In vitro porcine brain tubulin assembly inhibition by water extract from a Chinese medicinal herb,Tripterygium hypoglaucum Hutch

AIM： To investigate the effect of Tripterygium hyp-oglaucum Hutch （THH） on the assembly and disassembly process of tubulin and its possible mode of action.METHODS： In vitro porcine brain tubulin assembly assay was employed to analyze the inhibitory effects of THH at different concentrations （0.05 μg/L, 0.07 μg/L, 0.09μg/L）. Colchicine （0.0025 mmol/L, 0.0050 mmol/L, 0.0075 mmol/L） was used as a positive control.RESULTS： THH could significantly inhibit the assembly of isolated porcine brain tubulin at all tested concentrations.CONCLUSION： THH is capable of inducing aneuploidy in mammals via tubulin polymerization inhibition pathway and may pose a genetic risk to human beings.

昆明山海棠在微核实验中非整倍体毒性的研究

本文报道以小鼠着丝粒次要卫星ＤＮＡ探针ＦＩＳＨ和抗着丝粒ＣＲＥＳＴ染色，研究了可疑的非整倍体毒剂昆明山海棠（ＴＨＨ）诱导的小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞微核（ＭＮ）的着丝粒组成情况，结果ＴＨＨ（１０～６０μｇ／ｍｌ）诱导的６２１～６８４％的ＭＮ为ＦＩＳＨ阳性，３５９～４２２％的ＭＮ为ＣＲＥＳＴ阳性，较精确的ＦＩＳＨ结果显示ＴＨＨ具有较强的非整倍体诱发效应，同时认为次要卫星ＤＮＡ探针比ＣＲＥＳＴ染色更适合于ＭＮ的着丝粒检测。

昆明山海棠片对小鼠淋巴细胞体外增殖活化影响的研究

目的:研究昆明山海棠片对小鼠脾淋巴细胞增殖、活化标志CD69和CD25及细胞因子IL-4及IFN-γ的影响。方法:无菌分离小鼠脾淋巴细胞,加入不同浓度的昆明山海棠溶液,MTT法检测刀豆蛋白A刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖;流式细胞仪检测活化标志CD69及CD25;酶联免疫法检测细胞因子IL-4及IFN-γ。结果:昆明山海棠片对脾淋巴细胞增殖活化及分泌均有抑制作用。

雷公藤与昆明山海棠采样调查报告

目的:通过采样调查,获取雷公藤与昆明山海棠野生资源现状、种植、商品流通等方面的资料。方法:在全国13个样地采集样品,比较雷公藤和昆明山海棠的形态特征与生长习性的差异;调查雷公藤与昆明山海棠的野生资源现状、种植信息、民间混淆种及不同市售药材的商品特征。结果:(1)雷公藤和昆明山海棠主要采集于林下或林地边缘,光照和水分对雷公藤属植物的分布有一定的影响;(2)雷公藤与昆明山海棠的野生资源量正在萎缩,两种植物种植历史较短,种植技术水平较低;(3)雷公藤的采收加工尚缺乏规范,市售药材将雷公藤属植物的根、根茎、茎均作商品药材销售,饮片规格多样。结论:雷公藤与昆明山海棠的野生资源正在萎缩,人工种植、采收加工及市售药材的管理等方面的研究尚需规范深入的开展。

昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变

目的为探讨昆明山海棠总生物碱(alkaloids from Tripterygium Hypoglaucum Hutch,THHa)抗肺癌机制,研究THHa诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变的关系。方法应用形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测分析肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期改变。结果THHa能够诱导肺腺癌A549细胞凋亡并主要作用于细胞周期S期(S期细胞增多)。结论THHa可能通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来肺癌治疗方案的合理设计。

昆明山海棠与南蛇藤红外宏观指纹图谱研究

比较了卫矛科的昆明山海棠和南蛇藤粉末和醇提物的红外图谱特征。两种药材的粉末图中都看到草酸钙和淀粉的特征。醇提物图中都有卫矛醇的特征,但南蛇藤较为明显。两种药材醇提物的二阶导数图有明显差异,说明某些成分含量不同。南蛇藤根图的草酸钙和卫矛醇的峰形都比茎的强和尖,说明其根中草酸钙和卫矛醇的含量比茎大。由于红外法既能快速地找出药材差异,又能准确指认出卫矛醇,所以此法制定的宏观指纹图谱可作为生药鉴定的依据。

昆明山海棠根皮化学成分研究

目的:对昆明山海棠根皮进行化学成分研究。方法:利用各种色谱方法进行化学成分分离,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果:分离得到11个化合物,分别鉴定为:4'-O-(-)甲基-表没食子儿茶素(1)、3,4-二甲氧基苯基-β-D-葡萄糖苷(2)、3,4,5-三甲氧基苯基-β-D-葡萄糖苷(3)、(2R,3R)-3,5,7,3',5'-五羟基黄烷(4)、2-O-deacetyleuonine(5)、tripfordine C(6)、peritassine A(7)、hypoglaunine C(8)、雷公藤春碱(9)、雷公藤晋碱(10)、雷公藤碱(11)。结论:化合物1～6为首次从该植物中分离得到。

昆明山海棠对实验性肾炎的干预作用及机制

目的探讨昆明山海棠治疗大鼠系膜增生性肾小球肾炎模型的有效性及作用机制。方法应用兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清(ATS)复制大鼠MsPGN模型,将实验大鼠分为对照组(A组)、模型组(B组)、昆明山海棠治疗组(C组)、泼尼松治疗组(D组)、昆明山海棠与泼尼松联合治疗组(E组),分别于第1、2及4周测定肝肾功能,并采用免疫组织化学、RT-PCR技术及计算机图像分析系统,观察各组肝肾功能变化、系膜区TGF-β1蛋白及肾皮质mRNA表达以及Smad3mRNA表达的变化。结果各组在观察期间均无明显肝肾功能不良。模型组系膜区TGF-β1蛋白表达及肾皮质TGF-β1,Smad3mRNA表达增高,3个治疗组TGF-β1蛋白表达及肾皮质TGF-β1和Smad3mRNA表达均较模型组显著降低(均P<0.01),以联合治疗组降低最明显。结论昆明山海棠可能是通过抑制TGF-β1的表达,改善肾小球系膜的增殖,达到减少蛋白尿,延缓肾功能的进展。其作用机制可能通过TGF-β1/Smads通路。昆明山海棠与泼尼松有协同作用,两种药物合用治疗效果更明显,且不增加肝肾损害的发生。

基因芯片分析显示昆明山海棠有机萃取液经NF- κB及线粒体信号传导途径诱导HL- 60细胞凋亡(英文)

目的 研究中草药昆明山海棠 Tripterygium hypoglaucum( THH)有机萃取液诱导人早幼粒白血病 HL-6 0细胞凋亡过程的信号传导通道及分子机制。方法 应用流式细胞仪研究了 THH有机萃取液诱导 HL - 6 0细胞的凋亡过程 ,并应用包含 3 0 0 0人类基因与 EST的基因芯片进行基因表达差异分析。结果 基因芯片杂交结果显示有 16个基因表达发生大于 2倍的显著变化 ,这些基因同细胞生长 ,细胞周期调控 ,细胞分化 ,以及压力反应有关。部分基因在细胞凋亡过程中起关键作用 ,如 Caspase3和 Caspase8。结论 THH有机萃取液诱导 HL- 6 0细胞凋亡 ,该过程与 NF- κB和线粒体信号传导途径有关。

昆明山海棠诱导人白血病细胞HPRT基因突变的研究

为研究昆明山海棠(THH)的遗传毒性和药理作用，采用单细胞克隆培养,双向筛选计数，多重PCR扩增与电泳分析，研究了THH诱导HL－60细胞HPRT基因突变率及分子突变谱。发现随着染毒剂量的增加，细胞接种存活率逐渐下降，突变频率明显升高；THH诱发突变主要由缺失和点突变两部分组成(46.6％和53.4％)，而自发突变几乎全是点突变(92.3％)；HPRT基因突变位点在各个外显子的分布较集中于基因的3′末端，且外显子1缺失只出现于全基因缺失中，外显子7/8与9多表现为连锁缺失(71.4％)。结果提示，THH具有明确的诱导HPRT基因突变的作用，且诱发突变与自发突变的分子图谱不一样，这可能与其作用机制有关。上述发现有助于阐明THH遗传毒性作用机理。

昆明山海棠总生物碱对人结肠癌HCT116细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的观察昆明山海棠总生物碱(total alkaloids oftripterygium hypoglaucum hutch,THHta)对人结肠癌HCT116细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法18只Balb/c裸鼠建立人结肠癌HCT116细胞皮下移植瘤模型,瘤体积增至约100mm3时,随机分为对照组、THHta-1(100mg/kg)和THHta-2(200mg/kg)组,实验期间观测皮下移植瘤生长情况及裸鼠体重的变化,计算肿瘤相对增殖率及瘤重抑制率;取肿瘤组织及肝、脾、肾等行病理组织学检查;免疫组化法检测增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)在肿瘤组织中的表达。结果THHta-1组和THHta-2组裸鼠肿瘤体积和重量显著降低,平均抑瘤率为60.4%和80.2%,治疗第21天两组相对肿瘤增殖率均<40%;THHta-1组和THHta-2组肿瘤组织中PCNA阳性细胞率显著低于对照组(P<0.01)。THHta致裸鼠体重减轻但裸鼠肝、脾、肾等组织未见明显病理学改变。结论THHta抑制人结肠癌HCT116细胞裸鼠皮下移植瘤生长,具有体内抗结肠癌活性,其作用可能与下调肿瘤组织PCNA表达有关。

昆明山海棠碱诱导Jurkat淋巴瘤细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻及瘤细胞超微结构改变的研究

目的 检测昆明山海棠碱 (THH碱 )诱导JurkatT淋巴瘤细胞的凋亡效应。方法 THH碱多剂量多时间点诱导JurkatT淋巴瘤细胞细胞后 ,采用Annexin V Fluorescence标记膜外翻磷脂酰丝氨酸 (Phosphatidylserine ,PS)的凋亡细胞 ,同时荧光素PI标记坏死细胞 ,流式细胞术检测分别检测其阳性细胞率。同时采用判断凋亡发生的“金标准”———形态学观察方法观察其超微结构的改变。结果 THH碱诱导后磷脂酰丝氨酸外翻的细胞显著增加 ,有明显的时间和剂量相关性 ,超微结构观察可见大量细胞明显发生细胞体积缩小、核固缩、胞浆浓缩、凋亡小体形成等凋亡典型的形态特征。

昆明山海棠碱对Jurkat淋巴瘤细胞株的细胞周期和凋亡时相的影响

目的 探讨昆明山海棠 (THH)碱对JurkatT淋巴瘤细胞的细胞毒性、细胞周期和凋亡时相特异性的影响 ,以了解THH碱诱导细胞凋亡的机制。方法 台盼蓝染色法检测细胞生长和细胞活力 ;DNA染色法、TUNEL标记结合流式细胞术检测细胞周期和凋亡时相特异性。结果 THH碱能有效抑制Jurkat细胞增殖、细胞活力下降 ,细胞在增殖周期中被阻滞于G1 期。THH碱首先能诱导S、G2 M期细胞凋亡 ,同时能诱导G1 期细胞凋亡。结论 提示THH碱能抑制Jurkat细胞的DNA合成 ,抑制细胞增增殖 ,并可显著诱导各期相细胞发生凋亡。

昆明山海棠总生物碱对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的研究昆明山海棠总生物碱(total alkaloids of tripterygium hypoglaucum hutch,THHta)对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法检测THHta对HCT116细胞增殖的抑制作用;用倒置及荧光显微镜观察THHta作用后HCT116细胞形态的变化;流式细胞术检测THHta对HCT116细胞周期及凋亡的影响,Western bolt检测凋亡相关caspase-3及PARP蛋白表达。结果THHta能显著抑制HCT116细胞增殖,抑制率与剂量和时间呈依赖关系。THHta作用HCT116细胞48、72h的IC50值小于20μg/ml。THHta(10μg/ml)能诱导HCT116细胞G0/G1期比例增加及细胞凋亡,caspase-3活化及PARP蛋白剪切显著增强。结论THHta能显著抑制HCT116细胞增殖,并可诱导HCT116细胞G0/G1期阻滞及细胞凋亡。

昆明山海棠诱导HL-60细胞凋亡的初步研究

目的 探讨中药昆明山海棠 (THH)诱导急性白血病细胞凋亡的规律及发生机制。方法 应用染料排除法、活细胞荧光染色、DNA电泳、流式细胞仪、斑点杂交、原位杂交和荧光 Ca2 +指示剂进行检测和观察。结果 HL-6 0细胞在 THH作用下出现典型的细胞凋亡特征 ,包括细胞形态改变、DNA梯状带以及亚 G1 峰 ,并且存在明显的量效和时效关系。进一步研究表明 ,Bcl- 2基因在凋亡过程中的表达持续下调 ,细胞内游离 Ca2 + 浓度未发生明显变化。结论 THH有较强的诱导白血病 HL- 6 0细胞凋亡的能力 ,其作用机制与下调 Bcl-

昆明山海棠水提液的急性毒性研究

目的 探明昆明山海棠的急性毒性及半数致死剂量 (LD50 ) ,为临床的安全使用提供依据和资料。方法 THH水提液多剂量小鼠口服 ,观察小鼠的死亡率和脏器的感官病理改变。结果 雄性的LD50 ( 95 %可信限 )为 79g kg( 69～ 89g kg) ,雌性的LD50 ( 95 %可信限 )为 10 0g kg ( 90～ 112g kg) ;肉眼未见脏器明显的病理改变。结论 按化学物质的急性毒性分级标准 ,THH水提液属中等毒级别 ,临床使用比较安全 。

昆明山海棠总生物碱对肺腺癌A549细胞株增殖抑制作用的实验研究

目的观察昆明山海棠总生物碱(alkaloidsfromtripterygiumhypoglaucumhutch,THHa)对人肺腺癌细胞系A549体外生长的影响。方法采用MTT比色法检测THHa对A549细胞生长的抑制作用,测定其吸光度D(490)值;用倒置和荧光显微镜观察药物作用后A549细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果随着THHa浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞增殖受到抑制,抑制率逐渐升高,具有浓度和时间依赖性。流式细胞仪结果显示,随着处理浓度和作用时间的增加,细胞的凋亡率逐渐升高。结论THHa能明显抑制A549细胞增殖,并可诱导A549细胞凋亡。

昆明山海棠根与茎抗炎镇痛作用的比较研究

目的比较昆明山海棠(THH)根与茎的抗炎、镇痛作用。方法采用大鼠佐剂性关节炎模型、小鼠乙酸扭体法、小鼠热板法比较昆明山海棠根、茎提取液的抗炎、镇痛作用。结果昆明山海棠根、茎均能显著降低大鼠佐剂性关节炎模型的足趾肿胀度;能显著减少乙酸所致的小鼠扭体次数,其镇痛百分率与给药剂量呈量效关系;能显著提高热板法小鼠的痛阈值/痛阈值提高率。结论昆明山海棠根、茎均具有抗炎、镇痛作用,两者的药效没有显著差别。

THH在CIA大鼠模型中对HIF-1α的影响及其作用机制

目的:研究昆明山海棠(THH)在胶原性关节炎(CIA)大鼠模型中对于低氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,从而探讨其作用机制。方法:建立Wistar大鼠Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)模型,动态观察关节炎指数(AI),HE染色观察关节的病理改变,RT-PCR以及免疫组化法检测HIF-1α的表达。结果:给药30天后,治疗组明显抑制胶原性关节炎大鼠的足爪肿胀,降低关节炎指数,HE染色显示明显减轻滑膜增殖以及炎症反应,免疫组化以及PT-PCR显示治疗组HIF-1α明显表达降低。结论:THH治疗大鼠CIA模型具有显著疗效,研究提示THH通过HIF-1α的途径调节其下游基因的表达可能是治疗RA患者的作用机制之一。

昆明山海棠对CIA大鼠足爪组织MMP-13蛋白表达及血清和足爪组织中IL-12、IL-23和IL-37水平的影响

目的:探讨昆明山海棠(Tripterygium hypoglaucum Hutch,THH)对胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠的干预作用及可能的机制。方法:SD大鼠50只,随机分为正常组和胶原性关节炎模型制作组,用鸡Ⅱ型胶原诱导制作CIA大鼠模型。将造模成功的36只大鼠随机分为模型组、地塞米松治疗组与THH 200 mg/kg、400 mg/kg干预组。ELISA法检测CIA大鼠血清和足爪组织中促炎因子IL-12、IL-23和抑炎因子IL-37的含量;HE染色观察各组大鼠足爪组织病理学变化;Western blot法检测足爪组织MMP-13蛋白的表达;荧光标记法检测大鼠足爪组织中MMP-13的活性。结果:较模型组比较,THH 400 mg/kg治疗组大鼠体重下降明显减轻(P<0.01),血清中IL-12和IL-23的水平分别降低了28.31%和41.57%(P<0.01),足爪组织中IL-12和IL-23的含量分别下降了30.78%和39.46%,而血清和足爪组织中IL-37的水平显著升高了79.43%和75.78%(P<0.01),足爪皮下组织病理变化明显减轻,足爪组织中MMP-13蛋白表达降低了49.22%(P<0.01),且MMP-13活性明显下降。而THH 200 mg/kg治疗组大鼠上述指标无明显改善。结论:THH对CIA大鼠炎症的明显抑制作用可能与其降低促炎因子IL-12和IL-23、增高抑炎因子IL-37含量,抑制炎性细胞浸润及血管增生、下调MMP-13蛋白表达、降低MMP-13活性有关。