抗芜菁花叶病毒转基因大白菜的培育

以大白菜栽培品种“福山大包头”的子叶柄为供试材料 ,对影响大白菜植株再生和基因转化频率的因素进行了研究。在此基础上 ,建立了大白菜高效再生体系和有效的基因转化体系 ,并将芜菁花叶病毒的 CP基因 (Tu MV- CP)导入大白菜中 ,获得转化植株。 PCR检测和 Southern杂交分析证明Tu MV- CP基因已整合于大白菜的基因组中 ;Northern杂交分析及 EL ISA检测表明 Tu MV- CP基因在转录和翻译水平上进行了有效表达。转基因植株 T1代的遗传分析表明 ,外源基因在转基因植株后代中遵循 3∶ 1的分离规律。抗病性测定结果显示 ,转基因植株具有明显的抗病毒侵染能力。

十字花科蔬菜芜菁花叶病毒的RT-PCR快速检测

利用RT PCR技术 ,建立了一种简便、快速、准确地检测十字花科蔬菜芜菁花叶病毒的方法。应用该方法 ,不需复杂的提取、纯化病毒RNA过程 ,直接对田间病样简单处理后进行RT PCR检测。通过获得包含该病毒CP基因的cDNA片段 。

转基因结球大白菜的遗传转化

采用农杆菌介导法将TuMV-CP基因导入结球大白菜中,确定了影响大白菜离体再生的主要因素,并确定了最佳大白菜离体培养的条件,建立了高效的大白菜离体再生体系、遗传转化体系。

转基因结球大白菜分子生物学检测

采用农杆菌介导法将TuMV-CP基因导入结球大白菜中,建立了高效的大白菜离体再生体系、遗传转化体系,并对转基因植株进行分子生物学检测,证实得到的再生植株为转基因植株,目的基因已在部分植株上表达。同时,对转基因植株的后代进行检测,分析该基因所控制性状的遗传稳定性以及基因表达情况,为大白菜基因工程抗病毒病育种奠定基础。

重庆市萝卜芜菁花叶病毒的检测与序列分析

为明确重庆市萝卜感染芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)的情况,在重庆市巴南区、九龙坡区、北碚区等14个区县共采集了146份萝卜病毒病样品,采用酶联免疫吸附试验法(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)对病样进行TuMV检测,并通过PCR、克隆和测序等技术获得13个TuMV分离物CP核苷酸序列,利用软件分析重庆市TuMV CP基因序列的相似性,利用系统进化树分析CP基因遗传变异与系统进化。结果表明,共有105份样品的TuMV检测为阳性,检出率为71.9%;所得13个分离物CP基因均为864 bp,测序的13个分离物CP核苷酸相似性为89.1%~99.2%,与国内已报道的TuMV各分离物CP核苷酸相似性在88.3%~99.4%之间;所得的13个分离物均分布在basal-BR和world-B组中,在Asian-BR和basal-B组中均无分布,进一步分析发现有9个分离物属于word-B组,仅4个分离物属于basal-BR组。研究表明,TuMV在重庆市萝卜各种植区普遍发生,且word-B组为重庆市萝卜的优势毒源。