补骨颗粒含药血清对大鼠软骨细胞凋亡及Trx2信号通路的影响

目的观察补骨颗粒含药血清对体外培养的大鼠膝关节软骨细胞凋亡及对Trx2、ASK1及Caspase3表达的影响,从而探讨补骨颗粒预防骨性关节炎发生发展的作用机制。方法采用两步酶消化法分离培养大鼠软骨细胞,并进行传代培养。应用膜联蛋白V-FITC/PI染色后经流式细胞仪检测软骨细胞的凋亡情况。同时,通过电泳分离蛋白并通过蛋白质印迹分析Trx2、ASK1及Caspase3的表达情况。结果软骨细胞培养15 d左右铺满80%~90%的培养皿,大部分细胞呈梭形。流式细胞检测结果显示空白血清组的细胞凋亡率为22.80%,明显高于含药血清组(P<0.05),而20%含药血清组(15.91%)与30%含药血清组(17.93%)的细胞凋亡率又明显低于10%含药血清组(21.58%),各组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。蛋白质印迹分析结果显示含药血清组Trx2的表达量都明显增多,以10%含药血清组的表达量最多;空白组与10%含药血清组的ASK1与Caspase3的表达量比20%与30%含药血清组多。结论补骨颗粒可以通过激活Trx2信号通路而抑制软骨细胞的凋亡,从而起到预防骨性关节炎发生发展的作用。

基于Trx2/ASK1信号通路探讨补骨颗粒对软骨细胞凋亡的调控机制

目的:观察补骨颗粒对软骨细胞凋亡及对Trx2/ASK1/Caspase-3表达的影响,从而探讨补骨颗粒对软骨细胞凋亡影响机制,为进一步研究补骨颗粒防治骨关节炎奠定实验基础。方法:将20只SD大鼠随机分为空白对照组,补骨颗粒低、中、高剂量组,每组5只。适应性喂养7 d,空白对照组给予蒸馏水2 m L·kg^(-1)灌胃,补骨颗粒低、中、高剂量组给予补骨颗粒1.54 g·kg^(-1)、3.08 g·kg^(-1)、6.16 g·kg^(-1)灌胃。干预14 d后,抽取血液经离心获得血清。通过酶联免疫吸附试验检测血清中Trx2、ASK1、Caspase-3表达量,采用MTT法检测血清干预后的细胞增殖活性,采用流式细胞仪检测血清干预后的软骨细胞凋亡率。结果:与空白对照组比较,补骨颗粒低、中、高剂量组Trx2、ASK1与Caspase-3含量明显减少,差异均有统计学意义(P <0.05);与补骨颗粒中剂量组比较,补骨颗粒低剂量组和高剂量组Trx2与ASK1含量明显增多,补骨颗粒低剂量组Caspase-3含量明显增多,差异均有统计学意义(P <0.05)。与空白对照组比较,补骨颗粒低、中、高剂量组OD值明显升高(P <0.05);补骨颗粒低、中、高剂量组组间比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。流式细胞仪检测发现,不加入硝普钠时(对照组1)软骨细胞的凋亡率最低为4.25%,加入硝普钠后(空白对照组1)软骨细胞的凋亡率变为46.86%,补骨颗粒低剂量组1软骨细胞的凋亡率(30.15%)高于补骨颗粒中剂量组1(27.77%)和高剂量组1(27.41%)。结论:补骨颗粒将会调控Trx2表达,并且不同剂量补骨颗粒将会通过Trx2-ASK1解离度调控Caspase-3活化程度而影响软骨细胞的凋亡,这将有助于进一步认识补骨颗粒对骨关节炎防治过程。