灵雷菌质的急性毒性实验研究

研究双向性固体发酵后灵雷菌质的急性毒性。用双向性固体发酵技术获得灵雷菌质,用Bliss法计算小鼠的半数致死量(LD5)0。结果表明各灵雷菌质组的LD50均高于雷公藤生药组,尤以3G30组最高。双向性固体发酵技术可降低雷公藤的急性毒性。

双向固体发酵后雷公藤菌质化学成分研究

目的:在前期药理实验基础上,分析双向性固体发酵后雷公藤菌质的化学成分。方法:采用高效液相色谱法和薄层色谱法,研究雷公藤药材和不同发酵时间药性菌质的化学成分动态变化规律。结果:药性菌质的雷公藤甲素含量低于原药材低;分别在218nm和250nm波长下,高温灭菌药材和发酵30d的药性菌质的液相图谱有3处明显的变化;乙酸乙酯提取物的薄层层析发现有一蓝色斑点为发酵后新增成分,而甲醇提取物薄层层析发现有2个斑点随发酵时间的延长含量降低。结论:雷公藤经药用真菌发酵后化学成分发生变化,其中一些化学成分的变化规律与药理实验结果存在相关性,可作为发酵终点判断标准。

灵雷菌质提取物体内抗肿瘤作用的实验研究

采用小鼠肉瘤(S180)移植性肿瘤模型,观察灵雷菌质乙酸乙酯部位、正丁醇部位、石油醚部位和水部位提取物的肿瘤抑制作用,并测定小鼠的胸腺指数及脾脏指数。结果表明所有的提取物都呈现出明显的抑瘤效果,抑瘤率均大于35%,其中部分正丁醇部位的抑瘤率达到了68.88%。抑瘤效果由弱至强的顺序为石油醚部位<水部位<乙酸乙酯部位<正丁醇部位,而胸腺指数与脾脏指数则显示只有乙酸乙酯部位组有较明显的免疫抑制效果。双向性固体发酵可降低雷公藤的毒性,尤其正丁醇部位和水部位的毒性可能较弱。

基于灵芝双向固体发酵雷公藤减毒持效的研究

传统中药雷公藤具有抗炎和免疫抑制的作用,但因毒性强而极大地限制了其临床应用。以灵芝为药用真菌,采用双向固体发酵技术发酵雷公藤,并对发酵过程中得到的灵雷菌质进行抗炎活性和肝毒性评价。结果表明,接种量10 mL/100 mL、发酵30天得到的灵雷菌质(N2-G30)在3.75μg/mL的质量浓度下表现出减毒持效的作用,相比于雷公藤,可抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7细胞释放促炎因子TNF-α和IL-6,并且可减轻对人正常肝细胞L02增殖的抑制作用。通过液相色谱-质谱联用(LC-MS)分析雷公藤发酵前后主要成分的含量变化,结果显示,与发酵前相比,发酵后雷公藤甲素、雷公藤红素、雷酚内酯的含量增加,雷公藤内酯甲的含量减少,这些成分的含量变化与N2-G30的减毒持效作用有关。

灵芝双向固体发酵雷公藤后菌质化学成分变化初步研究

目的对灵芝双向固体发酵雷公藤所得菌质化学成分的变化进行初步研究,针对性地分离并鉴定出发酵过程中有明显变化规律的化学成分。方法采用高效液相色谱法对雷公藤药材及灵芝双向固体发酵雷公藤所得到的不同时间点灵雷菌质的醋酸乙酯提取物进行化学成分分析,采用溶剂法、柱色谱法、高效液相制备法、核磁共振等对HPLC色谱图中部分具有明显变化规律的化学成分进行提取分离、结构鉴定。结果与雷公藤生药相比,发酵所得菌质的液相色谱图具有明显规律性的改变;针对性地分离并鉴定出4个化合物,分别为12-甲氧基雷酚萜(1)、雷酚萜(2)、邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP,3)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP,4);其中菌质中化合物DIBP、DBP的量随发酵时间的延长而降低。结论灵芝双向固体发酵雷公藤的过程中,菌质中DIBP、DBP等邻苯二甲酸酯类有毒化合物的量降低。

灵芝双向发酵雷公藤的解毒持效作用

目的研究灵芝双向发酵对雷公藤的解毒持效作用。方法运用双向发酵工程的原理和方法获得灵雷菌质(G30),用常规急性毒性试验、免疫学试验、自身免疫疾病动物模型试验等进行G30的毒性和药效学研究。结果G30的LD_(50)较雷公藤生药组显著提高,并且能抑制小鼠T、B淋巴细胞的增殖和血清溶血素的分泌;G30降低阿霉素诱导的肾炎大鼠的24 h尿蛋白量,同时改善肾炎大鼠的多项生化指标,且对各脏器的毒性要小于雷公藤生药;G30缓解佐剂性类风湿关节炎大鼠的足肿胀度,并改善大鼠的生存状况。结论灵芝与雷公藤构成发酵组合所产灵雷菌质G30毒性降低并仍然保持免疫抑制作用,对佐剂性类风湿关节炎及阿霉素诱导的大鼠肾炎均有一定的治疗作用。显示双向发酵对雷公藤解毒持效是一条可行的途径。

药用真菌新型(双向性)固体发酵工程对雷公藤解毒持效的初步研究

目的:探索对有毒中药雷公藤缓解毒性保持药效的新技术。方法:应用"药用真菌新型(双向性)固体发酵工程"(双向发酵)的原理和方法,以雷公藤为药性基质、多种药用真菌为发酵菌种,构成多组发酵组合,在一定条件下进行固体发酵,取得不同药性菌质,用所建"发酵组合三层优选法"进行发酵菌种优选,并对当选优秀发酵组合用"发酵过程成分、药效动态比较法"初步建立它的发酵工艺。结果:已筛选出具有解毒并保持免疫抑制作用的2种发酵真菌即灵芝、槐耳和适当的发酵工艺。结论:药用真菌双向性固体发酵工程可用于研究开发解毒持效的雷公藤菌质。

灵雷菌质对大鼠的肝脏毒性及对Nrf2蛋白表达的影响

目的研究雷公藤固体发酵产物灵雷菌质的肝脏毒性。方法 SD大鼠随机分为对照组、灵雷菌质组、雷公藤组,灵雷菌质组及雷公藤组分别ig给予灵雷菌质、雷公藤95%乙醇提取物2.037 5、0.64 g/kg,每日给药1次,连续给药30 d。给药结束后检测大鼠血液生化指标,观察大鼠肝组织病理学改变,Western blotting检测大鼠肝组织中Nrf2、P38蛋白表达。结果肝组织病理学观察可见,灵雷菌质组大鼠肝组织仅见中央细胞坏死,周边细胞局部胞质溶解,出现细胞凋亡;雷公藤组肝组织可见小片状坏死,核凋亡,肝细胞内胶原纤维明显,细胞溶解坏死。与对照组相比,灵雷菌质组、雷公藤组大鼠丙氨酸转氨酶(ALT)水平、核蛋白Nrf2和总蛋白P38表达升高,但灵雷菌质组的上述指标比雷公藤组显著下降(P<0.05)。与对照组相比,灵雷菌质组、雷公藤组大鼠白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)均下降(P<0.05),而灵雷菌质组ALB、TP下降幅度较雷公藤组小(P<0.05)。结论灵雷菌质的肝脏毒性较雷公藤低,其毒性机制可能与激活P38 MARK和Nrf2-ARE信号通路、启动抗氧化作用有关。