Tropic1808基因的原核表达及其表达产物的生物活性

Tropic180 8基因是新近获得的一个鼠源性的cDNA .Tropic180 8基因开放阅读框架片段通过PCR方法从质粒中扩增后 ,重组入表达载体pET 2 1a中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) .用IPTG诱导目的蛋白的表达 ,SDS PAGE并凝胶图象分析确定目的蛋白表达水平占细菌总蛋白的 14%以上 .表达蛋白在N端融合有 16个氨基酸 ,将表达蛋白电转移至PVDF膜 .氨基酸序列分析表明 ,其N端第 17～ 2 5位氨基酸序列与Tropic180 8基因编码序列一致 .利用融合部分含T7·Tag ,通过亲和层析纯化表达蛋白 ,经Westernblot检测为目的蛋白 ,加入到无血清培养的新生SD大鼠背根神经节 (DRG)中 ,观察到表达蛋白对DRG具有促进存活和促进突起生长的作用 .

Tropic1808基因重组蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备Tropic180 8基因重组蛋白的单克隆抗体 ,并对其生物学特性进行鉴定。方法 用Tropic180 8基因重组蛋白作为抗原免疫BALB/C小鼠 ,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤 (SP2 / 0 )细胞融合 ,经ELISA筛选和有限稀释法获得分泌单克隆抗体的细胞株 ,WesternBlot等方法对其生物学特性进行鉴定。结果 获得 2株识别Tropic180 8基因重组蛋白的单克隆抗体的细胞株Ⅱ 4B、Ⅲ 4C。WesternBlot法显示该抗体特异性地识别Tropic180 8基因重组蛋白 ;ELISA法测定杂交瘤细胞培养上清及体内成瘤后产生的腹水的抗体效价分别为 1∶80、 1∶6 0 0 ;杂交瘤细胞染色体数平均为 90～ 10 0 ;亚类鉴定单抗的重链为小鼠IgG1,轻链为κ型。结论 成功地制备了Tropic180 8基因重组蛋白的单克隆抗体 ,为进一步研究Tropic180 8基因重组蛋白的功能提供了良好的基础。

Tropic1808基因在大肠杆菌中的表达

目的 :在大肠杆菌宿主系统中表达 Tropic180 8基因编码的蛋白。方法 :用 PCR方法从质粒中扩增出 Tropic180 8c DNA开放阅读框架片段 (82 8bp) ,并重组入表达载体 p ET-2 1a中 ,转化大肠杆菌 BL2 1(DE3) ,用 IPTG诱导 Tropic180 8融合蛋白的表达 ,经 SDS-PAGE,表达蛋白条带转至 PVDF膜进行氨基酸序列分析。结果 :构建了 p ET-2 1a-180 8重组质粒 ,外源性 Tropic180 8基因可在大肠杆菌中获得表达 ,目的蛋白占细菌总蛋白的 14 %以上 ,表达蛋白的 N端氨基酸序列与基因编码序列一致。结论 :Trop-ic180 8基因可在大肠杆菌中获得表达 ,这为进一步纯化该基因表达蛋白。

Tropic1808基因作用于PC12细胞的表达谱芯片分析

为探讨tropic1808基因作用的分子机制,采用高密度寡核苷酸芯片(Affymetrix芯片)对表达tropic1808基因和空载体的PC12细胞株进行转录水平分析.基于获得的基因表达信息,对UCSC、TRANSFAC、NCBI等公共数据库进行检索,观察表达tropic1808基因导致PC12细胞株的基因表达谱变化.在检测的15866个目标基因中,855个基因表达上调,80个有显著比较意义,涉及包括粘附因子、离子通道、信号转导、细胞代谢等基因成员.其中包括多个细胞粘附因子及与细胞分化、神经发生和突触发生的有关基因.推测Tropic1808基因过表达可诱导PC12细胞株中粘附因子基因水平上调及与细胞分化、神经发生和突触发生相关的基因表达上调.

Tropic1808基因重组蛋白对大鼠坐骨神经再生的影响

目的观察Tropic1808基因重组蛋白对坐骨神经损伤后再生的影响。方法SD大鼠16只,分为Tropic1808基因重组蛋白组和生理盐水组,切断左侧坐骨神经,硅胶管套接后两神经断端间距10mm,再生室内注入Tropic 1808基因重组蛋白液(500μg/ml)或生理盐水13μl。术后每4周做一次足迹试验,16周时作神经干动作电位、脊髓前角运动神经元数、腓肠肌纤维截面积、硅胶管中段再生神经等检测。结果Tropic1808基因重组蛋白组SFI的恢复、神经干动作电位、脊髓前角运动神经元数、腓肠肌纤维截面积、硅胶管中段再生神经有髓神经纤维数等结果均明显优于生理盐水组,有统计学意义。电镜观察表明Tropic1808组再生轴突较NS组粗,髓鞘较生理盐水组厚。结论Tropic1808基因重组蛋白有促进大鼠坐骨神经再生的作用。

大鼠损伤神经组织中Tropic1808基因相关蛋白的亲和层析法纯化

目的 :纯化大鼠损伤坐骨神经组织中 Tropic180 8基因特异表达的蛋白。方法 :将 Tropic180 8基因重组蛋白的单克隆抗体与 CNBr- activated Sepharose 4 B交联 ,用亲和层析的方法 ,提取在大鼠损伤坐骨神经组织中Tropic180 8基因特异表达的蛋白 ,并将纯化的蛋白进行 SDS- PAGE分析。结果 :(1)经层析系统紫外检测 ,亲和层析后洗脱 ,在 2 80 nm波长处获得两个不同的紫外吸收峰。 (2 )亲和层析的洗脱液 ,经冷冻浓缩 ,SDS- PAGE分析 ,出现4 3.0 k Da、32 .0 k Da、31.0 k Da和 14 .4 k Da蛋白条带 ,其中在 32 .0 k Da的蛋白条带与预期的 Tropic180 8基因在组织中的编码蛋白基本相符 ,而 4 3.0 k Da、31.0 k Da、14 .4 k Da蛋白 ,预测为 Tropic 180 8基因在大鼠损伤坐骨神经组织中表达的相关蛋白。结论 :用亲和层析的方法 ,获得了大鼠损伤坐骨神经组织中 Tropic180 8基因特异表达的相关蛋白 。

Tropic 1808基因在大鼠损伤神经组织中的表达

目的 观察Tropic 180 8基因在大鼠正常和损伤坐骨神经组织中的表达 ,探讨Tropic 180 8基因在周围神经损伤与再生过程中的作用。方法 采用地高辛标记的Tropic 180 8cDNA探针、抗大鼠S 10 0蛋白抗体 ,以原位杂交和免疫组织化学双重染色法 ,观察Tropic 180 8基因在正常和损伤大鼠坐骨神经组织中的表达。结果 免疫组化结果显示 ,大鼠正常坐骨神经可表达S 10 0蛋白 ,但表达量较低 ;神经损伤后 ,其远侧端S 10 0蛋白的表达量明显增加。原位杂交结果显示 ,大鼠正常坐骨神经组织未见Tropic 180 8mRNA杂交信号 ;损伤神经的远侧端呈现较强的阳性信号 ,而且在部分S 10 0强阳性反应区可见Tropic 180 8mRNA杂交信号。结论 Tropic 180 8基因在正常坐骨神经组织中未见表达 ;坐骨神经损伤后 ,其远侧端增殖的雪旺氏细胞可表达Tropic 180 8mRNA。提示 ,Tropic 180 8是一种周围神经损伤后特异表达的基因。

Tropic 1808基因重组蛋白对损伤坐骨神经脊髓细胞凋亡的影响

探讨Tropic1808基因重组蛋白对损伤坐骨神经的新生大鼠脊髓细胞凋亡影响,将新生SD大鼠一侧坐骨神经切断后,用无菌止血海绵包裹断离的神经近侧端,海绵内加入Tropic1808基因重组蛋白,阳性用神经生长因子、阴性用生理盐水作为对照;术后3、6、12h经TUNEL法染色,在光镜、电镜和图像分析系统下,了解L4-L5段脊髓细胞凋亡情况。得到生理盐水组的脊髓出现大量凋亡细胞;Tropic1808基因重组蛋白组凋亡细胞数量较生理盐水组显著减少;Tropic1808基因重组蛋白组与神经生长因子组之间凋亡细胞数量的差别无显著性意义。说明Tropic1808基因重组蛋白有保护受损神经组织,减少细胞凋亡的作用。

周围神经损伤后Tropic 1808基因表达蛋白的免疫组织化学研究

目的 研究Tropic 180 8基因表达蛋白在受损大鼠坐骨神经中的表达与分布。 方法 用酶联间接法和双重免疫荧光法进行免疫组织化学染色。并通过计算机图像处理技术 ,测量阳性区域的强度与面积。 结果 损伤神经的近侧端和远侧端中施万细胞均有Tropic 180 8基因表达蛋白的阳性免疫反应 ,阳性免疫反应物主要分布于施万细胞膜上 ,远侧端的阳性反应物强度和面积强于和大于近侧端。 结论 周围神经损伤后 ,Tropic180 8基因表达蛋白分布于损伤近侧端和远侧端的施万细胞膜上 ,并且远侧端中该蛋白的表达强于近侧端。

神经损伤相关基因tropic1808在大鼠腓肠肌组织中的表达及其克隆

目的:探讨tropic1808基因在SD大鼠腓肠肌组织中的表达及其基因序列情况。方法:采用Westernblot方法在成年SD大鼠腓肠肌组织中可见阳性反应蛋白条带。进而根据登录基因设计一系列引物从腓肠肌组织总RNA逆转录第一链中扩增tropic1808基因,经Southern验证。RT-PCR产物经巢式PCR扩增出一个特异条带,并对该片段测序分析。结果:与tropic1808基因100%同源。结论:在成年SD大鼠腓肠肌组织中存在tropic1808基因,但其表达丰度较低。

血吸虫疫苗研制的策略、现状及展望

1991年 WHO在瑞士日内瓦召开的血吸虫病疫苗研制策略讨论会上,一致认为血吸虫病疫苗的研制是可行的,必要的.TDR也支持具有减少感染宿主虫负荷效应的疫苗候选抗原的生产和试验.尽管血吸虫疫苗的研制难度大,不可能在短期内获得成功,但TDR仍将血吸虫疫苗研制作为优先资助研究项目,并肯定这种策略将有利于促进世界范围内血吸虫病的控制,并为在全球范围流行的其它寄生虫病重组疫苗的研制提供范例.WHO制定的这种研制血吸虫疫苗的策略,可从以下角度加深理解.

抗病性育种

W943650 山羊草和野生小麦种对小麦叶锈病抗性的评价[刊,英]/Dhaliwal,H.s.…//InternationalJournal of Tropical Agriculture.-1991,9(2).-118～122[WBTA,1993,10(6),5387]W943651 在人工发病条件下筛选有希望的小麦抗叶锈病品种[刊,英]/Navi,S.S.…//Mysore Journalof Agricultural Sciences.-1991,25(1).-57～58[WB-TA,1993,10(3),2334]