经元尼氏小体减少或消失,实验组尼氏小体减少程度较模型组明显减轻;免疫组化染色显示各组脊髓均有CNTF、CNTFRα蛋白表达。RT-PCR检测显示伤后7、14d模型组及实验组脊髓组织中CNTF、CNTFRαm RNA表达水平均明显高于对照组,且实验组明显高于模型组。Western blotting检测显示模型组伤后14d及实验组伤后7、14d脊髓组织中CNTF、CNTFRα蛋白表达水平明显高于对照组,且实验组伤后14d的表达水平均明显高于模型组。结论头顶一颗珠能上调脊髓组织中CNTF、CNTFRα的表达,对脊髓损伤有一定的保护作用。

头顶一颗珠对岗田酸致阿尔茨海默病大鼠脑组织抗氧化酶和过氧化脂质的影响

目的观察头顶一颗珠(TTM)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马、皮质抗氧化酶和过氧化脂质表达的影响。方法用岗田酸(OA)大鼠侧脑室注射制备大鼠阿尔茨海默病大鼠模型,TTM注射液(750、500、250 mg/kg)腹腔注射,并用维生素C(V it C)腹腔注射作阳性对照。测定正常组、模型组、阳性对照组、药物实验组海马、皮质超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的含量。结果模型组与正常组比较,SOD、GSH-Px降低(P<0.05,P<0.001),MDA增高(P<0.001)。药物实验组与阳性对照组比较,SOD、GSH-Px和MDA在TTM高、中剂量组差异明显(P<0.05),低剂量组差异不明显(P>0.05)。结论TTM抗衰老作用与增强脑组织SOD、GSH-Px活性、减少MDA蓄积有关。

硒对延龄草生长及硒、镉、砷、铅、汞吸收规律的影响

目的：探讨在不同硒浓度条件下延龄草生长发育规律及硒、镉、砷、铅、汞吸收规律。方法：用不同浓度的外源硒与镉、砷、铅、汞处理延龄草,计算延龄草生长量、叶面积、生根数等指标来反应其生长规律;用原子荧光法测定硒与镉、砷、铅、汞的吸收量。结果：延龄草茎叶相对生长量、叶面积和生根数都随着外源硒浓度的增大呈先增大后减小的趋势,在外源硒浓度为25 mg/kg时,延龄草茎叶相对生长量、叶面积和生根数均达到最大值,当硒浓度超过30 mg/kg时,对延龄草的生长发育表现出抑制作用。延龄草对镉、铅、汞、砷的吸收随着外源硒浓度的增加出现先减少再增加后减少的规律,硒浓度为10-15 mg/kg时,延龄草对镉、铅、汞、砷的吸收量最少。结论：不同硒浓度对延龄草的生长发育及吸收镉、铅、汞、砷的作用有所不同。