Trop-2基因在膀胱尿路上皮癌中的遗传表达和临床意义

目的通过对癌症基因组图谱(TCGA)数据库中膀胱尿路上皮癌(BLCA)的数据挖掘,探讨Trop-2基因的表达及其临床意义,为Trop-2作为临床治疗靶点提供理论依据。方法利用GEPIA2、cBioPortal等在线工具分析Trop-2在泛癌中的表达情况。采用HPA数据库比较正常膀胱组织与BLCA组织Trop-2的免疫组织化学染色结果,分析其蛋白表达差异。利用R4.1.2对从TCGA数据库中提取的BLCA的基因表达信息进行富集分析,以发现潜在通路。采用共表达基因分析和肿瘤免疫浸润分析,研究Trop-2在BLCA发生中的可能作用。结果免疫组织化学染色结果证实,BLCA组织中Trop-2表达呈上调趋势,且通过参与细胞周期、p53信号通路等过程促进BLCA细胞生长、增殖和转移。肿瘤免疫浸润分析显示,Trop-2及共表达基因与B细胞呈显著正相关,而与T细胞(CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞)呈显著负相关,一定程度上说明了免疫过程在肿瘤发生中的作用。结论Trop-2在BLCA中呈高表达,同时通过多种通路和免疫过程调控肿瘤的发生,因此可能成为BLCA诊断和治疗的潜在靶点。

肿瘤相关抗原Trop-2胞外区片段蛋白的表达及其特性分析

目的:从临床乳腺癌组织中扩增肿瘤相关抗原Trop-2胞外肽段基因,在大肠杆菌中表达重组蛋白,并对该蛋白的生物学特性进行鉴定。方法:RT-PCR扩增Trop-2胞外肽段基因并克隆于pMD18-T载体中进行测序分析,用NcoⅠ和EcoRⅠ将含Trop-2胞外区重组基因的质粒双酶切后,克隆到pBAD-gⅢ中。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列分析后转化大肠杆菌TOP10,以L-阿拉伯糖诱导表达融合蛋白,表达的蛋白经后His柱亲和层析纯化后,用Western blot、ELISA检测鉴定。结果:重组表达质粒经酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确。SDS-PAGE和Western blot显示,表达的重组蛋白分子质量约为38ku,此抗原能够与商业化抗体特异性结合。结论:成功制备Trop-2胞外区重组基因表达的蛋白,并证明原核表达的Trop-2胞外肽段保持了原有的抗原性。