大豆胰蛋白酶抑制因子酶联免疫吸附测定方法的研究

本研究以纯化的大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子（KTI）为抗原，对兔子进行35天免疫得到了兔抗KTI血清。分别用辣根过氧化物酶（HRP）标记纯化的抗原与抗体，制备了标记适度的酶标抗原与酶标抗体。建立了3种检测KTI含量的酶联免疫吸附测定（ELISA）方法，即酶标抗原竞争、酶标抗体直接抑制和问接抑制法。结果表明，抑制率在20％～70％范围之内，3种方法得到的标准曲线均呈现良好的线性关系（r＞0．96），且检测下限均低于20ng／ml。根据得到的标准曲线，用酶标抗原竞争ELISA法测定了不同温度热处理的KTI中剩余活性部分的含量。结果表明，ELISA法与酶化学分析法的测定结果高度相关（r＝0．99），同时样品添加的回收率试验误差小于10％。酶标抗原竞争法还被用来测定了不同温度热处理的大豆和熟豆粕、全价饲料等几种大豆产品中KTI的含量。以上结果说明，用ELISA法检测生大豆和不同热加工形式的大豆产品中的剩余KTI含量是可行的。