Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA

【目的】建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法,为进行后续的分子生物学研究奠定基础。【方法】采用Trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,对甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA提取方法进行优化。【结果】与吸取0.4mL上清液相比,吸取0.2mL上清液的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230值分别在1.95～2.00和2.11～2.44,所获得的总RNA纯度较高。沉淀漂洗两次的OD260/OD230值(2.11～2.47)明显高于沉淀漂洗1次的总RNA OD260/OD230值(1.01～1.61),总RNA纯度较高。经异丙醇沉淀所得的各材料的总RNA28S、18S和5S谱带清晰,无拖尾现象,总RNA完整性较好;LiCl沉淀法的RNA条带较模糊粘连,5S条带明显弥散,总RNA产率相对较低。以Trizol-异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增,所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强,无特异扩增,目的片段长度为153bp。【结论】改良Trizol-异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好、纯度和产率高,适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA。

酵母破壁酶和蜗牛酶辅助TRIzol试剂法提取酿酒酵母总RNA

该研究以酵母破壁酶、蜗牛酶破碎酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞壁,再使用总核糖核酸(RNA)提取试剂(TRIzol)法提取酵母总RNA,通过对总RNA进行浓度与纯度的分析,比较酶处理对RNA提取的影响。结果表明,酵母破壁酶的最佳提取条件为加酶量37.5μL,提取温度27℃,提取时间15 min。在此最佳提取条件下,提取RNA质量浓度为1079.05 ng/μL,A260 nm/A280 nm为2.10,A260 nm/A230 nm为2.15;蜗牛酶的最佳提取条件为加酶量30 mg/mL,提取温度37℃,提取时间30 min。在此最佳提取条件下,提取RNA质量浓度为1673.39 ng/μL,A260 nm/A280 nm为1.99,A260 nm/A230 nm为1.81。结果显示,酵母破壁酶的提取效果优于蜗牛酶。

Trizol试剂法提取金鱼藻总RNA的技术方法改进

Trizol试剂法是一种简单有效的总RNA提取方法,由于基因的表达在不同植物或同种植物的不同组织中具有特异性,同种方法很难应用到所有植物中来获得高质量的总RNA,而由于水生植物叶片通常较薄,沉水叶片又常裂为丝状等特点。和陆生植物相比,在提取水生植物总RNA的过程中,经常出现RNA降解的问题。文章以金鱼藻为实验材料,对Trizol法提取金鱼藻总RNA过程中的若干关键步骤进行了探索,优化了适用于提取金鱼藻总RNA提取的实验方法,得到了可用于转录组分析的高得率、纯度好和完整性高的总RNA,为深入开展后续分子生物学研究提供基础保障。

一种高效同时提取微量组织中总RNA、DNA和蛋白的技术方法的改进

目的改进传统Trizol法,以至能从微量组织样品中提取高质量RNA并同时提取基因组DNA和总蛋白。方法用改良后的Trizol法提取小鼠肝脏组织总RNA、基因组DNA以及总蛋白,并与传统Trizol法提取总RNA、商业化试剂盒提取基因组DNA和RIPA裂解Buffer提取总蛋白的方法进行比较。结果改良Trizol法提取小鼠肝组织RNA的得率为3.64μg/mg,传统Trizol法为1.95μg/mg,平均D260/D280比值为2.1和2.01;改良Trizol法能够得到比传统Trizol法更完整的RNA,琼脂糖电泳图谱中28S/18S的比值更接近2:1。改良Trizol法与商业试剂盒相比,提取所得的基因组DNA尽管在得率上有较明显差距,分别为0.49μg/mg和1.78μg/mg,但仍保持较好的纯度。改良Trizol法提取所得蛋白的平均得率为RIPA Buffer裂解法的50%～60%,经过SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色法验证,并无明显蛋白丢失。结论改良Trizol法可以同时提取组织的总DNA、RNA与总蛋白,相比传统Trizol法提取总RNA更高效、质量更优;相比商业化试剂盒提取基因组DNA更快捷、更经济;相比RIPA Buffer裂解法提取总蛋白在小分子蛋白的保留中更好。

罗布麻总RNA提取方法比较研究

以Trizol法、改进SDS法及RNA plant plus Reagent试剂盒法提取罗布麻的总RNA,并通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测对其提取效果进行比较分析,以筛选出罗布麻总RNA最佳提取方法。结果表明:Trizol法无法有效获得罗布麻总RNA,有较为显著的降解现象;改进SDS法提取的罗布麻RNA总量较少、浓度低,且试验重复性差;RNA plant plus Reagent试剂盒法提取的RNA质量好,纯度高,完整性强,可直接作为后续相关分子生物学试验材料。

3种方法提取湖北钉螺RNA的比较

目的比较改良SDS法、TRIzol法和CTAB法对湖北钉螺RNA的提取效果,以期获得一种经济、高效,适于湖北钉螺大样本RNA的制备方法。方法采用改良SDS法、TRIzol法和CTAB法分别提取湖北钉螺RNA,利用核酸蛋白分析仪测定RNA浓度和纯度,通过浓度计算产率,纯度以A260/A280、A260/A230表示;以1%琼脂糖凝胶电泳进一步检验RNA完整性;以β-acting为目的基因进行RT-PCR,验证提取的RNA能否满足RT-PCR的实验要求。结果经方差分析,3种方法的产率差异具有统计学意义(F=16 895.85,P<0.01);经LSD检验,改良SDS法产率较高,其次为TRIzol法,CTAB法产率较低。CTAB法提取的RNA纯度较高,A260/A280、A260/A230分别在1.8~2.0和2.0~2.2之间,其余两种方法的A260/A230均低于2.0。改良SDS法提取的RNA完整性较好,电泳结果显示28S、18S和5S条带完整清晰,条带之间无明显弥散现象;而TRIzol法未见28S条带,CTAB法仅见18S条带。3种方法提取的RNA经RT-PCR均能扩增出阳性条带。相比另外两种方法,改良SDS法成本低、耗时少。结论改良SDS法是一种经济、高效,适于湖北钉螺大样本RNA的制备方法。