Trim6真核表达载体的构建及表达

目的:构建人Trim6的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Trim6,并观察其在HEK293T细胞中的表达。方法:提取HeLa细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增出Trim6编码区全长基因片段,克隆到pcDNA3.1(+),通过酶切、菌落PCR及测序进行鉴定。将该载体转染HEK293T细胞,用蛋白印迹检测Trim6蛋白的表达。结果:通过酶切、PCR及测序鉴定,成功构建人Trim6表达载体,该载体可以在HEK293T细胞细胞系中表达Trim6。结论:构建Trim6真核表达载体pcDNA3.1(+)-Trim6,为研究Trim6在固有免疫应答中的作用奠定了基础。

E3泛素连接酶TRIM6通过合成非锚定K48多聚泛素修饰链促进干扰素受体-IKKε信号通路介导的抗病毒反应

美国西奈山医学院的Adolfo Garcia-Sastre教授以及他的研究团队通过实验发现,E3泛素连接酶TRIM6可以通过合成K48多聚泛素链并且对底物进行非锚定的泛素化修饰参与抗病毒反应。其相关研究成果发表在2014年5月29日的Immunity杂志上。

Trim6结合并降解接头蛋白TAB2抑制NF-κB活化

观察Trim6是否与接头蛋白TAB2存在蛋白相互作用,进而影响TAB2介导的NF-κB荧光素酶报告基因的活化。在HEK293T细胞中共转染Trim6及TAB2的真核表达载体,免疫共沉淀法验证两者是否存在蛋白相互作用;用蛋白印迹法验证Trim6是否能降解TAB2;同时用双荧光素酶报告基因系统检测Trim6是否影响TAB2介导的NF-κB荧光素酶报告基因活化。免疫共沉淀结果证明Trim6与TAB2存在蛋白相互作用;蛋白印迹检测发现Trim6能显著降解TAB2,进而明显抑制TAB2介导的NFκB荧光素酶报告基因的活化。