梅花鹿结核病间接ELISA方法的建立

为了建立鹿结核病的快速检测方法,试验采用亲和层析方法纯化梅花鹿血清IgG,并免疫兔,制备兔抗梅花鹿IgG抗体,辣根过氧化物酶(HRP)进行标记,通过ELISA和Western-blot对HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体进行鉴定。同时合成结核分枝杆菌38 ku基因,并与pET-22b(+)质粒连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,诱导表达和纯化38 ku蛋白,以38 ku蛋白作为包被抗原,以HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体作为二抗,建立间接ELISA方法。利用建立的间接ELISA方法对结核菌素皮肤试验检出的20份阴性血清和10份阳性血清进行验证。结果表明:对梅花鹿血清IgG进行纯化,得到大小分别约为50 ku和25 ku的蛋白质;制备的HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体可特异性识别梅花鹿血清IgG,在抗体浓度稀释比例为1∶20000时仍有很好的结合效果;38 ku蛋白作为抗原的最佳包被浓度为1μg/mL,被检梅花鹿血清的最佳稀释比例为1∶100,HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体的最佳稀释比例为1∶10000;间接ELISA方法能够准确区分结核菌素皮肤试验确定的阳性和阴性梅花鹿血清。说明试验建立的间接ELISA方法能够作为鹿结核病血清学快速检测的有效方法,弥补了传统方法的不足。

酶联免疫电泳技术检测结核抗体及其临床意义

用酶联免疫电泳技术（ELIEP）检测474例血清结核抗体，并和ELISA法作对照。ELIEP的阳性率为95．5％。结果表明本法可作为结核病诊断及普查的可靠血清学方法。

高敏荧光免疫层析分析法检测牛分枝杆菌抗体

为探究高敏荧光免疫层析分析法检测牛分枝杆菌(M. bovis)抗体的可行性,对该方法的特异性、灵敏性、稳定性及临床适用性进行了分析。特异性试验结果显示,该方法能够检出M. bovis抗体阳性血清参考品,而对布鲁氏菌阳性血清、O型口蹄疫阳性血清、A型口蹄疫阳性血清、样品稀释液、结核菌素皮内变态反应(TST)阴性牛血清样品等均为阴性;灵敏性试验结果显示,该方法最低可检测到3 200倍稀释的牛结核(bTB)强阳性血清参考品;稳定性试验结果显示,该方法检测bTB强阳性血清和阳性血清的变异系数分别为5.48%和5.83%;临床样本检测结果显示,该方法与IDEXX M bovis ELISA抗体检测试剂盒的符合率为86.36%,具有较高的一致性,且差异不显著。以上结果表明,高敏荧光免疫层析分析法特异性强、灵敏度高、结果可靠,可作为TST检疫的补充抗体检测方法,用于bTB的诊断、检疫和净化。

结核酶联免疫斑点试验与抗结核抗体平行检测比较

目的比较评价结核分枝杆菌特异性细胞免疫检测与抗体免疫检测在结核诊断中的应用价值。方法分别采用免疫胶体金技术及结核分枝杆菌抗原ESAT-6特异性IFN-y酶联免疫斑点检测技术（ELISPOT）对113例结核病患者和90名健康对照进行结核菌特异性抗体免疫和细胞免疫测试；对健康对照还采用PPD皮试进行细胞免疫检测。对12例结核患者和10名健康对照同时采用ELISPOT和T—SPOT．TB试剂盒进行平行检测。结果ELISPOT检测的阳性阈值判定根据受试者操作特征（ROC）曲线分析获得最佳阈值为30个斑点／2×10^5个细胞，以此判断ESAT-6刺激后IFN-y释放水平诊断结核病敏感度为75．2％，特异度为85．6％。在90名健康对照中，抗体检测和ELISPOT检测阳性率分别为26．67％和14．44％，PPD皮试强阳性的比例为27．78％；ELISPOT检测及抗体检测均与PPD皮试结果正相关（r值分别为0．280，0．253，P均〈0．05）。在113例结核患者中，ELISPOT检测和抗体检测的阳性率分别为77．88％和60．18％。ELISPOT检测对结核病辅助诊断的阳性预测值为86．27％、阴性预测值为75．25％，抗体检测分别为73．91％和59．46％；2种方法阳性预测值和阴性预测值比较差异均有统计学意义（X^2=3．941，P=0．047；X^2=5．268，P=0．022）。采用T-SPOT．TB与ELISPOT检测结果进行配对比较，差异无统计学意义（X^2=0．500，P=0．480）。结论结核分枝杆菌ESAT-6抗原特异性IFN-y的细胞免疫检测技术在结核病临床辅助诊断的应用价值显著高于结核菌特异性抗体检测，值得进一步优化和推广。

斑点免疫渗滤法检测结核杆菌抗体试剂盒的研制

介绍斑点免疫渗滤法检测结核杆菌抗体（ＴＢＡｂ）试剂盒的研制方法。该法是以酶联免疫吸附试验原理和亲和层析原理为基础，采用硝酸纤维素薄膜（ＮＣ膜）作为固相载体而建立一种简便（三步）、快速（５～１０ｍｉｎ）、特异性强、灵敏度高（ｎｇ水平）的新方法。该法的逐步完善将在流行病学调查和临床医学检查中得到广泛应用。

检测血清中BCG－A_（60）抗体对结核病诊断的临床意义

ＢＣＧ－Ａ＿（６０）是从牛型结核分支杆菌的胞浆中提纯出来的抗原，为了解用聚合酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）法检测血清中抗ＢＣＧ－Ａ＿（６０）抗体对结核病诊断的临床意义，对７３４例健康人和非结核病人，以及５６０例结核病患者作了抗ＢＣＧ－Ａ＿（６０）抗体的检测。结果证实，ＥＬＩＳＡ－Ａ＿（６０）·ＩｇＧ诊断结核病的特异性为８９．３％，敏感性为８４．５％，获得较满意的效果，认为可用于临床对结核病的辅助诊断。还发现在活动性原发型肺结核中ＩｇＭ的阳性率明显高于ＩｇＧ。ＩｇＭ除在急性期病例阳性率高外，而且也见于慢性结核病例。这些证明ＩｇＭ的血清学分析在结核病早期诊断中也是一项重要的辅助手段，在诊断结核性脑膜炎，以及肺结核合并其它活动性肺外结核中有补充ＩｇＧ的价值。