TROP2蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达及与患者预后的关系

目的 探讨滋养层细胞表面抗原2(trophoblast cell-surface antigens 2,TROP2)在涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)中的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系,明确TROP2的表达与SACC患者预后的相关性。方法 本研究获得单位伦理委员会的批准,采用免疫组织化学方法检测TROP2在85例SACC组织及各自癌旁组织中的表达情况,分析其表达情况与临床病理特征的关系;利用Kaplan-Meier法对40例SACC患者进行TROP2蛋白表达与患者术后五年无病生存期(disease-free survival,DFS)的关系分析;同时,采用Logistic回归模型分析影响SACC患者预后的因素。结果 TROP2在SACC组织中的低表达或不表达率显著高于癌旁组织(P<0.001);TROP2低表达或不表达与SACC患者肿瘤的生长以及临床分期呈显著正相关性(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示:TROP2蛋白低表达或不表达的SACC患者的DFS显著低于高表达患者(P<0.05),预后不良。Logistic回归模型预后分析显示:TROP2蛋白低表达或不表达(OR=5.37;95%CI:1.03~28.08;P=0.046)与Ⅲ-Ⅳ临床分期(OR=6.89;95%CI:1.37~34.77;P=0.019)均为影响SACC患者预后的危险因素。结论 TROP2蛋白在SACC组织中低表达或不表达,患者预后不良,与肿瘤的生长、临床分期呈正相关,且TROP2低表达或不表达可作为SACC患者预后不良的独立危险因素,TROP2为SACC患者预后不良的标志物。

TROP2通过内质网钙铁离子交换影响胃癌侵袭的分子机制

目的探讨人滋养层细胞表面糖蛋白2(TROP2)通过内质网钙铁离子交换影响胃癌侵袭的分子机制。方法构建TROP2与PLOD2过表达/敲减细胞株,WB、RT-qPCR检测TROP2、PLOD2、磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PIP2)、胶原蛋白I型(COL-I)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、蛋白激酶C(PKC)mRNA和蛋白的表达水平,ELISA法检测三磷酸肌醇受体(IP3R)含量,比色分析法检测Fe^(2+)和Ca^(2+)含量。结果随着TROP2的表达量的变化,PLOD2、PIP2、IP3等蛋白水平随之同步变化,在PLOD2的过表达和敲减模型中,无论PLOD2如何变化,TROP2、PIP2、IP3R、PKC并无明显变化,但COL-I、HIF-1α随着PLOD2的变化同步增减。在离子水平,内质网Ca^(2+)浓度与TROP2和PLOD2的表达量呈正相关,Fe^(2+)浓度与TROP2和PLOD2的表达量呈负相关。结论PLOD2上游受TROP2的钙离子信号转导通路“内质网Ca^(2+)-Fe^(2+)交换”调控,下游通过调控HIF1α和胶原纤维交联促进肿瘤的侵袭、转移。

靶向Trop2的抗体偶联药物治疗三阴性乳腺癌的研究进展

乳腺癌是目前全球发病率最高的恶性肿瘤之一,其中三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)占浸润性乳腺癌的10%~20%。TNBC是一种高度异质性和侵袭性的恶性肿瘤,与其他乳腺癌亚型相比,TNBC治疗手段相对匮乏,预后较差,临床上亟待寻找可用于精准治疗及提高预后的新靶点。人滋养层细胞表面抗原2(trophoblast cell surface antigen 2,Trop2)在三阴性乳腺癌及多种恶性肿瘤中高表达,其通过细胞表面受体信号在肿瘤细胞的增殖、黏附、侵袭、转移中发挥重要作用,以其为靶点的抗体偶联药物(antibody-drug conjugate,ADC)在临床上中具有广阔的应用前景。本文对靶向Trop2的ADC治疗TNBC的临床研究进展予以综述,为靶向Trop2的ADC在TNBC治疗中的临床应用和提高患者生存预后方面提供参考。

人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达及对胰腺癌细胞增殖的抑制作用

目的:以人源抗TROP2抗体Fab基因为模板,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG真核表达系统,观察人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:分别扩增抗TROP2抗体的重链和轻链基因,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG的重组表达载体pWS-anti-TROP2,转染CHO dhfr-细胞,加MTX筛选抗体表达量高的单克隆株,Protein G亲和柱纯化,获得人源抗TROP2全分子抗体IgG。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、免疫荧光和流式细胞术等方法鉴定人源抗TROP2全分子抗体IgG并分析其免疫学活性。MTT法分析人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞BxPC-3的增殖抑制作用。结果:成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,表达并纯化人源抗TROP2全分子抗体IgG。经鉴定,抗体的轻链与重链大小与预期一致,可与TROP2蛋白特异性结合,效价可达1∶6 400。MTT检测结果表明,人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌BxPC3细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈时效、量效依赖关系。结论:本研究成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,并证明此抗体可特异性识别胰腺癌细胞表面的TROP2蛋白,且对胰腺癌细胞的增殖有明显的抑制作用。

Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响及机制

目的 :观察Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :realtime PCR和Western blot检测GES-1细胞中Trop2 m RNA和蛋白的表达水平;构建过表达Trop2质粒及空载对照质粒并转染GES-1细胞,检测转染效率;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测过表达Trop2后GES-1细胞迁移能力的变化情况;Western blot检测过表达Trop2后GES-1细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子[上皮细胞标志E-钙黏附蛋白(E-cadherin),间皮细胞标志纤维连接蛋白(fibronectin)、波形蛋白(vimentin)]的变化情况。结果:相比胃癌细胞株BGC823和MGC803,Trop2在GES-1细胞中的m RNA和蛋白表达水平均较低;过表达Trop2的质粒转染GES-1后,Trop2的m RNA表达水平与未转染组相比提高(6.18±0.52)倍,而空载对照组和未转染组相比无明显变化,蛋白水平的变化情况和m RNA相似;细胞划痕实验表明,转染72 h后,过表达组细胞迁移率达到95%,空载对照组细胞迁移率为50%,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Transwell迁移实验发现,转染24 h后,过表达组穿膜细胞数为(87±6)个,而空载对照组为(41±6)个,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Western blot检测过表达Trop2后,随着Trop2蛋白表达量增高,GES-1细胞E-cadherin表达下调,fibronectin和vimentin表达上调。结论 :Trop2过表达可以提高胃黏膜上皮细胞的迁移能力,其机制与Trop2促进胃黏膜上皮细胞EMT有关。

沉默TROP2基因抑制胃癌BGC-823细胞体外迁移侵袭能力

目的探讨TROP2基因在胃癌细胞迁移侵袭过程中的作用。方法用基因克隆技术构建针对TROP2的小干扰RNA(siRNA),瞬时转染胃癌BGC-823细胞系,荧光实时定量PCR和Western blot法检测细胞TROP2mRNA和蛋白表达水平,MTT法测定细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移侵袭能力。结果酶切鉴定和DNA测序分析显示,TROP2靶向RNA干扰重组质粒构建成功。筛选得到最佳干扰效果质粒,该质粒转染细胞后,细胞增殖和迁移侵袭能力显著下降(P<0.05)。结论干扰TROP2基因具有抑制胃癌BGC-823细胞迁移侵袭的作用,TROP2基因可能成为癌基因靶向治疗的分子靶点。

增强型Trop2-CD40L病毒样颗粒疫苗的制备、纯化及活性研究

目的 获得嵌合免疫增强佐剂CD40配体（CD40L）的Trop2-CD40L病毒样颗粒（VLPs）疫苗,为后续探究VLPs在肿瘤治疗中的免疫原性及免疫保护作用奠定基础。方法 通过重叠延伸PCR方法扩增以Trop2为靶点、嵌合免疫佐剂CD40L的Trop2-CD40L融合基因,构建杆状病毒表达载体pFastbacTM /Trop2-CD40L,并转化大肠埃希菌E.coli DH10bac,提取杆粒并经PCR鉴定成功命名为Trop2-CD40L Bacmid,后者转染Tn5昆虫细胞获得重组病毒Trop2-CD40L rBV,与Gag rBV共感染昆虫细胞制备重组病毒样颗粒,透析浓缩后蔗糖密度梯度离心纯化,Western Blot鉴定VLPs目的蛋白表达、电镜观察所制备VLPs形态,Cytokine ELISA方法检测Trop2-CD40L VLPs体外生物学活性。结果 成功扩增了Trop2-CD40L融合基因,通过杆状病毒表达系统、借助SIV Gag衣壳蛋白装配特点成功制备了增强型Trop2-CD40L 病毒样颗粒,与Trop2 VLPs比较具有更好的生物学活性,差异具有统计学意义（t=7.266,,P〈0.05）。结论 制备出具有一定生物学活性的增强型Trop2-CD40L病毒样颗粒,证实了CD40L作为免疫佐剂使用有免疫增强效应。

Trop2病毒样颗粒的制备及纯化研究

目的获得Trop2为靶点的病毒样颗粒(VLPs),为进一步体内诱导实验和疫苗研究提供依据。方法利用分子克隆技术构建Trop2真核表达载体pCAGGs/Trop2和杆状病毒表达载体pFastbac1/Trop2,以pCAGGs/Trop2表达载体转化Hela细胞,用免疫细胞化学方法确定Trop2蛋白表达并锚定于胞膜上;以pFastbac1/Trop2转化大肠杆菌E.coliDH10bac菌株获得重组杆粒Trop2Bacmid,转染Tn5昆虫细胞获得重组病毒Trop2rBV,与本室保存的Gag rBV共感染昆虫细胞得到重组VLPs,透析浓缩后经蔗糖密度梯度离心纯化、蛋白免疫印迹(WB)鉴定,电镜观察病毒形态。结果构建成功的重组杆粒Trop2Bacmid转染Tn5昆虫细胞获得重组病毒Trop2rBV,与Gag rBV共感染昆虫细胞获得重组Trop2VLPs。结论成功制备了Trop2VLPs,为其后续诱导体液和细胞免疫应答研究奠定了基础。

过表达TROP2对细胞增殖及迁移能力的影响

目的探讨过表达肿瘤相关钙信号转导因子2(TROP2)对细胞增殖及迁移的影响,为阐明肿瘤的发生机制提供新的途径。方法构建TROP2真核表达载体pcDNA3-TROP2;采用脂质体法将pcDNA3-TROP2转染入人正常肝细胞LO2中,并通过G418压力筛选获得稳定表达TROP2的细胞株,之后通过MTT法检测细胞的活力,通过划痕法检测细胞的迁移能力。结果成功获得了过表达TROP2的细胞株;进一步的研究结果显示,过表达TROP2可增强细胞的活力和迁移能力。结论过表达TROP2可促进肿瘤的发生,此结果为阐明肿瘤发生机制及肿瘤治疗提供了新的途径。

靶向抑制胃癌细胞中TROP2基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨RNA干扰肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人胃黏膜正常细胞GES-1作为对照,RT-PCR检测人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞中TROP2 mRNA表达;TROP2 siRNA、Control siRNA转染SGC-7901细胞,不作任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后Western blotting检测TROP2、Ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果 TROP2 mRNA在人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞表达均显著高于GES-1细胞(P<0.01),TROP2基因在SGC-7901细胞中的表达最高,选择作为后续的研究对象;转染TROP2 siRNA后TROP2蛋白表达显著降低(P<0.01);与对照组及Control-siRNA组比较,TROP2-siRNA组细胞存活率及Ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论RNA干扰抑制TROP2基因的表达可降低胃癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。

TROP2在食管鳞状细胞癌中的表达及与临床病理的关系

目的检测TROP2在食管鳞状细胞癌组织中的表达,探讨其与临床病理的关系。方法实时荧光定量PCR方法对50例食管鳞状细胞癌组织及癌旁正常组织TROP2的表达水平检测,分析其与临床病理资料的关系。结果 TROP2在癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.05);TROP2的高表达分别与食管癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期显著相关(P<0.05)。结论 TROP2的高表达与食管鳞状细胞癌临床病理密切相关。

TROP2 shRNA真核表达载体转染胃癌BGC-823细胞的沉默作用

目的:构建TROP2特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体,抑制人胃癌BGC-823细胞TROP2基因的表达.方法:构建TROP2短发夹环RNA,产生重组质粒转染胃癌BGC-823细胞,转染24h后用G418(浓度400mg/L)筛选,待细胞稳定后收集,分别命名为W组(未处理组),HK组(随机阴性对照质粒组),KB组(空质粒组),T1组,T2组,T3组.并运用实时荧光定量PCR和Western blot检测TROP2的表达.结果:TROP2特异性shRNA片段被成功克隆进pGensil1.1质粒中,重组质粒shRNA编码序列与设计片断的序列完全一致.与未转染细胞组、随机阴性对照组、空质粒组相比,转染shRNA重组质粒的人胃癌BGC-823细胞TROP2表达在mRNA和蛋白水平都受到抑制.与T1、T2组相比,T3组对TROP2mRNA和蛋白抑制作用最明显,差异具统计学意义(8.79±0.23vs9.54±0.20,9.57±0.23;3.66±0.11vs6.46±0.36,9.31±0.11,均P<0.05).结论:成功构建了针对TROP2的特异性shRNA真核表达载体并抑制了TROP2的表达,为进一步研究其基因功能打下了基础.

胃癌肿瘤干样细胞上Trop2基因的表达情况

目的:探讨Trop2基因在无血清悬浮培养法诱导的胃癌肿瘤干样细胞上的表达情况。方法:无血清悬浮培养胃癌细胞系MGC803,观察肿瘤细胞球形成情况;流式细胞仪检测肿瘤细胞球中CD44+、CD54+、Ep CAM及Trop2所占比例;检测肿瘤细胞球的细胞周期变化情况;定量PCR检测肿瘤细胞球中肿瘤干细胞调控基因Oct4、Snail、Nanog及Trop2基因含量。结果 :胃癌细胞系MGC803在无血清悬浮培养的条件下,约14 d能形成肿瘤细胞球且数量较多,肿瘤细胞球中CD44+、CD54+、Ep CAM及Trop2含量明显高于正常培养条件下的MGC803细胞组(P<0.05);肿瘤细胞球中的细胞周期G1期明显低于正常培养组,S期明显高于正常培养组(P<0.05);肿瘤细胞球中肿瘤干细胞调控基因Oct4、Snail、Nanog及Trop2基因的表达明显高于正常培养组(P<0.05)。结论:胃癌细胞系MGC803在无血清悬浮培养条件能形成细胞球,这类细胞具有肿瘤干细胞的特征,出现高增殖状态,高表达肿瘤干细胞调控基因,并能高表达促癌基因Trop2。

胃癌组织中TROP2、HER-2蛋白的表达及相关性

目的:研究胃癌组织中TROP2和HER2蛋白表达,探讨TROP2和HER2蛋白在胃癌中的临床病理学意义以及二者的相关性。方法:应用免疫组织化学方法SP法检测56例胃癌组织中TROP2和HER2蛋白表达。结果:胃癌组织中TROP2和HER2蛋白阳性表达率分别为69.6%和32.1%。胃癌组织中TROP2蛋白表达与与淋巴结转移、淋巴血管侵犯、浸润深度及临床分期有关(P﹤0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤部位、Lauren分型等无关(P﹥0.05)。HER2蛋白在胃癌中的表达与与Lauren分型、淋巴结转移和临床分期有关(P﹤0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤部位、浸润深度、淋巴血管侵犯等无关(P﹥0.05)。胃癌中TROP2与HER2蛋白表达无相关性(P﹥0.05)。结论:TROP2高表达与胃癌的侵袭转移有关,提示检测TROP2可预测胃癌的临床生物学行为,可作为未来靶向治疗的一个靶点。

Trop2在舌鳞癌中的表达及其意义

目的:观察并分析Trop2在口腔舌鳞癌(oral tongue squamous cell carcinoma,OTSCC)中的表达情况及其临床意义,探讨Trop2作为OTSCC潜在治疗靶点的可能性。方法:用实时定量RT-PCR检测15例OTSCC组织及癌旁舌组织中Trop2 mRNA的表达,用前期自制的全人源抗Trop2单克隆抗体,经免疫组化检测Trop2蛋白在109例OTSCC组织及其癌旁舌组织中的表达情况t;检验分析Trop2 mRNA表达差异,卡方分析TROP2蛋白表达与临床病理特征之间关系。结果:Trop2的表达在OTSCC组织中高于癌旁舌组织;随着OTSCC分化程度的降低、肿瘤直径增大、癌细胞侵及肌层,Trop2蛋白表达也随之增高,但差异无统计学意义(P>0.05);同时可见,Trop2蛋白高表达多出现于OTSCC淋巴结转移和TNM分期晚的患者,差异有统计学意义(P<0.05);Trop2蛋白在OTSCC组织中的高表达,与患者性别、年龄无关。结论:Trop2高表达与OTSCC的发展及恶性程度有关,可作为临床预后危险因素之一,也可作为靶向治疗OTSCC的潜在靶点。

TROP2和VEGFR2在三阴性乳腺癌中的表达及与临床病理因素的相关性研究

目的:观察人滋养层细胞表面抗原2(TROP2)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)在三阴性乳腺癌中的表达及与临床病理因素和预后的相关性。方法:应用免疫组化(两步法)检测151例三阴性乳腺癌、137例非三阴性乳腺癌、48例乳腺良性肿瘤以及48例正常乳腺组织中TROP2和VEGFR2的蛋白表达情况,结合临床病理资料综合分析其临床意义和预后价值。结果:TROP2和VEGFR2分别在乳腺癌细胞的细胞膜和细胞质表达。TROP2和VEGFR2蛋白在三阴性乳腺癌中高表达,阳性率高于非三阴性乳腺癌、乳腺良性肿瘤和正常乳腺组织,并且TROP2和VEGFR2共同在三阴性乳腺癌高表达,高于非三阴性乳腺癌,差异有统计学意义。三阴性乳腺癌组织中TROP2阳性表达、VEGFR2阳性表达,以及TROP2和VEGFR 2在三阴性乳腺癌中的共同高表达与患者的组织学分级、临床分期、远处转移有相关性。TROP2和VEGFR2蛋白共同高表达是三阴性乳腺癌的独立预后指标。结论:TROP2和VEGFR2可以作为三阴性乳腺癌新的分子靶点,有望用于三阴性乳腺癌的预后评价和免疫靶向治疗。

Trop2对胃癌细胞耐药性的影响及机制研究

目的:探讨滋养层细胞表面抗原2(Trop2)对胃癌细胞化疗耐药的影响及机制。方法:应用慢病毒转染技术将Trop2 sh RNA转染至BGC823细胞株,通过嘌呤霉素筛选出稳定转染质粒的细胞株;q RT-PCR、Western blot和免疫荧光方法检测质粒干扰效率;CCK-8细胞增殖试验和流式细胞术检测柔红霉素对BGC823细胞株增殖能力和细胞凋亡的影响;q RT-PCR、Western blot检测耐药相关基因TopoⅡα的m RNA和蛋白表达变化。结果:在稳定转染Trop2 sh RNA质粒的sh Trop2组中,Trop2 m RNA及蛋白表达水平较对照组(未处理)和sh NC组(转染空载体质粒)明显下调;在相同药物浓度下,柔红霉素对shTrop2组的增殖抑制率明显高于对照组和sh NC组,sh Trop2组半数抑制浓度低于对照组和sh NC组(P<0.05),sh Trop2组中柔红霉素诱导的细胞凋亡率显著高于对照组和sh NC组(P<0.05);稳定干扰Trop2表达后耐药相关基因TopoⅡα的表达显著上调。结论:Trop2通过抑制TopoⅡα的表达,可增强胃癌细胞对柔红霉素的耐药性。

Trop2在甲状腺乳头状癌细针针吸活检中的表达及临床意义

许多研究表明,人滋养层细胞表面抗原2（Trop2）是一种上皮恶性肿瘤组织抗原,而在人体正常细胞中很少表达。在人卵巢和乳腺恶性肿瘤中Guerra等发现Cyclind1-Trop2相互嵌合体,这种嵌合体能协同刺激细胞的生长,表明Trop2有一定的致癌功能。在上下消化道癌和口腔癌等恶性肿瘤中提示Trop2可能与肿瘤发病、生长及远处转移有关。

胃癌中TROP2的表达及意义

目的研究肿瘤相关钙信号传导蛋白2（TROP2）在胃癌组织中的表达，探讨TROP2在胃癌发生、发展所起的作用。方法应用半定量RT-PCR法和免疫组织化学法分别检测胃癌组织中的TROP2 mRNA及TROP2蛋白的表达。结果胃癌组织中的TROP2水平明显高于正常胃组织（P〈0．05）。结论TROP2在胃癌组织中呈高表达，可能与胃癌的发生、发展有关。

靶向抑制TROP2基因表达对胰腺癌细胞生物学特性的影响研究

目的探讨抑制胰腺癌组织中肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)表达对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法选取胰腺癌组织和相应的癌旁组织各46例。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测并分析胰腺癌组织和癌旁组织中TROP2基因的m RNA表达情况;将人胰腺癌PANC-1细胞分为对照组、NC-si RNA组和TROP2-si RNA组,培养48 h后,采用蛋白质印迹法检测并分析TROP2、cleaved caspase 3、NOTCH1和HES1蛋白表达情况;采用CCK8法和流式细胞仪分别检测并分析细胞的增殖和凋亡情况。结果在胰腺癌组织中TROP2基因的m RNA表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P﹤0.01)。对照组、NC-si RNA组和TROP2-si RNA组中,TROP2蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率及cleaved caspase 3、NOTCH1、HES1蛋白表达比较,差异均有明显统计学意义(P﹤0.01);TROP2-si RNA组TROP2蛋白表达、细胞存活率及NOTCH1、HES1蛋白表达均明显低于对照组,细胞凋亡率和cleaved caspase 3蛋白表达均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01),而NC-si RNA组TROP2蛋白表达、细胞存活率、细胞凋亡率及cleaved caspase 3、NOTCH1、HES1蛋白表达与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论抑制胰腺癌组织中TROP2基因表达,可以明显降低肿瘤细胞的增殖能力,促进细胞凋亡,其机制与阻断NOTCH1信号通路有关。