顺铂及依托泊苷对神经母细胞瘤细胞中Trk基因家族表达的影响及临床意义

目的神经母细胞瘤(NB)是儿童常见的实体瘤,而三种不同Trk基因的表达变化与NB的预后及转归关系密切;为研究如何优化化疗药物疗效以提高NB患儿的生存率,本文检测了顺铂(DDP)及依托泊苷(VP16)对人NB的SK-N-SH细胞系的杀伤作用及对细胞中Trk基因家族表达的影响。方法通过CCK-8药物诱导细胞毒性实验检测不同浓度梯度的DDP及VP16对SKN-SH细胞的杀伤作用以及半数杀伤浓度(IC50);用qRT-PCR方法检测DDP及VP16在不同浓度下分别作用24 h及48 h后,对SK-N-SH细胞中TrkA、TrkB和TrkC基因表达变化。结果(1)IDDP及VP16药物浓度的增加与其对SK-N-SH细胞的杀伤作用呈线性关系;且48 h比24 h杀伤作用更明显。(2)SK-N-SH细胞中TrkA及TrkC的表达均随着DDP浓度和作用时间的增加而上调,尤其在10μg/mL浓度、24h最明显;而TrkB的表达在24 h时随着DDP浓度增加而上调,48 h时该促进作用不明显;(3)SK-N-SH细胞中TrkA、TrkB及TrkC的表达亦随着VP16浓度和作用时间的增加而上调。结论 DDP及VP16对NB细胞SK-N-SH有明显杀伤作用并对其Trk基因家族的表达有影响。

三氧化二砷对神经母细胞瘤细胞Trk基因家族表达的影响

目的神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童常见的实体瘤,三氧化二砷(Arsenic troxide,As_2O_3)现已广泛应用于治疗实体肿瘤,为了探讨As_2O_3治疗NB的可行性,本研究检测As_2O_3对人SK-N-SH细胞周期及Trk基因家族表达的影响。方法通过流式细胞术检测4μmol/L浓度的As_2O_3作用48h后SK-N-SH细胞细胞周期的变化;qRT-PCR法检测As_2O_3在1、2和4μmol/L浓度下对SK-N-SH细胞分别作用24和48h后,对SK-N-SH细胞内TrkA、TrkB和TrkC基因表达的影响。结果用4μmol/L As_2O_3作用48h后,SK-N-SH细胞的G2/M期细胞比例为(30.93±0.34)%,而对照组G_2/M期细胞比例为(5.29±0.23)%,两组间差异有统计学意义,P<0.01。1μmol/L As_2O_3作用SK-N-SH细胞24h的TrkA比值为1.43±0.17,48h为3.88±0.26,两者比较差异有明显统计学意义,P<0.01,但随着As_2O_3浓度继续增大至4μmol/L TrkA反而下调。SK-N-SH细胞的TrkB及TrkC基因表达均随着As_2O_3浓度增加而上调,4μmol/L浓度下与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),48h比24h上调更明显。结论初步研究结果表明,As_2O_3不仅对NB的SK-N-SH细胞有明显杀伤作用,使其阻滞在G_2/M期,还能使与NB预后密切相关的Trk基因的表达发生变化,As_2O_3有用于NB治疗的潜在临床价值。

黑曲霉TRK基因家族的全基因组鉴定与分析

TRK是一种与钾离子吸收转运相关的基因,在调节生物体生命活动方面起着重要的作用。本研究建立在黑曲霉(Aspergillus niger)基因组数据库基础上,利用生物信息学手段鉴定黑曲霉TRK基因家族成员,分析其基因结构特征和系统进化关系;并利用MEGA 6.06软件,采用最大似然法(MLT)构建系统发育树;使用PAL2NAL软件进行da/ds估算,利用GSDS 2.0软件进行基因结构分析,MEME程序进行Motif分析。在黑曲霉基因组中共鉴定TRK基因家族4个成员:An Trk1、An Trk2、An Trk3、An Trk4,发现均含有TRK特征结构域和保守的Motif基序,不同基因间结构差异较大,但聚类关系较近的基因其结构相似。黑曲霉中TRK基因家族成员在基因结构特征等方面与酵母存在着显著差异,亲缘关系和蛋白互作网络分析进一步验证了这个结论,因此推断黑曲霉中TRK基因还存在其他的调节途径,这个结论为进一步研究黑曲霉TRK渗透胁迫相关蛋白功能、作用机制提供理论依据,从而为了解黑曲霉的渗透调节机理奠定基础。