Trim9调控视网膜Müller细胞向神经节细胞定向分化

目的:青光眼是不可逆性致盲性眼病的主要病因,目前尚无有效疗法逆转青光眼的视觉系统损害。最近发现干细胞疗法有望使受损的视网膜神经元修复和再生,但是在干细胞来源方面仍然存在较大挑战。本研究探寻一种将视网膜Müller细胞去分化为视网膜干细胞,进一步高效定向分化为视网膜神经节细胞的方案,以期为青光眼的干细胞治疗提供新的细胞获取途径。方法:用表皮细胞生长因子和成纤维细胞生长因子2诱导大鼠视网膜Müller细胞去分化为视网膜干细胞。构建Trim9过表达慢病毒(PGC-FU-Trim9-GFP),感染由Müller细胞诱导去分化而来的视网膜干细胞,通过荧光显微镜观察和流式细胞术评估病毒感染效率。用视黄酸和脑源性神经营养因子处理过表达或未过表达Trim9的视网膜干细胞以诱导其分化为神经元和神经胶质细胞。采用免疫荧光、PCR/real-time RT-PCR和蛋白质印迹法检测各细胞标志物(GLAST、GS、rhodopsin、PKC、HPC-1、Calbindin、Thy1.1、Brn-3b、Nestin、Pax6)的表达。结果:表皮细胞生长因子和成纤维细胞生长因子2处理后的大鼠视网膜Müller细胞表达视网膜干细胞标志物Nestin和Pax6。视黄酸和脑源性神经营养因子处理后的过表达Trim9的视网膜干细胞Thy1.1阳性细胞明显增多,表明其定向分化为视网膜神经节细胞。结论:本研究成功将大鼠视网膜Müller细胞去分化为视网膜干细胞,并发现Trim9可有效促进由视网膜Müller细胞去分化而来的视网膜干细胞定向分化为视网膜神经节细胞。

TRIM9基因调控牛支原体脂质相关膜蛋白诱导EBL细胞IL-1β表达的研究

为探究宿主TRIM9基因通过调控牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎牛肺(EBL)细胞释放致炎细胞因子IL-1β的相关机制,本研究通过M.bovis LAMPs刺激EBL细胞后,利用荧光定量PCR(qPCR)方法检测细胞中TRIM9和IL-1β基因的转录水平,结果显示TRIM9基因转录水平上调2.9倍,IL-1β基因转录水平上调2.5倍。构建pEGFP-C1-TRIM9荧光报告质粒并转染EBL细胞,利用共聚焦显微镜观察TRIM9在EBL细胞中的定位,结果显示TRIM9蛋白能够瞬时表达于EBL细胞浆。通过将构建的pCMV-C-HA-TRIM9重组质粒和si-TRIM9干扰质粒共转染EBL细胞,经2μg/mL M.bovis LAMPs刺激12 h后,采用qPCR和ELISA检测IL-1β的转录水平和表达情况,结果显示,与M.bovis LAMPs刺激正常EBL细胞组相比,过表达TRIM9组中IL-1β在转录水平和蛋白表达水平均无明显变化,而敲低TRIM9组中IL-1β转录水平和蛋白表达水平均显著上调(分别上调33倍和30倍)。同时利用western blot检测p65蛋白磷酸化水平,分析NF-κB信号通路激活情况,结果显示,与M.bovis LAMPs刺激正常EBL细胞组相比,TRIM9蛋白过表达组NF-κB信号通路激活水平无明显变化,而敲低TRIM9组p65磷酸化水平提高,促进NF-κB信号通路激活。综上结果表明敲低TRIM9基因能够促进M.bovis LAMPs通过NF-κB信号通路诱导EBL细胞释放IL-1β。本研究为进一步明确宿主蛋白参与抗牛支原体天然免疫应答的机制奠定基础。

TRIM9在疾病中的发生机制及研究进展

三方基序(TRIM)家族蛋白大部分具有E3泛素连接酶活性,在细胞过程中具有多种功能,包括细胞内信号传导、发育、细胞凋亡、蛋白质质量控制、先天免疫、自噬和致癌作用。TRIM9基因作为TRIM家族的一员,目前的研究不仅仅在中枢神经系统,也可通过I型IFN、NF-κB、p38等通路挥发抗病毒、抗炎、免疫、自噬以及致瘤等作用,与中枢神经系统疾病、妇科疾病、肿瘤等疾病的发生发展紧密相关。

TRIM9在疾病中的作用研究进展

三基序蛋白9(tripartite motif 9,TRIM 9)是一种大脑特有的E3泛素连接酶,与E2泛素结合酶协同工作。泛素系统是翻译后修饰的系统之一,它不仅是蛋白酶体降解靶蛋白的标志物,也是蛋白质相互作用和酶激活的调节因子。TRIM蛋白在很多生理学过程,包括细胞增殖、细胞凋亡、DNA修复、信号转导、先天免疫和致癌等中发挥重要的作用。目前针对TRIM 9蛋白的研究较少,已知该蛋白体内表达异常与多种疾病密切相关,其失调会导致癌症、免疫性疾病或发育障碍等。该文主要阐述了TRIM 9蛋白在疾病中的作用及其作为疾病诊断的新兴生物标志物之一,为其在临床领域的深入研究奠定理论基础。