我国TROPS运动的理论建构与实践

20世纪末 ,日本体育社会学学者影山健提出了“TROPS运动”的概念 ,意指与SPORT平行发展的、服务于大众健康的体育运动形态。从人类健康和社会发展的视角出发 ,论证了在我国建构TROPS运动体系的必要性 ;提出了建构TROPS运动体系的首要任务是构筑理论框架和挖掘与开发操作性强的运动项目。

体验运动的乐趣与成功——Trops理念下的初中体育教学

体育运动的显著特点是具有胜负性和竞争性,Trops提倡体育运动不分胜利者和失败者,它追求的是团队协作和人人都能体验运动的乐趣。Trops理念渗透入初中体育教学中,即让学生在参与运动的过程中要不断体验其中乐趣并时常获得成功。通过体验运动的乐趣与成功使学生不断对体育活动产生好感,激发学生参与体育教学活动的兴趣。

由TROPS运动引发的对小学低年级竞争教育的反思

TROPS运动的“反竞争”本质衍生出竞争在小学教育中的作用及角色，本文从小学低年级学生心理的阶段性发展特征出发，认为在小学低年级阶段不宜过早进行社会性的竞争教育，否则对学生成为完整的人有着消极影响，故去竞技化的TROPS运动不失为小学低年级体育教材的又一选择。

小学心理学视域下由TROPS运动引发的对竞争教育的反思

TROPS运动的"反竞争"本质衍生出竞争在小学教育中的作用及角色,从小学高低年级学生心理的阶段性发展特征出发,认为在小学低年级阶段不宜过早进行社会性的竞争教育,否则对学生成为完整的人有着消极影响,故去竞技化的TROPS运动不失为小学低年级体育教材的又一选择;高年级学生的心理及社会性发展的成熟度已可使竞争教育产生积极价值,但教师在体育课堂中应注意在竞争活动中对学生进行竞争意识及能力的培养、德性的引导与成败的再理解。

略论我国学校体育教学内容体系的重建——兼谈TROPS运动的理论与实践

从现代体育发展和素质教育的视角 ,检视我国传统的学校体育教学内容体系 ,指出了它理论上的缺陷和实践上的难以操作性 ;通过对近 2 0年我国学校体育教学内容改革的剖析 ,探讨了在素质教育观指导下 ,借鉴TROPS运动的理论与实践方法 ,重建学校体育教学内容体系的指导思想和技术路线 ;提出了小学———初中———高中———大学有机衔接、逐步递进、有序发展 ,并具有向社会延伸潜在功能的体育教学内容体系结构框架。

和谐社会需要Sport+trops

构建社会主义和谐社会,是以胡锦涛同志为总书记的党中央遵循马克思主义的思想路线,坚持解放思想、实事求是、与时俱进的重大理论成果,反映了我们党对中国特色社会主义的新认识,丰富和发展了马克思主义关于社会主义社会建设的理论。作为马克思主义中国化的最新理论成果的科学发展观告诉我们,无论是全面小康社会的建设还是和谐社会的构建,其本质要求首先是人的全面发展。社会的主体是人,现实的人构成了社会整体。人既是社会发展的根本目的,又是社会发展的根本前提。因此,从一定意义上讲,和谐社会实际体现的是人的自身的全面发展,强调的是人与社会和人与自然的关系。人的全面发展必须要强调大众健康的身体,

TROP2通过内质网钙铁离子交换影响胃癌侵袭的分子机制

目的探讨人滋养层细胞表面糖蛋白2(TROP2)通过内质网钙铁离子交换影响胃癌侵袭的分子机制。方法构建TROP2与PLOD2过表达/敲减细胞株,WB、RT-qPCR检测TROP2、PLOD2、磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PIP2)、胶原蛋白I型(COL-I)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、蛋白激酶C(PKC)mRNA和蛋白的表达水平,ELISA法检测三磷酸肌醇受体(IP3R)含量,比色分析法检测Fe^(2+)和Ca^(2+)含量。结果随着TROP2的表达量的变化,PLOD2、PIP2、IP3等蛋白水平随之同步变化,在PLOD2的过表达和敲减模型中,无论PLOD2如何变化,TROP2、PIP2、IP3R、PKC并无明显变化,但COL-I、HIF-1α随着PLOD2的变化同步增减。在离子水平,内质网Ca^(2+)浓度与TROP2和PLOD2的表达量呈正相关,Fe^(2+)浓度与TROP2和PLOD2的表达量呈负相关。结论PLOD2上游受TROP2的钙离子信号转导通路“内质网Ca^(2+)-Fe^(2+)交换”调控,下游通过调控HIF1α和胶原纤维交联促进肿瘤的侵袭、转移。

人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达及对胰腺癌细胞增殖的抑制作用

目的:以人源抗TROP2抗体Fab基因为模板,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG真核表达系统,观察人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞增殖的抑制作用。方法:分别扩增抗TROP2抗体的重链和轻链基因,构建人源抗TROP2全分子抗体IgG的重组表达载体pWS-anti-TROP2,转染CHO dhfr-细胞,加MTX筛选抗体表达量高的单克隆株,Protein G亲和柱纯化,获得人源抗TROP2全分子抗体IgG。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、免疫荧光和流式细胞术等方法鉴定人源抗TROP2全分子抗体IgG并分析其免疫学活性。MTT法分析人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌细胞BxPC-3的增殖抑制作用。结果:成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,表达并纯化人源抗TROP2全分子抗体IgG。经鉴定,抗体的轻链与重链大小与预期一致,可与TROP2蛋白特异性结合,效价可达1∶6 400。MTT检测结果表明,人源抗TROP2全分子抗体IgG对胰腺癌BxPC3细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈时效、量效依赖关系。结论:本研究成功构建了人源抗TROP2全分子抗体IgG的真核表达系统,并证明此抗体可特异性识别胰腺癌细胞表面的TROP2蛋白,且对胰腺癌细胞的增殖有明显的抑制作用。

Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响及机制

目的 :观察Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :realtime PCR和Western blot检测GES-1细胞中Trop2 m RNA和蛋白的表达水平;构建过表达Trop2质粒及空载对照质粒并转染GES-1细胞,检测转染效率;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测过表达Trop2后GES-1细胞迁移能力的变化情况;Western blot检测过表达Trop2后GES-1细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子[上皮细胞标志E-钙黏附蛋白(E-cadherin),间皮细胞标志纤维连接蛋白(fibronectin)、波形蛋白(vimentin)]的变化情况。结果:相比胃癌细胞株BGC823和MGC803,Trop2在GES-1细胞中的m RNA和蛋白表达水平均较低;过表达Trop2的质粒转染GES-1后,Trop2的m RNA表达水平与未转染组相比提高(6.18±0.52)倍,而空载对照组和未转染组相比无明显变化,蛋白水平的变化情况和m RNA相似;细胞划痕实验表明,转染72 h后,过表达组细胞迁移率达到95%,空载对照组细胞迁移率为50%,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Transwell迁移实验发现,转染24 h后,过表达组穿膜细胞数为(87±6)个,而空载对照组为(41±6)个,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Western blot检测过表达Trop2后,随着Trop2蛋白表达量增高,GES-1细胞E-cadherin表达下调,fibronectin和vimentin表达上调。结论 :Trop2过表达可以提高胃黏膜上皮细胞的迁移能力,其机制与Trop2促进胃黏膜上皮细胞EMT有关。

用树脂吸附净化辐照后30%TRPO-煤油

研究了用吸附剂对辐照后 30 %TRPO 煤油 HNO3体系中产生的对重金属有强络合作用的辐解产物的净化效果。以Pu作为强络合产物的示踪剂 ,试验了六种吸附剂的去污效果。选择了 0 0 1× 7WQ 2 0 0型阳离子交换树脂作为吸附剂 ,考察了动态条件下对污溶剂的净化效果及温度对吸附量的影响。用 3 0mol/LHNO3作为淋洗剂可以将Pu从吸附了强络合产物的柱上淋洗下来。净化后溶剂不再有Pu保留。

沉默TROP2基因抑制胃癌BGC-823细胞体外迁移侵袭能力

目的探讨TROP2基因在胃癌细胞迁移侵袭过程中的作用。方法用基因克隆技术构建针对TROP2的小干扰RNA(siRNA),瞬时转染胃癌BGC-823细胞系,荧光实时定量PCR和Western blot法检测细胞TROP2mRNA和蛋白表达水平,MTT法测定细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移侵袭能力。结果酶切鉴定和DNA测序分析显示,TROP2靶向RNA干扰重组质粒构建成功。筛选得到最佳干扰效果质粒,该质粒转染细胞后,细胞增殖和迁移侵袭能力显著下降(P<0.05)。结论干扰TROP2基因具有抑制胃癌BGC-823细胞迁移侵袭的作用,TROP2基因可能成为癌基因靶向治疗的分子靶点。

COPD患者滋养层细胞表面抗原2水平及临床意义分析

目的分析慢性肺阻塞疾病(COPD)患者滋养层细胞表面抗原2(TROP2)表达及临床意义。方法选取2017年8月~2018年8月期间在我院接受治疗肺部手术COPD患者和非COPD患者各52例,分别作为COPD组和对照组,在获取患者同意基础下取肺部组织。肺部组织TROP2表达情况分析,比较两组肺部组织TROP2表达以及肺功能,免疫功能,COPD患者TROP2与肺功能、免疫功能相关性。结果TROP2免疫染色结果显示COPD患者肺部阳性表达TROP2显示为棕褐色,而对照组TROP2表达量较少,对基底细胞标记物Cytokeration以及TROP2双免疫荧光染色结果显示,TROP2表达于气道基底细胞;COPD组患者TROP2相对表达量显著高于对照组(P<0.05),FEV 1和FEV 1/FVC显著低于对照组(P<0.05);COPD组患者CD+4、CD+8以及CD+4/CD8均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);COPD患者TROP2与FEV 1和FEV 1/FVC等肺功能指标以及CD+4、CD+8等免疫功能指标负相关(P<0.05),而与CD+4/CD+8无相关性(P>0.05)。结论COPD患者气道基底细胞大量表达TROP2,且其与患者肺功能以及免疫功能关系密切。

血液D-D,NT-proBNP和TropⅠ联合检测在急性胸痛症早期诊断中的价值

目的分析联合检测血液D-二聚体(D-D),N末端B型脑钠肽(NT-proBNP)和超敏肌钙蛋白Ⅰ(TropⅠ)三项指标在急性胸痛患者早期诊断中的鉴别意义。方法以急性胸痛、胸闷、呼吸困难等为主要表现的急诊患者109例,入院后立即静脉采血检测,经确诊分为急性心肌梗死(AMI)组58例、急性肺动脉梗死(APE)组28例和急性主动脉夹层(AAD)组23例,同时随机分为联合检查组和常规检查组;另选同期健康体检人员101例作为对照组。分别比较三组患者基本资料,D-D,NT-proBNP和TropⅠ水平值,联合检查组和常规检查组入院初步诊断准确率差异。结果 AMI,APE和AAD三组间年龄、吸烟、高血压史、糖尿病史、高脂血症和血CK-MB差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.001);D-D,NT-proBNP,TropⅠ值与对照组比较差异均有统计学显著性意义(P<0.05)。对照组D-D值与AMI组比较,APE组和AAD组比较差异均有统计学显著性意义(P<0.05),NT-proBNP值与APE组比较,AMI组和AAD组比较差异有统计学显著性意义(P<0.05);TropⅠ值与AMI组比较,APE组和AAD组比较差异有统计学显著性意义(P<0.05);联合检测D-D,NTproBNP,TropⅠ三种标志物并结合临床表现及其他影像学检查在急性胸痛患者中初步诊断准确率可达95.4%,而常规的心电图、血细胞检测、电解质及心肌酶谱等诊断胸痛患者,其准确率仅为89.0%,两者间差异有统计学显著性意义(P<0.05)。结论对于急性胸痛症患者,联合检测D-D,NT-proBNP和TropⅠ并结合病史能够有效的帮助医生进行快速、准确地作出早期诊断,从而减少误诊,有效地提高患者生存率,对挽救生命具有重要意义。

增强型Trop2-CD40L病毒样颗粒疫苗的制备、纯化及活性研究

目的 获得嵌合免疫增强佐剂CD40配体（CD40L）的Trop2-CD40L病毒样颗粒（VLPs）疫苗,为后续探究VLPs在肿瘤治疗中的免疫原性及免疫保护作用奠定基础。方法 通过重叠延伸PCR方法扩增以Trop2为靶点、嵌合免疫佐剂CD40L的Trop2-CD40L融合基因,构建杆状病毒表达载体pFastbacTM /Trop2-CD40L,并转化大肠埃希菌E.coli DH10bac,提取杆粒并经PCR鉴定成功命名为Trop2-CD40L Bacmid,后者转染Tn5昆虫细胞获得重组病毒Trop2-CD40L rBV,与Gag rBV共感染昆虫细胞制备重组病毒样颗粒,透析浓缩后蔗糖密度梯度离心纯化,Western Blot鉴定VLPs目的蛋白表达、电镜观察所制备VLPs形态,Cytokine ELISA方法检测Trop2-CD40L VLPs体外生物学活性。结果 成功扩增了Trop2-CD40L融合基因,通过杆状病毒表达系统、借助SIV Gag衣壳蛋白装配特点成功制备了增强型Trop2-CD40L 病毒样颗粒,与Trop2 VLPs比较具有更好的生物学活性,差异具有统计学意义（t=7.266,,P〈0.05）。结论 制备出具有一定生物学活性的增强型Trop2-CD40L病毒样颗粒,证实了CD40L作为免疫佐剂使用有免疫增强效应。

Trop2病毒样颗粒的制备及纯化研究

目的获得Trop2为靶点的病毒样颗粒(VLPs),为进一步体内诱导实验和疫苗研究提供依据。方法利用分子克隆技术构建Trop2真核表达载体pCAGGs/Trop2和杆状病毒表达载体pFastbac1/Trop2,以pCAGGs/Trop2表达载体转化Hela细胞,用免疫细胞化学方法确定Trop2蛋白表达并锚定于胞膜上;以pFastbac1/Trop2转化大肠杆菌E.coliDH10bac菌株获得重组杆粒Trop2Bacmid,转染Tn5昆虫细胞获得重组病毒Trop2rBV,与本室保存的Gag rBV共感染昆虫细胞得到重组VLPs,透析浓缩后经蔗糖密度梯度离心纯化、蛋白免疫印迹(WB)鉴定,电镜观察病毒形态。结果构建成功的重组杆粒Trop2Bacmid转染Tn5昆虫细胞获得重组病毒Trop2rBV,与Gag rBV共感染昆虫细胞获得重组Trop2VLPs。结论成功制备了Trop2VLPs,为其后续诱导体液和细胞免疫应答研究奠定了基础。

过表达TROP2对细胞增殖及迁移能力的影响

目的探讨过表达肿瘤相关钙信号转导因子2(TROP2)对细胞增殖及迁移的影响,为阐明肿瘤的发生机制提供新的途径。方法构建TROP2真核表达载体pcDNA3-TROP2;采用脂质体法将pcDNA3-TROP2转染入人正常肝细胞LO2中,并通过G418压力筛选获得稳定表达TROP2的细胞株,之后通过MTT法检测细胞的活力,通过划痕法检测细胞的迁移能力。结果成功获得了过表达TROP2的细胞株;进一步的研究结果显示,过表达TROP2可增强细胞的活力和迁移能力。结论过表达TROP2可促进肿瘤的发生,此结果为阐明肿瘤发生机制及肿瘤治疗提供了新的途径。

TROP2在食管鳞状细胞癌中的表达及与临床病理的关系

目的检测TROP2在食管鳞状细胞癌组织中的表达,探讨其与临床病理的关系。方法实时荧光定量PCR方法对50例食管鳞状细胞癌组织及癌旁正常组织TROP2的表达水平检测,分析其与临床病理资料的关系。结果 TROP2在癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织(P<0.05);TROP2的高表达分别与食管癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期显著相关(P<0.05)。结论 TROP2的高表达与食管鳞状细胞癌临床病理密切相关。

靶向抑制胃癌细胞中TROP2基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响研究

目的探讨RNA干扰肿瘤相关钙信号传导因子2(TROP2)基因的表达对胃癌细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法以人胃黏膜正常细胞GES-1作为对照,RT-PCR检测人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞中TROP2 mRNA表达;TROP2 siRNA、Control siRNA转染SGC-7901细胞,不作任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后Western blotting检测TROP2、Ki67、Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果 TROP2 mRNA在人胃癌SGC-7901、MNK-28、BGC-823细胞表达均显著高于GES-1细胞(P<0.01),TROP2基因在SGC-7901细胞中的表达最高,选择作为后续的研究对象;转染TROP2 siRNA后TROP2蛋白表达显著降低(P<0.01);与对照组及Control-siRNA组比较,TROP2-siRNA组细胞存活率及Ki67、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论RNA干扰抑制TROP2基因的表达可降低胃癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。

TROP2 shRNA真核表达载体转染胃癌BGC-823细胞的沉默作用

目的:构建TROP2特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体,抑制人胃癌BGC-823细胞TROP2基因的表达.方法:构建TROP2短发夹环RNA,产生重组质粒转染胃癌BGC-823细胞,转染24h后用G418(浓度400mg/L)筛选,待细胞稳定后收集,分别命名为W组(未处理组),HK组(随机阴性对照质粒组),KB组(空质粒组),T1组,T2组,T3组.并运用实时荧光定量PCR和Western blot检测TROP2的表达.结果:TROP2特异性shRNA片段被成功克隆进pGensil1.1质粒中,重组质粒shRNA编码序列与设计片断的序列完全一致.与未转染细胞组、随机阴性对照组、空质粒组相比,转染shRNA重组质粒的人胃癌BGC-823细胞TROP2表达在mRNA和蛋白水平都受到抑制.与T1、T2组相比,T3组对TROP2mRNA和蛋白抑制作用最明显,差异具统计学意义(8.79±0.23vs9.54±0.20,9.57±0.23;3.66±0.11vs6.46±0.36,9.31±0.11,均P<0.05).结论:成功构建了针对TROP2的特异性shRNA真核表达载体并抑制了TROP2的表达,为进一步研究其基因功能打下了基础.

联合检测D-D,NT-proBNP和TropⅠ在急性胸痛患者早期诊断中价值分析

目的探索对于急性胸痛患者早期诊断中联合D-D、NT-proBNP和TropⅠ的诊断价值。方法选取因急性胸痛患者120例,根据其临床诊断分为心源性胸痛(57例)及非心源性胸痛(63例),入院即刻抽取静脉血检测D-D、NT-proBNP和TropⅠ水平,ELISA免疫试剂盒分别单独和联合检测各组阳性率。结果心源性胸痛患者D-D、NT-proBNP和TropⅠ水平高于非心源性胸痛患者(P<0.05);对于心源性胸痛组,D-D、NT-proBNP和TropⅠ单独检测阳性率均低于联合检测(P<0.05);而非心源性胸痛组,联合检测阳性率低于单独检测(P<0.05)。结论对于急性胸痛患者而言,联合检测D-D、NT-proBNP和TropⅠ能提高诊断准确,对后续治疗有一定指导意义。