IgG型意外抗体鉴定用试剂盒(固相凝集法)的研发

目的研发IgG型意外抗体鉴定用试剂盒(固相凝集法)。方法琥珀酰亚胺溶液包被微孔板后,将谱细胞悬液加入微孔板中制得红细胞单层,随后用1×PBS(pH7.40)裂解红细胞单层形成细胞膜单层;将低温干燥保护液加至细胞膜单层表面,4℃干燥后制成试剂盒反应板;定期用制备的试剂盒测试低效价IgG抗-E和抗-Fy a,以评估试剂盒稳定性;对72例意外抗体阳性血浆标本和152例正常血浆标本采用研发的试剂盒和微柱凝胶卡进行抗体鉴定试验,计算灵敏度和特异度指标,采用卡方检验分析,以评估试剂盒的检测性能。结果琥珀酰亚胺包被的微板能够较好的固定裂解后的红细胞膜;低温干燥保护液对膜单层能够形成较好的保护作用;在各个观察点内,低效价的IgG抗-E和抗-Fy a均能被准确检出;与微柱凝胶卡相比,72例意外抗体阳性的标本,固相法试剂盒正确检出70例,同时纠正1例凝胶卡漏检的抗-JK a;152例意外抗体阴性标本,2种试剂分别正确检出149例和152例。两者的灵敏度为97.22%(70/72)vs 98.61%(71/72),特异度为98.02%(149/152)vs 100%(152/152),配对卡方检验结果表明,2种试剂盒的检测结果差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论采用固相凝集法研发的试剂盒,适用于IgG型意外抗体的鉴定。

市售酶抑制法农残速测试剂盒对多种农药的敏感性研究

用市售酶抑制法农残速测试剂盒进行农药残留快速检测,具有操作简便、出结果快、对检测人员技术水平要求低等优点,在日常农药残留监管中应用广泛。酶抑制法农残速测,是基于有机磷和氨基甲酸酯类农药对动物体内胆碱酯酶抑制作用的原理。

奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的临床应用评估

为了评估商品化的奶牛乳房炎病原微生物20联核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)(后文简称为“检测试剂盒”)在临床应用中的适用性,本试验采用传统细菌分离培养、检测试剂盒、16S rRNA基因扩增子测序和药物敏感性试验对宁夏回族自治区9个牧场155份奶牛乳房炎奶样分别进行菌株鉴定和耐药性检测,并将检测试剂盒与其他3种检测结果进行比较和分析。结果显示,检测试剂盒与传统细菌分离培养在病原菌检出情况上基本保持一致,均主要检出了大肠杆菌、芽孢杆菌属和凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)等;检测试剂盒与16S rRNA基因扩增子测序结果在菌属组成上一致性较高,均主要检出了假单胞菌属、链球菌属和葡萄球菌属等;药物敏感性试验结果显示,检出率较高的66株病原菌分离株对β-内酰胺类抗菌药物的耐药率普遍偏高;奶样中β-内酰胺酶耐药基因blaZ的检测试剂盒检出结果与同一奶样中分离菌株的药物敏感性试验结果一致率达58%(7/12)。综上所述,该检测试剂盒具有较高的准确度和病原覆盖率,可为牧场奶牛乳房炎主要病原的快速诊断和耐药基因(blaZ)监测提供有效的技术支持,从而降低抗菌药物的使用量,以减少牧场经济损失。

国标法和新型试剂盒法测定维B_(12)含量的方法比较

比较传统国标方法和新型试剂盒方法测定维B_(12)的含量差异。采用国标GB 5413.14—2010和试剂盒方法测试婴儿配方乳粉定量分析质控样品中维B_(12)的含量,对结果进行方法专属性、标准曲线线性、精密度、准确性和稳定性比较。结果表明,2种方法的专属性良好,标准曲线线性良好,相关系数R>0.99,符合GB/T27404—2008《实验室质量控制规范》的要求;2种方法测得定量分析质控样品中维B_(12)的含量均在满意范围内且接近质控样品特性值(5.09μg/100 g),2种方法的相对标准偏差<7.5%;精密度试验及稳定性试验中,2种方法的相对标准偏差均<5%。传统国标法与试剂盒法均稳定准确,其对维B_(12)的含量测定结果差异性不显著,可根据实验室的经济能力及实验室自身条件选择适当的方法进行测试。

核酸提取试剂盒对饲料中牛羊源性成分检测的影响

实时荧光聚合酶链反应法(荧光PCR法)是目前饲料中牛羊源性成分的定性检测中常用方法之一。为了熟练操作和掌握这个方法,使得实验室工作人员在做饲料中牛羊源性成分定性这类检测时能有一个清晰的认识,通过核酸提取试剂盒的选取及平行实验比对,对此进行了阐释。

市售酶抑制-比色法农残速测试剂盒对多种农药敏感性的研究

酶抑制法农药残留快速检测试剂盒是基于有机磷和氨基甲酸酯类农药对动物体内胆碱酯酶的抑制作用研制的。进行检测时,在胆碱酯酶及其底物(乙酰胆碱)的共存体系中加入农产品样品提取液,当样品中含有不同浓度的有机磷或氨基甲酸酯类农药时,酶活性受到不同程度抑制。

改良的一步热酚法及Trizol试剂盒提取组织中RNA的比较

目的 :比较改良的一步热酚法及Trizol试剂盒提取组织中RNA的差别。方法 :应用两种方法分别提取 2 0例兔肝脏的总RNA ,对所提RNA的产率、纯度及完整性进行鉴定。结果 :对比两种方法所提的RNA的产率、纯度及完整性 ,均无显著性差异 ,且RT_PCR产生均扩增出了 β_actin的目的条带。 结论 :采用改良一步热酚法较之Trizol试剂盒更具有简便经济的特点 。

国标法与试剂盒法检测脆肉鲩中羟脯氨酸含量的比较

比较国家标准GB/T 9695.23-2008《肉与肉制品羟脯氨酸含量测定》和试剂盒法定量检测脆肉鲩中羟脯氨酸含量的差异。采用试剂盒法和国标法测定脆肉鲩中羟脯氨酸含量,通过相对标准偏差(RSD)来比对两种方法的精密度,通过加标回收实验比对方法准确度。由精密度与准确度实验结果可知,国标法与试剂盒法的相对标准偏差分别为2.34%和7.75%,加标回收率分别为92%~109%和64%~81%。试验结果表明,相对于试剂盒法,国标法精密度和准确度更高,更适合用于检测脆肉鲩的羟脯氨酸含量。

试剂盒法与传统微生物法检测生物素比对试验

目的:评估生物素检测试剂盒检测结果的准确性,以便用试剂盒法来代替传统微生物法检测生物素,从而提高检测效率。方法:选取市售添加了生物素的乳粉样品和一个生物素质控样品,分别采用两个不同品牌的生物素检测试剂盒法和传统微生物法(GB5009.259-2016)同时进行检测,对比结果。结果:两个品牌的生物素检测试剂盒检测数据与国标法检测数据偏差均小于10%,且质控样检测均在标准范围内。结论:本次比对的两个品牌的生物素检测试剂盒法可以代替传统微生物法进行生物素检测。

Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA

【目的】建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法,为进行后续的分子生物学研究奠定基础。【方法】采用Trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,对甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA提取方法进行优化。【结果】与吸取0.4mL上清液相比,吸取0.2mL上清液的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230值分别在1.95～2.00和2.11～2.44,所获得的总RNA纯度较高。沉淀漂洗两次的OD260/OD230值(2.11～2.47)明显高于沉淀漂洗1次的总RNA OD260/OD230值(1.01～1.61),总RNA纯度较高。经异丙醇沉淀所得的各材料的总RNA28S、18S和5S谱带清晰,无拖尾现象,总RNA完整性较好;LiCl沉淀法的RNA条带较模糊粘连,5S条带明显弥散,总RNA产率相对较低。以Trizol-异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增,所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强,无特异扩增,目的片段长度为153bp。【结论】改良Trizol-异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好、纯度和产率高,适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA。

适合转录组测序的葡萄叶片总RNA试剂盒提取法的改进

RNA试剂盒法是获取植物高质量RNA样品的常用技术,针对3种常见RNA提取试剂盒在红地球葡萄叶样品RNA提取效果进行评估和优化,以期找到适合红地球葡萄叶片RNA表达谱测序需求的高质量RNA提取策略。试验依据3种试剂盒推荐时间和条件进行RNA提取,并对时间等条件进行优化,比对了优化前后RNA质量。结果显示,试剂盒经优化后的方法提取的RNA收率高,完整性好,OD260/OD280在1.8-2.2之间,OD260/OD230大于2,28S与18S条带清晰完整,RNA-Seq测序质量及基因覆盖度符合要求。在红地球葡萄叶片上的RNA提取结果表明,延长提取试剂与样品的接触时间操作可以显著提高RNA提取质量(纯度/完整性)。

国标法和试剂盒法对婴幼儿食品中生物素质量分数的测定

比较GB5413.19-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定》中微生物法和商品化生物素检测试剂盒法对婴幼儿食品中生物素质量分数测定的差异性,为相关企业和检测机构提供有益参考.两方法均是利用植物乳杆菌（LactobaciLLuspLantarum）对生物素具有敏感性的特点,通过测定菌株的生长变化来反映样品中生物素质量分数.结果表明,国标法测定标准曲线在生物素质量分数为（0.01～0.1）× 10-2 μg/g范围内具有良好的线性关系（R2=0.9963）,试剂盒法在（0.08～0.72）×10-2 μg/g范围内线性良好（R2=0.9747）.以这两种方法对5份婴幼儿食品中生物素质量分数进行检测比较,两者均能有效测定生物素质量分数,国标法检测最大RSD％为2.836,而试剂盒法最大RSD％为9.777,但均不影响最终结果判断.两种方法均适合于婴幼儿食品中生物素的测定,国标法相对于试剂盒法有更好的稳定性,但操作过程较为繁杂;而试剂盒法的检测周期短,适合于大批量检测工作.

试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉中叶酸含量

目的建立试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉中叶酸的含量。方法以Tris缓冲液稀释样品,加入冻干的干酪乳杆菌测试菌球,采用Costar 3599细胞培养板培养,使用酶标仪测定结果。幵同时检测了28批次婴幼儿乳粉叶酸的含量。结果本试剂盒方法回收率为95%～105%,定量检测限为0.050ng/mL,日间精密度为0.6%,日内精密度为0.7%。采用试剂盒方法与GB 5413.16-2010试管法同时检测28批次婴幼儿乳粉中叶酸的含量,检测结果无显著性差异(P=0.598),乳粉中叶酸含量的合格率为100%。结论该方法操作简单,灵敏度高,重现性好,可用于测定婴幼儿乳粉中叶酸的含量。

蒽酮法与试剂盒法测定糖原含量的比较研究

糖原测定是保健食品中缓解体力疲劳功能的必测项目,现行的卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中,肝糖原测定用蒽酮试剂法,为确定在试验中用此方法测定肌糖原含量是否可行，现用葸酮试剂法和试剂盒法对运动前后的肝糖原，肌糖原进行测定，旨在对两方法的敏感性、稳定性进行比较。

生乳体细胞检测试剂盒方法与现有方法的比较

对快速简便检测生乳中体细胞数的试剂盒法进行验证,通过与《NY/T800-2004生鲜牛乳中体细胞测定方法》中的显微镜法,以及市场上应用广泛的快速仪器法进行对比,可知试剂盒法与其他方法之间在统计学上均无显著性差异(P>0.05),且仪器方法和标准方法,仪器方法之间在统计学上也均无显著性差异(P>0.05),试剂盒方法相对标准偏差小于10%,通过实验可知该方法具有很高的精密度和准确度,能够满足生乳中体细胞数的快速、准确检测要求,对生乳的质量检测和监测牛乳房炎都有重要作用。

酶偶联试剂盒法与干式生化分析法测定血清肌酸激酶、尿素的对比分析

本研究通过酶偶联试剂盒法与干式生化分析法测定肌酸激酶、尿素的对比分析 ,力求在实际应用中 ,科学地将两种测试方法结合起来 ,并使数据具有可比性和共用性 ,为运动员机能评定提供多种方法。研究对象为国家游泳队 1 5名女子游泳运动员 ,同时采用两种方法测定血清肌酸激酶和血尿素 ,结果显示两种方法没有显著性差异且存在显著性相关。表明两种方法测定血清肌酸激酶、血尿素的结果具有可比性 。

试剂盒法测定乳粉中的维生素

通过对国家标准GB 5413-2010和德国拜法公司微生物法测维生素试剂盒说明书的研究,做对比试验,两种检测方法差异率小于10%。找出试剂盒标准曲线的实际质量分数,绘制出标准曲线,定出实验室适用的试剂盒方法。

试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉及功能饮料中维生素B_(12)的研究

目的建立试剂盒法快速检测婴幼儿乳粉及功能饮料中维生素B12的含量。方法以Tris缓冲液稀释样品,加入冻干的莱士曼氏乳酸杆菌测试菌球,采用Costar 3599细胞培养板培养,使用酶标仪测定结果。采用本法同时检测了47批次婴幼儿乳粉和12批次功能饮料中维生素B12的含量。结果本试剂盒方法回收率为89.9~110.2%,定量检测限为0.01 ng/g（mL）,日间精密度为9.0%,日内精密度为5.8%。采用试剂盒方法与GB5413.14-2010试管法同时检测47批次婴幼儿乳粉中维生素B12的含量,检测结果无显著性差异,乳粉的合格率为80.9%。检测功能性饮料12批次,合格率为33.3%。结论该方法操作简单,灵敏度高,重现性好,可用于测定婴幼儿乳粉及功能性饮料中维生素B12的含量。

金标免疫渗滤法诊断试剂盒诊断血吸虫病的价值研究

目的 评价金标免疫渗滤法诊断试剂盒 (DIGFA- kit)用于血吸虫病血清流行病学调查的价值。 方法 采用DIGFA与 EL ISA单盲平行检测各期血吸虫病病人血清、非流行区人群血清、疫区人群血清和血吸虫病已控制地区人群血清共 2 30 4份。 结果 DIGFA检测血吸虫抗体的敏感性为 96 .8% ,对非流行区健康人群的特异性为 10 0 % ;该法检测疫区居民血清 5 0 8份 ,抗体阳性检出率为 35 .6 % ,在 Kato法粪检阳性的 81人中 ,其中抗体阳性 79人 ,阳性符合率为97.5 % ;检测血吸虫病已控制地区人群血清 ,抗体阳性率为 4.6 % ;根据 DIGFA的敏感性和对非流行区人群的特异性 ,计算其 Youden s指数为 0 .92 6。上述各项结果与 EL ISA比较 ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 结论 DIGFA与 EL ISA有相似的敏感性和特异性 ,且方法简便、快速 ,胶体金标记物制备容易 ,试剂稳定 ,运送方便 。