Tripterygium Wilfordii： Structure，Chemistry and Activityof Male Antifertility Constituents

ＴｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍＷｉｌｆｏｒｄｉｉ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＭａｌｅＡｎｔｉｆｅｒｔｉｌｉｔｙＣｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓＳＡＭａｔｌｉｎ；ＡＢｅｌｅｎｇｕｅｒ；ＶＥＳｔａｃｅｙ；ＳＺＱｉａｎ；ＹＸｕ；ＪＷ...

The Effect of Tripterygium Wilfordii Monomer T4 on Rat Spermatid Nuclear Protein Transition

Rat testis elongating spermatids and epididymal sperms were collected after 7 weeks of treatment with Tripterygium wilfordii monomer T4.Total nuclear basic protein(TNBP)was extracted from the elongating spermatid nuclei and the sperm nuclei isolated by sonication.Polyacrylamide gel electrophoresis has been used to separate the TNBP and individual proteins were quantified by scanning microdensitometry.It was found that the content of protamine was reduced and the TH(Total Histones)/RP(Rat Protamine)ratios were increased following treatment in the testis elongating spermatids, and same result was found in the epididymal sperms.These results suggest that the interruption of nuclear protein transition of testis spermatids induced by T4 might cause aberrant epididymal sperm nuclear protein and lead to infertility.The relationship between protamine and fertility was discussed.

雷公藤抗炎免疫及抗生育活性成分的筛选 I.从雷公藤总甙(T_Ⅱ)中分离8个组分的筛选结果

雷公藤总甙(TII)中分离出TI_1～88个组分,其抗炎作用与抗体生成抑制作用在TI_2～4组分中重叠,在TI_1,5组分中分离,提示存在单向作用的单体.8个组分均有不同程度的抗生育活性,与抗炎免疫的药理活性似不可分离.

雷公藤制剂对雄性布氏田鼠的不育作用

采用强制给药和自由取食2种方式,研究了雷公藤制剂对发育期成体雄性布氏田鼠不育作用,给药剂量分别为80mg/kg、120mg/kg和160mg/kg。结果表明,120mg/kg和160mg/kg剂量使睾丸脏器系数下降,但剂量组间差异不明显(F(3,21)=2.197,F0.05=3.07,P>0.05)。不同剂量能够对附睾中精子数量和活力产生显著影响(F(3,21)=17.305,F0.05=3.07,P<0.05),且随药物剂量的升高精子密度与精子活力均呈下降趋势。精子畸形率亦随药物剂量的增加而增加。80mg/kg及其更高的剂量使附睾出现萎缩并造成睾丸组织损伤。120mg/kg剂量可减少布氏田鼠平均胎仔数及降低繁殖率。给药后的繁殖后代未发现畸形幼仔。雷公藤制剂的最佳使用剂量介于120～160mg/kg。自由取食与连续强制给药两种方式对雄性布氏田鼠的作用差异不显著。

雷公藤单体对大鼠睾丸间质细胞及支持细胞毒性与其抗生育作用不相关

本文用体外培养的睾丸间质细胞和支持细胞筛选了２２种从雷公藤根、皮中分离、纯化的单体，并选择其中对两种细胞杀伤作用强、弱不同的化合物ＴＷ－９，ＴＷ－５，ＴＷ－２８和ＴＷ－２７进行抗生育试验以及体外杀精试验。结果发现对两种细胞毒性作用最弱的ＴＷ－１９对大鼠有明显的抗生育作用；而毒性作用较强的ＴＷ－５，ＴＷ－２８和最强的ＴＷ－２７则无明显的抗生育作用。然而这四种化合物的体外杀精强度则依次为：ＴＷ－２７，ＴＷ－５，ＴＷ－１９，ＴＷ－２８。与它们的抗生育作用不相关。

雷公藤多甙及其单体T_4对大鼠精子发生影响的初步观察

雷公藤多甙(GTW)抗生育作用部位主要在睾丸内,可致圆形精子细胞向长形精子转变过程受阻,附睾中出现大量头部异常的精子,精子头尾分离和贮积大量不活动精子。从雷公藤多甙分离的有效抗生育单体T_4,抗生育剂量为GTW的1/200,主要作用于附睾精子,对睾丸形态结构及精子形态的影响不明显。提示T_4作用部位较理想。

雷公藤单体T_4、T_7、T_（15）及雷公藤内酯醇对大鼠精子核蛋白组型的影响

大鼠喂服雷公藤单体Ｔ_４、Ｔ_７、Ｔ_（１５）及雷公藤内酯醇（甲素）７周后，取附睾精子，用超声法分离精子核，从核提取总碱性蛋白（ＴＮＢＰ）。经电泳扫描分析，发现精子ＴＮＢＰ含量下降，总组蛋白（ＴＨ）／精核蛋白（ｐｒｏｔａｒｍｉｎｅ）比值升高，精核蛋白含量下降，提示以上雷公藤单体和甲素使精子细胞核蛋白组型转换受阻是导致大鼠不育的重要原因之一。

雷公藤多甙对雄性黄毛鼠、小白鼠抗生育试验初报

用雷公藤多甙按 30 mg· kg- 1剂量对雄性黄毛鼠进行灌胃染毒 ,以药后 14 d效果最好 ,对精子数、A级精子及精子存活率的抑制率分别为 4 4 .3%、 5 7.9%、 4 6 .4 % ;第 4 2 d效果减弱 ,分别是 10 .8%、 12 .0 %、 2 6 .1% ;第 84 d基本丧失抗生育作用。说明雷公藤多甙对黄毛鼠精子发生有显著的抑制作用。睾丸组织切片表明 ,雷公藤多甙能破坏睾丸组织 ,使生精细胞数量及活力下降 ,抑制精子的形成及成熟。用雷公藤多甙按 30 mg· kg- 1和 5 0mg· kg- 1两种剂量对雄性小白鼠进行灌胃染毒 ,以药后 14 d抗生育效果最佳 ,小白鼠产仔率均下降 32 .6 % ;两种剂量处理差异不显著 ,均与对照处理存在极显著差异。适口性测定结果表明 ,黄毛鼠对雷公藤多甙混合剂摄食系数为 0 .2 6。

雷公藤单体T4对大鼠变态期精子细胞核蛋白转换的影响

大鼠喂服雷公藤单体Ｔ４７周后，取睾丸分离长形精子细胞核，取附睾分离精子核，提取总碱性核蛋白（ＴＮＢＰ），经电泳扫描后分析，发现长形精子细胞核ＴＨ／ＲＰ（总组蛋白／大鼠精核蛋白）比值升高，糖核蛋白含量下降，附睾精子核碱性蛋白也发生类似的改变，表明睾丸变态期精子细胞组蛋白一精核蛋白取代反应受阻，进而导致附睾精子核蛋白异常，这可能是Ｔ４导致大鼠不育的重要原因。文中还对精核蛋白与生育力的关系予以讨论。

雷公藤制剂对雄性长爪沙鼠繁殖功能的影响

为了检测雷公藤制剂对长爪沙鼠繁殖功能的影响,根据预实验结果,将40只雄性长爪沙鼠分为40mg/kg连续用药4周组(n=16)、100mg/kg一次给药组(n=10)和1% CMC灌胃对照组(n=14)处理,6周后剖检,比较睾丸、附睾的脏器系数、精子密度、精子活力、精子形态和繁殖率等指标。结果表明40mg/kg连续用药组鼠的睾丸、附睾脏器系数与对照组比较差异显著;精子密度、精子活力和活精子百分率显著下降;精子畸形率显著上升;繁殖率显著下降(df=1,P<0.05)。100mg/kg一次给药组除附睾脏器系数显著下降、精子畸形率显著上升外,其它指标与对照组无明显差异。该药对长爪沙鼠连续作用4周后不育效果明显,并且具有致畸性,在药物有效范围内,高浓度一次性给药方式不如较低浓度连续多次给药效果显著。

抗生育剂量雷公藤对小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α生成的影响

观察两组不同低剂量雷公藤糖浆对雄性小鼠生殖功能和腹腔巨噬细胞TNF-α生成能力的影响,以合笼试验为指标观察到两组剂量雷公藤糖浆均有抗雄性生育作用,同时观察到对小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α生成能力无明显影响(P>0.05)。上述结果提示雷公藤在有效抗生育作用剂量下对小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α生成能力无明显影响。

抗生育剂量雷公藤对小鼠脾NK细胞活性的调节作用

采用银染和MTT的方法,分别观察不同剂量雷公藤对雄性小鼠的附睾尾精子变化和脾NK细胞活性的影响。结果显示:雷公藤实验组附睾尾精子多为头部异常,大部分出现头尾分离和折断现象,精子活率及密度均明显低于对照组。雷公藤对小鼠脾NK细胞活性存在着明显的剂量效应关系,多甙组和雷公藤糖浆大剂量组对NK细胞活性抑制较明显,而中剂量组和小剂量组则对NK细胞活性影响不明显。结果提示:雷公藤糖浆在有效抗生育剂量下对小鼠脾NK细胞活性无明显影响,为重新评价雷公藤的药用价值及今后的临床应用提供了有意义的实验数据。

雷公藤抗生育成分的分离与生物测定

动物实验表明,卫矛科植物雷公藤粗提物的有效组分雷公藤多甙(GTW)可致雄性大鼠产生可逆性不育。因溶剂提取法分离雷公藤多甙片发现,所得到的水溶性部分含有抗生育活性成分。我们通过系统分组分离与生物测定结合的方法,采用反相高效液相色谱技术,对该水溶性部分进一步分离,以甲醇/乙腈/水为溶剂进行梯度洗朊,从中分得两个具有抗生育活性的单体,经光谱分析鉴定,分别为雷公藤乙素和雷醇内脂,两者均属二萜类化合物。

雷公藤抗雄性生育成分的研究

卫矛科植物雷公藤的粗提物雷公藤多甙可致雄大鼠可逆性不育。采用系统分级分离与生物活性测定结合的方法，通过制备高效液相色谱从雷公藤多甙中分离出雷公藤甲素、雷公藤乙素和雷公藤氯丙酯醇三个具有抗生育活性的成分。

雷公藤总甙对大鼠生精作用及主要脏器的影响

给大鼠每日喂服雷公藤总甙(TⅡ)10mg/kg 7、13周和20mg/kg 4、10周,结果其精子发生及曲细精管晚期精子细胞碱性核蛋白的替代和转换均受到明显抑制;附睾尾精子数目明显减少,残存精子畸变,头部膨大,头颈断裂,颈部断端高度卷曲;精子线粒体酶反应颗粒减少。心、肝及肾多种酶活性与对照组比较无明显差别,但3种组织的SDH及肾小管中的ACP显著增强,近曲小管刷状缘的ALP活性轻微减弱,提示3种主要器官的轻微改变是机体对TⅡ毒性的一种适应性反应。

雷公藤多甙片与超临界萃取物对小鼠抗生育研究

中药雷公藤具有抗炎、抗肿瘤、抗菌等活性,但也因其复杂的成分中含有部分具有抗生育毒副作用的物质而导致药物推广的限制。本实验将雷公藤多甙片与雷公藤CO_2超临界萃取物进行毒性对比。采用染毒成年昆明小鼠,称量其睾丸湿重,计算脏器系数,常规HE染色后观察睾丸的病理改变。收集血清,用放射免疫法测量血清中FSH、LH、T的含量。实验发现雷公藤多甙片血清LH水平明显高于正常组,初步认为是睾丸间质细胞受损所致。从HE常规染色的结果看,雷公藤多甙片各剂量组的曲细精管受损严重。雷公藤CO_2超临界萃取物高剂量组除血清LH水平高于对照组外,其余实验未见明显异常,He染色观察正常。给药40 d后雷公藤多甙片各剂量组小鼠受孕率均为0%,而超临界萃取物各组与对照组相比却无显著性差异。这充分说明了雷公藤CO_2超临界萃取物的抗生育毒性远低于雷公藤多甙片。

雷公藤单体(T_4)与棉酚抗生育机理及毒性作用的比较

喂服雷公藤单体(T_4)0.05mg/kg/d6周后,大鼠生精作用及晚期精子细胞碱性核蛋白转换与替代受到抑制程度均较喂服棉酚组明显。实验组附睾上皮腔缘部γ-GT,ALP出现成簇的阳性沉淀。附睾尾部精子头尾断裂,断端卷曲,尾部纵行粗纤维脱位,线粒体LDH,LDH-X,MDH受到抑制。T_4对肾脏、肝脏各种酶虽有轻度影响但没有引起酶活性明显的变化。T_4对内脏的影响较棉酚轻,但致雄性不育的效果比较明显。本研究提示T_4是一种有发展前途的男性抗生育药物。

雷藤氯内酯醇与棉酚雄性抗生育作用的比较研究

雷藤氯内酯醇(T_4)系从雷公藤中分离出来的具雄性抗生育作用的单体。棉酚为我国首创男用节育药,但存在少数服药者出现低血钾及停药后精子产生不可恢复现象,影响推广使用。本研究对T_4和棉酚的雄性抗生育作用及毒性进行比较,结果表明T_4作用环节较理想,主要作用在附睾精子,引起精子头尾大量分离,对睾丸曲细精管影响较小。因此在停药后能迅速恢复生育能力,而棉酚主要作用于曲精细管精母细胞阶段,所以恢复生育较慢,动物增重受阻,毒性较T_4显著。因此对T_4深入研究,可望发展成男用节育药。