Trim37过表达通过激活Wnt/β-catenin通路促进乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT

目的:探讨Trim37通过Wnt/β-catenin通路对乳腺癌发展的影响及其作用机制。方法:实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和Western blot检测Trim37在乳腺癌组织、癌旁正常组织、人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)和人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A细胞)中的表达。pcDNA-Trim37或Trim37 siRNA转染MCF-7细胞后,CCK-8法检测过表达及下调Trim37对细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达及下调Trim37对细胞侵袭的影响,细胞划痕愈合实验检测过表达及下调Trim37对细胞迁移的影响,Western blot检测过表达及下调Trim37对细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Snail)及β-catenin、CyclinD1、p-ERK、p-AKT和p-FAK蛋白表达的影响。Wnt/β-catenin通路抑制剂(XAV939)作用MCF-7细胞后,检测MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移和EMT能力。结果:与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中Trim37 mRNA和蛋白表达量明显升高(P<0.01);与MCF-10A细胞相比,MCF-7细胞中Trim37 mRNA和蛋白表达量明显升高(P<0.01)。过表达Trim37促进了MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移与EMT,β-catenin和CyclinD1蛋白表达量明显上升;下调Trim37抑制了MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移与EMT,β-catenin和CyclinD1蛋白表达量明显降低,过表达及下调Trim37对ERK、AKT和FAK蛋白的磷酸化水平没有影响。XAV939作用MCF-7细胞后抑制了过表达Trim37对MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移和EMT的促进作用。结论:过表达Trim37通过激活Wnt/β-catenin通路诱导EMT来促进乳腺癌的发展。

TRIM37在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的探讨三结构域蛋白37(TRIM37)在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法采用生物信息学分析癌症基因组图谱数据库中肝癌TRIM37 mRNA表达水平及其对患者生存的影响。采用蛋白免疫印迹法(WB)试验检测肝癌组织和癌旁正常组织中TRIM37蛋白的表达。采用RNA干扰技术将特异性靶向TRIM37、非靶向对照的siRNA作用于Huh7细胞,分为敲低组(siTRIM37#1组、si-TRIM37#2组)和非靶向对照组(si-NC组)。采用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力。采用WB试验检测细胞TRIM37蛋白及上皮-间质转化(EMT)相关标志蛋白表达,以及PTEN/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果生物信息学分析结果显示,肝癌组织TRIM37 mRNA表达高于癌旁正常组织(P<0.05);生存分析显示,高表达TRIM37患者总生存期低于低表达TRIM37患者(P<0.05)。si-TRIM37组细胞的侵袭能力低于si-NC组(P<0.05);si-TRIM37组N-cadherin、Vimentin蛋白表达量比si-NC组下降(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量增加(P<0.05);si-TRIM37组比si-NC组P-AKT、P-GSK-3β、β-catenin蛋白表达量下降(P<0.05),PTEN蛋白表达量升高(P<0.05)。结论TRIM37在人肝癌组织中高表达,并与患者预后相关。敲低TRIM37抑制肝癌细胞EMT标记蛋白的表达,并抑制细胞的侵袭,可能与抑制PTEN/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路有关。

TRIM37对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制及IFN-β产生影响的研究

本实验室前期通过质谱分析筛选到宿主因子三方基序蛋白37(TRIM37),推测其可能与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的复制相关。为探究TRIM37对PRRSV复制的影响,本研究将不同剂量的PRRSV HN07-1株(MOI分别为0.01、0.1、1)分别感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)和MARC-145细胞后不同时间(6 h、12 h、24 h、36 h和48 h),采用荧光定量PCR(qPCR)检测细胞中内源TRIM37的转录水平,结果显示PRRSV能够刺激这两种细胞内源TRIM37的转录,并且PRRSV以MOI 1及感染后24 h细胞中TRIM37的转录水平最高,感染后36 h和48 h细胞中TRIM37的转录水平较感染后24 h有所下降但仍显著高于对照组(P<0.05)。从MARC-145细胞中经PCR扩增TRIM37基因并克隆至pCAGGS-HA中构建真核表达质粒pCAGGS-HA-TRIM37,经双酶切及测序鉴定正确后转染MARC-145细胞,24 h后以MOI 1将HN07-1株感染细胞,感染后不同时间分别采用qPCR、western blot、病毒滴度(TCID50)测定和间接免疫荧光试验(IFA)检测PRRSV的复制情况。结果显示,与转染空载体pCAGGS-HA的对照细胞相比,过表达TRIM37后细胞中PRRSV ORF7的转录水平、N蛋白的表达水平(感染后48 h和72 h)及病毒滴度(感染后36 h与48 h)均显著(P<0.05)或者极显著(P<0.01)下降。针对TRIM37基因设计3对特异性的TRIM37 siRNA-1/2/3,转染MARC-145细胞后,利用qPCR检测TRIM37 siRNA的干扰效率,结果显示,TRIM37 siRNA-2能够有效降低TRIM37的转录水平。将TRIM37 siRNA-2转染MARC-145细胞后再以MOI 1 HN07-1株感染,感染后不同时间分别采用qPCR、western blot和病毒滴度(TCID50)测定检测PRRSV的复制情况。结果显示,与转染NC siRNA的对照细胞相比,干扰TRIM37表达的细胞中PRRSV ORF7的转录水平、N蛋白的表达水平及病毒滴度均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高。进一步将不同剂量的pCAGGS-HA-TRIM37与报告质粒pRL-TK-Luc和pIFN-β-Luc共转染HEK293T细胞;同时将不同剂量的pCAGGS-HA-TRIM37与报告质粒pRL-TK-Luc和pISRE-Luc共转染HEK293T细胞,18 h后加入poly(I:C)处理上述各组细胞,6 h后利用双荧光素酶试剂盒检测各组细胞中IFN-β和ISRE启动子的活性。将pCAGGS-HA-TRIM37转染HEK293T细胞,18 h后加入poly(I:C)处理细胞,6 h后采用qPCR检测细胞中相关干扰素刺激基因(ISG)(ISG15、CXCL10、MX1和OAS1)相对转录水平。双荧光素酶试验结果显示,与转染空载体的对照细胞相比,过表达TRIM37显著上调细胞中poly(I:C)激活的IFN-β和ISRE启动子的活性(P<0.05),且这种上调作用具有剂量依赖性。qPCR结果显示,与转染空载体的对照细胞相比,过表达TRIM37显著上调细胞中poly(I:C)激活的ISG15、CXCL10、MX1和OAS1 mRNA的转录水平(P<0.05)。本研究首次表明TRIM37能够通过促进细胞中相应干扰素的表达抑制PRRSV复制,该结果丰富了病毒感染过程中PRRSV-宿主相互作用的网络和机制,深化了对PRRSV致病机制的认知。

TRIM37基因新剪接位点突变致Mulibrey侏儒症1例报告

目的探讨Mulibrey侏儒症的临床及基因突变特点。方法回顾分析1例经基因检测确诊Mulibrey侏儒症患儿的临床资料、基因检测及家系验证结果。结果男性患儿,12岁5个月,有身材矮小、皮肤牛奶咖啡斑、三角形脸、牙齿不齐、肝肿大,合并缩窄性心包炎。二代测序检测分析发现患儿17号染色体TRIM37基因存在一个未报道的剪接区纯合变异位点IVS13-1G>C,分别来自于父母;患儿同胞弟弟未检出该变异;参考ACMG遗传变异分类标准与指南,判定为致病性变异。结论发现1例TRIM37基因剪接位点突变导致的Mulibrey侏儒症,但尚需RNA或蛋白质功能分析确认。

miR-130a-3p靶向TRIM37蛋白缓解H2O2诱导的心肌损伤

目的研究微小RNA-130a-3p(miR-130a-3p)在H2O2损伤的HL-1细胞中的作用及其机制。方法建立H2O2诱导的HL-1心肌细胞氧化应激损伤模型,miR-130a-3p模拟物或TRIM37过表达载体被单独/共转染至H2O2诱导的HL-1细胞。荧光定量PCR检测miR-130a-3p水平,Western blot检测TRIM37表达;双荧光素酶报告基因实验确定miR-130a-3p和TRIM37的靶向关系。CCK8法检测HL-1细胞活力;TUNEL染色检测HL-1细胞凋亡;比色法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)的含量;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果H2O2刺激后HL-1细胞miR-130a-3p表达下调,TRIM37表达上调,miR-130a-3p过表达可抑制H2O2诱导的HL-1细胞活力下降,抑制细胞凋亡,减少LDH释放量。starBase网站预测和双荧光素酶报告基因实验结果证实了TRIM37是miR-130a-3p的下游靶点。miR-130a-3p上调可抑制TRIM37的表达。同时,TRIM37过表达逆转了miR-130a-3p对H2O2诱导的心肌细胞损伤的作用,降低了细胞活力,增加了LDH释放,促进了细胞凋亡。结论miR-130a-3p可通过抑制TRIM37表达从而减轻H2O2诱导的心肌损伤。

TRIM37在宫颈癌中的表达及临床意义

目的检测宫颈癌组织中TRIM37的表达水平,分析其与宫颈癌患者的临床病理因素之间的关联及对预后的影响。方法应用Western blot法检测8对新鲜的宫颈癌组织及癌旁组织中TRIM37的表达水平;免疫组化检测131例宫颈癌石蜡标本中TRIM37的表达情况,采用卡方检验分析TRIM37的表达与临床病理因素间的相关性,随访患者的生存并分析可能影响患者生存的预后因素。结果相较于宫颈癌旁组织,癌组织中的TRIM37表达水平相对较高。卡方检验结果提示:TRIM37的表达与肿瘤直径(P=0.005)、淋巴结转移(P=0.007)及FIGO分期(P=0.000)相关。生存结果提示:TRIM37表达高的宫颈癌患者,总生存时间(OS)明显少于表达低的患者(40个月VS.70个月;P=0.001)。COX回归分析显示:FIGO分期晚、淋巴结转移、TRIM37高表达均是导致患者生存预后差的相关因素。结论TRIM37在宫颈癌组织中的表达明显高于癌旁组织,且TRIM37高表达是宫颈癌患者生存的预后不良因素。

TRIM家族在肝细胞癌中的研究进展

肝细胞癌(HCC)是最常见和最致命的恶性肿瘤之一。大多数三元基序(TRIM)家族蛋白具有E3泛素连接酶活性,参与了多种细胞生物学过程的调控,包括基因表达、细胞周期进展、凋亡、信号转导和癌变等。越来越多的研究发现,TRIM家族成员在促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭中起着重要作用。本综述旨在讨论TRIM家族在HCC中的作用,为HCC寻找新的诊断及治疗靶点提供依据。