猪囊尾蚴TsCL-1基因的原核表达

【目的】探讨原核表达猪囊尾蚴TsCL-1蛋白的生物学特性,为研究半胱氨酸蛋白酶(Cysteine proteinase,CP)在猪囊尾蚴与宿主相互关系中的作用奠定基础。【方法】将含有猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1基因的pGEX-4T-TsCL-1重组质粒转入大肠杆菌BL21进行表达,诱导后的重组菌裂解上清通过谷胱甘肽(GST)-琼脂糖亲和层析法进行纯化,纯化产物利用明胶蛋白电泳法进行活性检测。【结果】经SDS-PAGE分析显示,猪囊尾蚴TsCL-1基因表达的重组蛋白相对分子质量约为61ku,表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的57.4%。表达产物应用GST琼脂糖凝胶纯化后,纯化蛋白的纯度可达90%以上。明胶蛋白电泳结果显示,纯化蛋白对明胶具有水解活性,并且其水解活性能被半胱氨酸蛋白酶特异性抑制剂E-64抑制。【结论】从重组菌中成功表达了目的蛋白,该蛋白具有明显的水解活性,且E-64对其水解活性有抑制作用。

猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1动态结构柔性分析研究

通过对猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶Ts CL-1的结构模型进行分子动力学模拟,并对其进行模拟过程中的结构稳定性和动态结构柔性分析。结果表明,模拟过程中Ts CL-1总体结构相对稳定;分子的结构骨架具有较小的波动,而分子的表面环区和底物结合区域则具有较大的波动和较强的构象柔性。研究结果将为进一步深入研究Ts CL-1的动力学行为和功能关系奠定基础。

猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1的分子大尺度协同运动与催化功能关系研究

目的:通过分析猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1的分子大尺度协同运动对功能发挥的影响,阐述TsCL-1分子动力学行为与其催化性能的关系。方法:通过对TsCL-1分子动力学模拟的平衡轨迹进行本质动力学分析,对TsCL-1的大尺度协同运动进行研究,探讨其运动模式与生物学功能的关系。结果:TsCL-1的大尺度协同运动模式主要表现为大量表面环区和底物结合部位环区的运动,这些运动会导致底物结合口袋在尺寸和形状上的变化,因此可能和底物的结合、定位、催化以及产物释放有关。结论:TsCL-1的大尺度协同运动模式,与底物的结合、定位和催化反应相关,将有利于其催化功能的发挥。

猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶TsCL-1结构的同源模建

通过同源模建方法构建猪囊尾蚴半胱氨酸蛋白酶Ts CL-1的三维结构模型,并对其结构进行分析。结果表明,Ts CL-1的结构模型具有半胱氨酸蛋白酶CA族典型的α/β折叠模式,结构骨架主要由两个不同的结构域组成。结构模型具有保守的半胱氨酸催化三聚体(Cys25-His163-Asn183),催化三聚体位于两个结构域的表面,结构模型中存在3对二硫键。研究结果将为进一步深入研究Ts CL-1的结构和功能关系奠定结构基础。

β-环糊精磺酰化的超分子作用机理研究

研究了不同反应介质、操作方式、反应温度等对 β-环糊精与对甲苯磺酰氯磺酰化反应的影响 .结果表明 ,在吡啶介质中生成 6位取代的 β-CD单对甲苯磺酸酯 ,产率为 54% ;而在 p H≥ 1 3的 Na OH水溶液中则生成 2位取代的β-CD单对甲苯磺酸酯 ,产率达 65% .根据β-CD分子形态和空腔的结构特性 ,提出β-CD磺酰化的反应历程 。

副词“倒”的预期推断与语法意义——兼谈对外汉语副词教学

从分析“倒”出现的语义背景和语义格式人手，可以看出“倒”的出现具有一个语义前提，“倒”的基本语法意义表示实际与在语义前提下推断出来的预期不同，“不同”包括相反和不一致。文章着重分析了预期推断的类型：自述者推断和受话者推断，在此基础上，探讨了“倒”的使用条件。然后再结合上下文语境和格式特点得出“倒”的格式语法意义增强语气，主要有“出乎意料”、“反驳、辩解”、“姑且同意”、“追究”、“催促”和“委婉”等。最后，结合“倒”谈论如何进行对外汉语副词教学。

教学对外汉语汉字字源教学法论略

汉字教学是对外汉语教学的重点、难点,很多外国学生看到汉字形体变化多端,便望而生畏以致打消了汉语学习的热情。因此探索对外汉字教学的有效途径就凸显了其急迫性和重要性。文章以汉字字源为分析对象,在对对外汉语汉字教学现状分析的基础上提出了汉字字源教学法,并着重就其内涵和价值进行了分析。

论对外汉语教学对留学生教育发展的影响

语言既是人与人之间传递信息和相互沟通的重要工具,更是世界各民族人民相互学习和交流的载体。对外汉语是外国留学生在中国学习必经的语言桥梁,只有搭建好这座桥梁,留学生在中国的学习和生活才能顺利进行,留学生教育在我国才能发展壮大。由此可见,对外汉语教学对发展留学生教育有着及其重要的作用,两者的关系是唇齿相依的。我们要发展留学生教育,必须重视对外汉语教学并提高其教学质量。为此,我们必须建立一支强有力的对外汉语教师队伍,确保我校留学生的教育质量,从而促进留学生教育的可持续发展。

基于Timeliner思想的航天器控制语言设计与编译实现

在过去的30年中,Timeliner语言被成功应用在国际空间站和轨道快车的任务管理、核心操作与有效载荷操作、运载火箭提供自主发射控制系统等诸多方面。然而Timeliner的相关技术研究大多集中在欧美发达国家,因此开展和掌握Timeliner相关技术对促进我国相关领域研究和应用水平的提高具有重要意义。本文基于对Timeliner语言的深入分析和将其在自主任务规划调度领域应用的成功经验,借鉴Timeliner思想设计了TSCL(Timeliner-based Spacecraft Control Language)脚本控制语言规范,实现了一个简单的编译执行环境原型,为今后的研究与应用打下良好的基础。

温和催化液相重排制备ε-己内酰胺

以对甲苯磺酰氯(TsCl)作催化剂,乙腈为溶剂,催化环己酮肟液相贝克曼重排制备ε-己内酰胺。考察了不同的催化体系、反应温度、反应时间、催化剂用量、溶剂用量等因素对反应的影响,建立了适宜的反应条件:环己酮肟2.0 g,对甲苯磺酰氯1.5 g,乙腈20 mL,反应温度60℃,反应时间2.5 h,环己酮肟转化率达98.4%,ε-己内酰胺选择性达93.6%。该法反应条件温和,操作简单,溶剂乙腈可重复使用。

TSC1基因移码突变导致的结节性硬化症家系的遗传学研究

目的 对一个TSC1基因突变的结节性硬化症家系临床表型及遗传学特征总结分析,为遗传咨询提供依据。方法 在该家系三代近亲中先证者及其外祖母、大姨、三姨、母亲、妹妹6人临床表型符合结节性硬化症,并对先证者及其父母、妹妹进行TSC1、TSC2基因全部编码区及侧翼剪切位点进行PCR扩增,产物进行测序进行突变分析,同时对35名无亲缘关系的正常对照进行检测,进一步分析该基因变异与临床表型相关性。结果 先证者及其母亲、妹妹均在TSC1基因第10号外显子存在NM_000368.5:c.917_923dupGTGCTAC突变,导致蛋白水平发生异常(p.Ser309Cysfs*34,309位置的氨基酸由丝氨酸变为半胱氨酸,从309这个位置开始,继续翻译34遇到终止密码子,导致了蛋白翻译提前终止),父亲未发现该变异,且父亲临床表型正常,35名正常对照中未检测到突变。经检索HGMD数据库该突变为新发突变,既往未见该突变相关报道,符合家系疾病表型遗传共分离。结论 TSC1基因c.917_923碱基重复移码突变可能为该家系结节性硬化症患病的原因。同一家系中TSC1基因相同位点突变临床表型具有很强的异质性。

食源性肥胖大鼠下丘脑Tsc1启动子区甲基化率、mTOR表达变化

目的观察食源性肥胖大鼠下丘脑结节性硬化症基因1(tuberous sclerosis complex 1,Tsc1)启动子区甲基化率及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达。方法 16只雄性SD大鼠分为高脂喂养组和基础饲料喂养组(对照组),每组8只,共喂养12周。测定两组大鼠体质量、腹腔脂肪量、腹腔脂肪/体质量比值,采用重亚硫酸盐的测序法检测Tsc1启动子甲基化,RT-PCR、Western blot分别检测mTOR mRNA和蛋白表达。结果高脂组大鼠体质量、腹腔脂肪量、腹腔脂肪/体质量比均高于对照组(P<0.05)。两组大鼠下丘脑Tsc1启动子区均有11个位点可被甲基化,食源性肥胖组甲基化率(94.50%±4.66%)高于对照组(86.60%±3.49%,P<0.002),mTOR mRNA和蛋白表达均高于对照组(P<0.05)。结论食源性肥胖大鼠下丘脑Tsc1基因启动子甲基化率增加,其下游基因mTOR表达上调,可能参与了肥胖的发生。