硫氧还蛋白(Trx)是一种氧化还原调节蛋白,参与锥虫抗宿主氧化,生物信息学分析发现Trx-putative和Trx-like含有与Trx一样的“Tioredoxin-like super family”结构域,为了阐明其抗氧化功能,通过原核表达方法获得其重组蛋白,重组蛋白免疫S...硫氧还蛋白(Trx)是一种氧化还原调节蛋白,参与锥虫抗宿主氧化,生物信息学分析发现Trx-putative和Trx-like含有与Trx一样的“Tioredoxin-like super family”结构域,为了阐明其抗氧化功能,通过原核表达方法获得其重组蛋白,重组蛋白免疫SD大鼠制备抗性血清,间接免疫荧光试验观察其在虫体内的表达情况,DTT/胰岛素还原法测定其二硫键异构酶活性,金属催化氧化法测定其体外保护DNA超螺旋活性,利用PCR点突变的方法分析其结构与功能的关系。结果显示,获得了纯度较高的重组蛋白,Trx-putative和Trx-like广泛分布于虫体胞质内;Trx-putative可以催化胰岛素二硫键的打开,而Trx-like不具备此功能;Trx-putative和Trx-like均可对氧化损伤的pUC19质粒产生保护,突变蛋白的二硫键异构酶活性显著降低,抗氧化作用减弱。这些结果提示布氏锥虫Trx-putative和Trx-like具有抗氧化功能。展开更多
文摘硫氧还蛋白(Trx)是一种氧化还原调节蛋白,参与锥虫抗宿主氧化,生物信息学分析发现Trx-putative和Trx-like含有与Trx一样的“Tioredoxin-like super family”结构域,为了阐明其抗氧化功能,通过原核表达方法获得其重组蛋白,重组蛋白免疫SD大鼠制备抗性血清,间接免疫荧光试验观察其在虫体内的表达情况,DTT/胰岛素还原法测定其二硫键异构酶活性,金属催化氧化法测定其体外保护DNA超螺旋活性,利用PCR点突变的方法分析其结构与功能的关系。结果显示,获得了纯度较高的重组蛋白,Trx-putative和Trx-like广泛分布于虫体胞质内;Trx-putative可以催化胰岛素二硫键的打开,而Trx-like不具备此功能;Trx-putative和Trx-like均可对氧化损伤的pUC19质粒产生保护,突变蛋白的二硫键异构酶活性显著降低,抗氧化作用减弱。这些结果提示布氏锥虫Trx-putative和Trx-like具有抗氧化功能。
