吉林延龄草营养器官解剖结构和光合生理特性对环境适应性研究

采用解剖显微观察和光合仪测定等方法研究吉林延龄草根、茎、叶营养器官的解剖结构及光合生理特性,揭示其形态解剖结构、光合特性与环境适应性的关系,为吉林延龄草保护及驯化栽培提供理论基础和科学依据。结果表明,吉林延龄草只具有初生构造的根、茎及维管组织中没有形成层,初生木质部导管数量少,输导组织不发达;叶片表皮无表皮毛,表皮细胞凸凹不平;叶肉细胞由海绵薄壁细胞组成,排列疏松,细胞之间存在较大间隙;叶片上表皮无气孔,气孔分布在叶下表面,气孔密度为18.69个·mm-2,气孔表现"外凸"特征。叶片叶绿素a/b比值为1.90;其具有较低光补偿点(LCP)和光饱和点(LSP),分别是1.23和415μmol·m-2·s-1,在光饱和点可达最大净光合速率为4.44μmol·m-2·s-1。研究表明,吉林延龄草在形态结构、光合生理特性上具有明显适应阴生潮湿环境特征,是典型的阴生植物。

UPLC-PDA法动态测定白花延龄草中二种化学成分

采用UPLC-PDA法测定不同采收期白花延龄草根茎及茎叶中重楼皂苷Ⅵ及偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的含量。色谱柱:Waters acquity UPLC BEH C18(2.1mm×100mm,1.7μm);检测器:PDA;流动相:乙腈(A)-水(B);流速:0.4m L/min;线性梯度洗脱:0min^5min,40%A^47%A;柱温:35℃;检测波长:203nm;进样量:2μL。3个时期白花延龄草根茎中重楼皂苷Ⅵ含量分别为1.06%、1.19%和1.35%,茎叶中含量分别为0.019%、0.010%和0.002%;根茎中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷含量分别为0.91%、0.97%和1.12%,茎叶中含量分别为0.064%、0.049%和0.012%。

吉林延龄草种子内源抑制物质初步研究

为探讨吉林延龄草种子内源抑制物质生理活性及种子中抑制物质的去除方法,采用乙酸乙酯、甲醇、水提取吉林延龄草种子并测定其提取物对白菜、水稻幼苗生长的抑制活性,用温水(25,35,45℃)浸种并测定各批次浸提液抑制活性,结果表明,吉林延龄草种子浸提液(乙酸乙酯提取液除外)对白菜幼根及胚轴,水稻幼根均有显著抑制作用,且抑制物质的活性随着提取物浓度的增加而增强,吉林延龄草种子水提取液(C)对白菜和水稻幼苗生长的抑制活性高于甲醇提取液(B)的生物活性,吉林延龄草种子乙酸乙酯提取液对白菜和水稻幼苗无显著抑制作用(p>0.05),吉林延龄草种子经乙酸乙酯、甲醇溶液提取后,再经蒸馏水提取获得的水提液Ⅱ(E)对白菜和水稻幼苗生长的抑制活性减弱;温水浸泡可将其内源抑制物质浸提出来,且随着浸种时间的增加,浸提液对白菜幼根及胚轴的抑制作用呈现先增加而后逐渐降低的趋势。25℃蒸馏水浸泡种子第5天浸提液抑制作用达到最大,对白菜幼根及胚轴的抑制作用分别达到65.89%和25.69%,35℃蒸馏水浸泡种子第3天浸提液抑制作用达到最大,对白菜幼根及胚轴的抑制作用分别达到82.14%和59.93%,45℃蒸馏水浸泡种子第2天浸提液抑制作用达到最大,对白菜幼根及胚轴的抑制作用分别达到90.62%和83.86%。综合分析表明,吉林延龄草种子中存在活性较高的内源抑制物,用45℃温水浸泡可有效除去种子内源抑制物质。

吉林省蛟河市濒危药用植物白花延龄草资源调查

通过对吉林省蛟河市濒危药用植物白花延龄草野生资源的地理分布、生态环境、群落类型及单位面积蕴藏量等调查研究,为制定野生白花延龄草资源的保护与可持续利用措施,研究其致危生态机理,提供参考。

白花延龄草不同药用部位中氨基酸含量及组成对比分析

初步探索不同采收期白花延龄草根茎、茎叶及果实中氨基酸的组成及其与药用价值的相关性。采用高效离子交换色谱法测定样品中17种水解氨基酸的含量。7个白花延龄草样品中均含有17种氨基酸,氨基酸总量T在5195.67mg/100g^6985.62mg/100g之间,富含人体必需氨基酸和药用氨基酸。白花延龄草茎叶必需氨基酸含量和氨基酸构成模式都优于根茎。各采收期白花延龄草药用部位中的药用氨基酸含量M在3496.18mg/100g^4673.85mg/100g之间,且M/T值大于60%,其中根茎精氨酸含量高,茎叶亮氨酸含量高。

不同采收期白花延龄草根茎中脂肪酸的GC-MS分析

采用气相色谱‐质谱（G C‐M S ）法对不同采收期白花延龄草根茎中的脂肪酸组成进行分析。结果表明，共从白花延龄草根茎中分离鉴定出23种脂肪酸，其中亚油酸的含量最高达52．24％～53．83％，其他主要脂肪酸为棕榈油酸20．14％～21．79％、油酸10．75％～12．87％、α～亚麻酸2．90％～5．60％和棕榈酸4．04％～6．77％，其不饱和脂肪酸含量高达89．97％～93．46％，并且大部分脂肪酸含量呈先降后升趋势，多以样品3的脂肪酸含量最高。

白花延龄草中8种无机营养元素测定分析

采用原子吸收光谱法对不同采收时期白花延龄草不同部位的K、Na、Ca、Mg、Zn、Fe、Mn、Cu 8种无机营养元素含量进行测定。结果表明,茎叶部位K、Ca含量较高,平均达到2.17%、2.16%;Mg、Fe含量次之,平均达到0.28%、0.13%;Na、Zn、Mn、Cu含量相对较低。根部各元素分布与茎叶部位相似,K、Ca含量最高,达到0.67%、0.26%;Mg、Fe次之,为0.108%、0.107%;Na、Zn、Mn、Cu含量相对最低。其中,根部变化幅度最大的元素是Zn,增加31.09%;其次是Ca元素,含量增加16.29%;Fe元素含量增加14.94%。茎叶中变化幅度最大的元素是Na,降低了51.33%;其次是Mg、Fe和Mn,分别降低了44.24%、44.23%和43.93%。随着采收时间的后移,茎叶部位8种无机营养元素的含量呈逐渐降低趋势,根部呈逐渐增高趋势。

不同产地延龄草根茎药材HPLC指纹图谱和3种甾体皂苷成分的含量测定及多元统计分析

目的建立不同产地延龄草根茎药材的HPLC指纹图谱及含量测定方法,并对共有峰进行多元统计分析,确定延龄草根茎药材的最佳产地和采收期。方法采用HPLC法,Diamonsil(2)C_(18)型色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^(-1),柱温30℃,进样量10μL,检测波长203 nm。对不同产地的21批延龄草根茎药材进行指纹图谱相似度评价分析、主成分含量测定、聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),得到变量重要性投影(VIP)值>1的化合物信息。结果21批延龄草根茎药材的HPLC指纹图谱相似度在0.824~0.972,其标定了10个共有峰,对照品指认了3个主要色谱峰,分别是8号峰重楼皂苷Ⅶ(Y4T)、9号峰偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Y3T)和10号峰重楼皂苷Ⅵ(Y2T),CA和PCA分析21批不同产地延龄草根茎药材可大致分为四类,OPLS-DA分析结果显示不同产地延龄草具有一定差异性,VIP值>1的色谱峰4、3、9、8、2和10是影响延龄草药材差异的标志性成分,21批药材含量测定结果范围:Y2T为10.71~27.65 mg·g^(-1)、Y3T为9.27~24.80 mg·g^(-1)、Y4T为2.84~8.95 mg·g^(-1)。确定最佳产地为吉林延龄草4年生或5年生。结论所建立的延龄草根茎药材HPLC指纹图谱分析方法简单,重现性良好,可用于鉴别不同来源的延龄草,该含量测定方法的精密度较高、稳定性较好,可为延龄草最佳产地选择和质量评价提供依据。

基于UPLC-Q-TOF-MS技术的吉林延龄草药材不同部位化学成分比较研究

目的:比较分析吉林延龄草药材不同部位的化学成分。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间-串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)技术,色谱条件为Welchrom HPLC C_(18)色谱柱(150 mm×2.1 mm,3μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱,流速0.5 mL/min,进样量3μL,检测波长190~400 nm,柱温35℃;电喷雾离子源(ESI),在正离子模式下扫描,扫描范围m/z 50~1200。对所得质谱数据经MarkView 1.2.1处理,使用SIMCA14.1进行主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),得到变量重要性投影(VIP)值>1的化合物信息,综合筛选分析吉林延龄草药材不同部位的分组趋势、相关性和含量差异性化学成分。结果:从吉林延龄草不同部位中共指认了70个化合物,其中甾体皂苷类化合物共56个(包括6种结构母核),占比80%。从吉林延龄草根中指认了69个化合物,根茎中指认了58个化合物,茎中指认了38个化合物,叶中指认了55个化合物,果实中指认了45个化合物,果皮中指认了45个化合物,种子中指认了40个化合物,各部位共有成分23个。PCA及OPLS-DA分析结果,吉林延龄草的5个部位(根、根茎、茎、叶、果实)清晰地聚成3类,t检验P<0.05且VIP>1的化合物有12个。结论:吉林延龄草的根、根茎、茎和种子的成分相似,均以偏诺皂苷和甾醇皂苷为主,果皮和叶中的成分以延龄草皂苷和偏诺皂苷为主,差异性主要体现在成分含量上,该研究为吉林延龄草非药用部位的综合开发和合理利用提供了有效的数据支撑。

正交试验优选白花延龄草中重楼皂苷Ⅶ提取工艺研究

以白花延龄草干燥根茎为试验材料,采用正交试验法考察料液比、提取时间、提取温度3个因素对白花延龄草根茎中重楼皂苷Ⅶ含量的影响。采用HPLC法测定白花延龄草中重楼皂苷Ⅶ的含量,结果,影响白花延龄草根茎中重楼皂苷Ⅶ提取率的因素依次为提取温度>料液比>提取时间;白花延龄草根茎中重楼皂苷Ⅶ的最佳提取工艺条件为料液比1∶9、提取时间4 h、提取温度90℃。在此条件下,测得白花延龄草根茎中重楼皂苷Ⅶ的含量为0.931 mg/g。

白花延龄草水提液对四氯化碳致小鼠肝纤维化的保护作用

目的探讨白花延龄草水提液对肝纤维化作用及其作用机制。方法腹腔注射四氯化碳(CCl_4)构建雄性C57鼠肝纤维化模型,给药A组(白花延龄草水提液0. 5 g/kg)、给药B组(白花延龄草水提液1 g/kg)、阳性对照组(扶正化瘀胶囊0. 75 g/kg)分别进行灌胃给药,采用生化方法检测血清中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬酸氨基转移酶(AST)及肝脏组织中的超氧化物歧化酶(SOD)、脂质氧化终产物丙二醛(MDA)含量;苏木精-伊红(HE)染色法检测肝纤维化的变化;蛋白质印迹(Western Blot)法检测转化生长因子-β(TGF-β)蛋白表达水平。结果给药组和阳性对照组均能显著抑制CCl_4诱导的小鼠肝纤维化程度,与模型组相比,给药组和阳性对照组血清ALT,AST水平及肝脏组织中MDA水平明显降低(P <0. 01),SOD显著提高(P <0. 01);与模型组相比,给药组和阳性对照组TGF-β蛋白表达具有显著的抑制作用(P <0. 01)。结论白花延龄草水提液对肝纤维化有显著的改善作用。

正交试验优选白花延龄草薯蓣皂苷元提取工艺研究

以白花延龄草干燥的根茎为试验材料,用正交试验优化白花延龄草根和根茎中薯蓣皂苷元的提取工艺,采用UPLC法测定白花延龄草中薯蓣皂苷元的含量。采用回流法考察料液比、提取时间、提取温度3个因素对白花延龄草根茎中薯蓣皂苷元提取含量的影响,用正交试验法优化提取工艺。影响白花延龄草根茎中薯蓣皂苷元提取含量的主次因素为:提取温度>料液比>提取时间;白花延龄草根茎中薯蓣皂苷元的最佳提取工艺条件为:料液比为1∶8,提取时间为4 h,提取温度为80℃。提取温度是影响薯蓣皂苷元提取含量的主要因素,在最佳提取工艺条件下,白花延龄草根茎中薯蓣皂苷元的提取含量为0.0791%。

延龄草与吉林延龄草根茎及须根中3种皂苷成分的含量测定

比较延龄草与吉林延龄草药材根茎与须根间主要成分的含量差异,利用HPLC-CAD同时测定了3种主要成分重楼皂苷Ⅶ、偏诺皂苷元-3β-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖、重楼皂苷Ⅵ的含量。色谱条件:TSK gel ODS(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水(43∶57)等度洗脱,流速为1 mL·min^(-1),进样量为20μL。电雾式检测器(CAD):工作气压为35 psi(1 psi=6.895 kPa),雾化器温度为35℃。3种甾体皂苷良好分离,线性关系、稳定性、精密度、重复性、加样回收试验均符合中药质量分析要求。运用IBM SPSS Statistics 20分析软件进行主成分分析,结果显示,头顶一颗珠的来源包含了2种延龄草属植物,且吉林延龄草为主要资源;7批延龄草样品和9批吉林延龄草的根茎之间3种皂苷成分的含量存在不显著差异;但是根茎与须根之间3种皂苷成分的含量存在显著的差异。

吉林延龄草的非皂苷类成分及其细胞毒活性

目的研究吉林延龄草Trillium kamtschaticum非止血活性部位化学成分及其生物活性。方法采用硅胶、反相C18、Sephadex LH-20等色谱材料和重结晶方法进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构,并用MTT法评价部分化合物的细胞毒活性。结果从吉林延龄草非止血活性部位分离得到10个化合物,分别鉴定为β-蜕皮激素(1)、水龙骨素B(2)、integristerone B(3)、(9Z,15Z)-11,12,13-三羟基-9,15-十八碳二烯酸(4)、(Z)-11,12,13-三羟基-9-十八碳烯酸(5)、(9Z,15Z)-11,12,13-三羟基-9,15-十八碳二烯酸甲酯(6)、(Z)-11,12,13-三羟基-9-十八碳烯酸甲酯(7)、7,11-二甲基-3-亚甲基-10β,11-二羟基-1,6-十二碳二烯二醇-10-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(8)、山柰酚-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基(1→6)-O-β-D-半乳吡喃糖苷(9)、5-羟基-4-羟甲基-二氢吡喃-2-酮(10)。细胞毒活性测试表明,化合物1、9和10的IC50值分别为(26.6±1.3)μmol/L(DU145细胞株)、(16.2±6.2)μmol/L(CEM细胞株)和(23.7±1.2)μmol/L(He La细胞株)。结论化合物4~7和10为首次从该属植物中分离得到,化合物1、9和10具有一定的细胞毒活性。