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河豚4SNc-Tudor蛋白的鉴定及生物信息分析 被引量:6
1
作者 徐庆刚 陆健 +2 位作者 郑建洲 陈华友 陈克平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第3期1163-1166,共4页
[目的]对河豚4SNc-Tudor蛋白(SN4TDR)进行序列与结构相关的生物信息分析,为认识该蛋白结构与功能提供借鉴。[方法]应用双向电泳及基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALD I-TOFMS)技术,从河豚肝脏总蛋白中鉴定到河豚的4SNc-Tudor结... [目的]对河豚4SNc-Tudor蛋白(SN4TDR)进行序列与结构相关的生物信息分析,为认识该蛋白结构与功能提供借鉴。[方法]应用双向电泳及基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALD I-TOFMS)技术,从河豚肝脏总蛋白中鉴定到河豚的4SNc-Tudor结构域蛋白。并对其进行生物信息学分析。[结果]首次从河豚肝脏总蛋白中鉴定到河豚的4SNc-Tudor结构域蛋白SN4TDR。河豚SN4TDR定位于细胞质,无信号肽,为非分泌蛋白,有多个磷酸化位点。蛋白SN4TDR存在α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲结构,有一个可能形成跨膜结构的片段。并用同源建模的方法,预测了河豚SN4TDR的三维结构模型。[结论]分析河豚SN4TDR基因及蛋白结构,有助于进一步研究该蛋白及其基因的分子和生物学功能。 展开更多
关键词 河豚 MALDI—TOF MS 4SNc—tudor 生物信息学
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Tudor-SN蛋白TSN结构域亚结构片段重组质粒的构建与表达
2
作者 钱宝鑫 高星杰 +5 位作者 朱梦瑜 杨震霞 宋娟 段中潮 邵洁 杨洁 《天津医药》 CAS 北大核心 2011年第10期881-883,985,共4页
目的:研究人类Tudor-SN蛋白TSN结构域4个亚片段的功能,构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN(Ⅰ一Ⅳ)。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增出目的基因,将双酶切后带有粘性末端的目的片段和pEGFP-C2... 目的:研究人类Tudor-SN蛋白TSN结构域4个亚片段的功能,构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN(Ⅰ一Ⅳ)。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增出目的基因,将双酶切后带有粘性末端的目的片段和pEGFP-C2载体连接,从而构建重组质粒pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN(I-IV)。将构建成功的重组质粒用脂质体法转染HeLa细胞,并在荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达。结果:对重组质粒进行双酶切鉴定可见Tudor-SN-TSN(Ⅰ~Ⅳ)的cDNA片段;脂质体转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN(Ⅰ~Ⅳ)。结论:真核pEGFP-C2-Tudor-SN-TSN(Ⅰ~Ⅳ)重组质粒构建及表达成功。 展开更多
关键词 DNA结合蛋白质类 质粒 基因表达 转染 重组融合蛋白质类 人类tudor-SN蛋白
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重组pCMV-N-Tudor-SN点突变质粒的构建及表达 被引量:1
3
作者 杨文栋 苏超 +5 位作者 张春燕 赵亚丽 任媛媛 高星杰 杨洁 何津岩 《天津医科大学学报》 2016年第1期5-8,共4页
目的:构建Tudor-SN蛋白的Serine426(S426)、Serine781(S781)、Threonine240(T240)和Threonine429(T429)的点突变质粒,并使该重组质粒能够在He La细胞中融合表达。方法:利用定点突变技术,对Tudor-SN蛋白进行S426A、S781A、T240A、T429A... 目的:构建Tudor-SN蛋白的Serine426(S426)、Serine781(S781)、Threonine240(T240)和Threonine429(T429)的点突变质粒,并使该重组质粒能够在He La细胞中融合表达。方法:利用定点突变技术,对Tudor-SN蛋白进行S426A、S781A、T240A、T429A点突变,通过双酶切的方法获得Tudor-SN.Mutants片段,最后将其连入到p CMV-N-Flag载体中。在He La细胞中转染该质粒,利用Western blot技术检测质粒表达效率。结果:(1)重组质粒经双酶切鉴定,可以观察到载体与Tudor-SN.Mutants的条带。(2)转染突变质粒后可看出He La细胞中有Flag蛋白表达。结论:质粒构建成功,可以用于下一步科学研究使用。 展开更多
关键词 人类tudor-SN蛋白 pCMV-N-Flag 重组质粒 融合蛋白
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Tudor and its domains: germ cell formation from a Tudor perspective 被引量:3
4
作者 Travis THOMSON Paul LASKO 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2005年第4期281-291,共11页
In many metazoan species, germ cell formation requires the germ plasm, a specialized cytoplasm which often con-tains electron dense structures. Genes required for germ cell formation in Drosophila have been isolated p... In many metazoan species, germ cell formation requires the germ plasm, a specialized cytoplasm which often con-tains electron dense structures. Genes required for germ cell formation in Drosophila have been isolated predominantlyin screens for maternal-effect mutations. One such gene is tudor (tud); without proper tud function germ cell formationdoes not occur. Unlike other genes involved in Drosophila germ cell specification tud is dispensable for other somaticfunctions such as abdominal patterning. It is not known how TUD contributes at a molecular level to germ cell forma-tion but in tud mutants, polar granule formation is severely compromised, and mitochondrially encoded ribosomal RNAsdo not localize to the polar granule. TUD is composed of 11 repeats of the protein motif called the Tudor domain. Thereare similar proteins to TUD in the germ line of other metazoan species including mice. Probable vertebrate orthologuesof Drosophila genes involved in germ cell specification will be discussed. 展开更多
关键词 生殖细胞 形成 种质 果蝇 种系 tudor 蛋白质域
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重组真核质粒pERFP-C1-hTudor-SN-SN(1~4)的构建和表达
5
作者 付晓 朱梦瑜 +5 位作者 高星杰 钱宝鑫 王保亚 赵虹 葛林 杨洁 《天津医药》 CAS 北大核心 2011年第2期97-100,共4页
目的:将人类Tudor-SN蛋白SN(1~4)基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目... 目的:将人类Tudor-SN蛋白SN(1~4)基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pERFP-C1载体上,再将构建成功的pERFP-C1-Tudor-SN-SN(1~4)重组质粒转染入HeLa细胞内,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白的表达。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜下观察到红色融合蛋白的表达。结论:重组pERFP-C1-h Tudor-SN-SN(1~4)质粒构建及表达成功。 展开更多
关键词 质粒 遗传载体 发光蛋白质类 重组融合蛋白质类 转染 HELA细胞 人类tudor-SN蛋白
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人Tudor-SN UTR片段荧光素酶报告基因表达质粒的构建及活性检测
6
作者 赵亚丽 苏超 +4 位作者 甘世虎 任媛媛 高星杰 杨洁 何津岩 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第4期1-4,共4页
目的为深入研究Tudor-SN蛋白本身在翻译水平的调控机制奠定基础。方法以HeLa细胞全基因组DNA为模板,PCR扩增出目的基因,利用双酶切的方法将目的片段连接到pGL3-Control载体上。再将构建成功的pGL3-5'UTR、pGL3-3'UTR重组质粒分... 目的为深入研究Tudor-SN蛋白本身在翻译水平的调控机制奠定基础。方法以HeLa细胞全基因组DNA为模板,PCR扩增出目的基因,利用双酶切的方法将目的片段连接到pGL3-Control载体上。再将构建成功的pGL3-5'UTR、pGL3-3'UTR重组质粒分别与内参海肾荧光素酶质粒瞬时共转染HeLa细胞,培养48h检测荧光素酶的活性。结果双酶切和基因测序法鉴定重组质粒构建成功,转染重组质粒后可检测到荧光素酶的活性;以pGL3-5'UTR质粒荧光素酶活性最高。结论成功构建了人Tudor-SN基因5'UTR和3'UTR序列的重组质粒,为研究Tudor-SN基因UTR区对翻译调控的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 tudor-SN蛋白 重组质粒 荧光素酶
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敲低Tudor-SN对血管平滑肌细胞增殖迁移和凋亡的影响 被引量:3
7
作者 刘明霞 马锦征 +2 位作者 苏超 杨洁 魏民新 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2022年第7期687-693,共7页
目的经皮冠状动脉介入治疗冠心病有较好的近期疗效,但患者长期预后却受血管再狭窄的制约,血管平滑肌细胞(VSMC)的表型转化是导致血管狭窄的主要原因。文章通过构建敲低Tudor-SN稳定株,检测Tudor-SN基因对大鼠血管平滑肌细胞A7R5增殖、... 目的经皮冠状动脉介入治疗冠心病有较好的近期疗效,但患者长期预后却受血管再狭窄的制约,血管平滑肌细胞(VSMC)的表型转化是导致血管狭窄的主要原因。文章通过构建敲低Tudor-SN稳定株,检测Tudor-SN基因对大鼠血管平滑肌细胞A7R5增殖、迁移、凋亡的影响,为研究血管平滑肌细胞表型转化和血管再狭窄发病机制提供细胞模型。方法通过制备敲低Tudor-SN基因的重组慢病毒,感染A7R5细胞,加入嘌呤霉素药物筛选出低表达Tudor-SN基因的稳定株;使用Western blot检测Tudor-SN敲低效果;在表型实验中,将A7R5细胞分为pLKO-Vector对照组和sh-Tudor-SN实验组,利用CCK-8实验、免疫荧光实验、细胞划痕实验和流式细胞术分别检测对照组和实验组A7R5细胞的增殖、迁移和凋亡的变化;使用PDGF诱导pLKO-Vector对照组和sh-Tudor-SN实验组细胞表型转化,检测Tudor-SN蛋白表达。结果成功构建了敲低Tudor-SN的shRNAs的重组慢病毒稳定株;表型实验结果显示,敲低Tudor-SN后,实验组从第3天起细胞增殖能力明显低于对照组,实验组迁移面积(1.6、1.7μm^(2))与对照组(2.7μm^(2))相比明显下降(P<0.05),细胞凋亡能力增加(P<0.05);给予PDGF刺激,Tudor-SN蛋白表达增加(P<0.05);与对照组相比,实验组Tudor-SN蛋白表达有所增加(P<0.05)。结论敲低Tudor-SN血管平滑肌细胞增殖及迁移能力降低,凋亡水平增加,并且敲低Tudor-SN降低了PDGF诱导的VSMC表型转化,表明Tudor-SN蛋白参与并促进了VSMC表型转化。 展开更多
关键词 tudor-SN 血管平滑肌细胞 表型转化 细胞增殖 细胞迁移 细胞凋亡
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利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除H9c2细胞Tudor-SN基因对细胞周期的阻滞及增殖的抑制 被引量:2
8
作者 甘世虎 崔晓腾 +6 位作者 马锦征 房丽娇 刘明霞 任媛媛 曹晓娜 杨洁 苏超 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期754-759,共6页
基因特异性敲除的细胞常用于生物学研究。近些年兴起的CRISPR-Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas9 nuclease)基因编辑技术越来越广泛地用于基因特异性敲除的实验中。本实验通过利用CRISPR-Cas9基因... 基因特异性敲除的细胞常用于生物学研究。近些年兴起的CRISPR-Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas9 nuclease)基因编辑技术越来越广泛地用于基因特异性敲除的实验中。本实验通过利用CRISPR-Cas9基因编辑技术,实现对大鼠心肌H9c2细胞Tudor-SN(tudor staphylococcal nuclease)基因的敲除,并观察其对H9c2细胞周期及增殖的影响。选择PX462质粒为载体,利用软件设计能特异性识别H9c2细胞Tudor-SN基因第2个外显子的上下游sgRNA(single-guided RNA),构建1对重组质粒。随后,将这对质粒共同转入H9c2细胞中,再挑选阳性单克隆细胞进行培养。Western印迹鉴定其敲除效果,并用敲除成功的细胞株通过流式细胞术及CCK-8(cell counting kit 8)实验进行细胞周期和增殖的检测。Western印迹结果显示,在阳性细胞中,Tudor-SN蛋白不表达,成功实现了对Tudor-SN基因的敲除。流式结果显示,Tudor-SN基因敲除(KO)细胞发生了G1期阻滞。G1期细胞占比由H9c2野生型(WT)细胞的54.28%±0.21%升高到KO细胞的61.96%±0.40%(*P<0.05)。CCK-8实验结果显示,KO细胞的增殖速率减慢。生长第6天的A值由WT细胞的2.82±0.03降低到KO细胞1.85±0.19(*P<0.05)。本实验成功构建了H9c2细胞Tudor-SN基因敲除细胞株,并检测到Tudor-SN基因敲除对细胞周期的阻滞及增殖的抑制,为研究Tudor-SN基因对心肌细胞功能的调控提供了便利的工具及研究的基础。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas9基因编辑技术 基因敲除 H9C2细胞 tudor-SN基因 细胞周期阻滞与增殖
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On the Power Attribute of the Court of Admiralty of England in the Tudor Dynasty
9
作者 HAN Chenguang 《Cultural and Religious Studies》 2022年第12期702-714,共13页
Why the court of admiralty of England reached its peak during the Tudor period is a long-standing issue in academic circles,and it is necessary to clarify the attribute of the Court of Admiralty before answering this ... Why the court of admiralty of England reached its peak during the Tudor period is a long-standing issue in academic circles,and it is necessary to clarify the attribute of the Court of Admiralty before answering this question.A comprehensive inspection of the admirals,judges of admiralty courts’patents,and statutes of the realm during the Tudor period reveals that,on the one hand,the court of admiralty passed the substantive admirals’judicial privileges,the typification of court of admiralty orders,and the autonomy of trial and enforcement privileges.On the other hand,on the basic of maritime upstarts,the court of admiralty,got rid of the control of the royal power and became an independent force in the English judicial system.The substantively operating independently court of admiralty may be the first comprehensive national judicial institution established in England in the early modern period. 展开更多
关键词 tudor Dynasty Court of Admiralty power attributes
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The Linguistic and Cultural Characteristics of the Tudor Dynasty in England
10
作者 孙雨琦 《海外英语》 2019年第11期261-263,共3页
Tudor dynasty was a transitional period from feudalism to capitalism and was considered as a golden age in the history of British absolute monarchy.During this period,the language English has changed,and the linguisti... Tudor dynasty was a transitional period from feudalism to capitalism and was considered as a golden age in the history of British absolute monarchy.During this period,the language English has changed,and the linguistic and cultural characteristics for the great changes with the help of early English communication corpus are worthy of further discussion. 展开更多
关键词 tudor DYNASTY language LINGUISTIC characteristic CULTURAL characteristics early English communication corpus(CEEC)
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A Study of the Subtitle Translation of The Tudors from the Perspective of Functional Equivalence
11
作者 李醒 《海外英语》 2018年第16期127-128,共2页
In this thesis,the author tries to analyze the subtitle translation of the Tudors from the perspective of functional equiva-lence and uses many examples to analyze different translation approaches such as literal tran... In this thesis,the author tries to analyze the subtitle translation of the Tudors from the perspective of functional equiva-lence and uses many examples to analyze different translation approaches such as literal translation,free translation,paraphrase,addition and omission in details.According to the author,different approaches should be applied in order to achieve functionalequivalence.Sometimes,even in dealing with the same subtitles,the translations may be quite different because of the adaptationof different approaches.Moreover,the ultimate goal of translation is to enable the targeted audiences to understand and appreciatethe movies or TV programs as the original audiences do.This is also a very significant standard of judging whether the translation isgood or not.At last,what should be pointed out is that the most important thing that translators should pay attention to is that theyshould always bear the audiences in their mind. 展开更多
关键词 英语学习 学习方法 阅读知识 阅读材料
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针对人Tudor-SN蛋白T103位点的应激磷酸化抗体制备及分析 被引量:1
12
作者 高星杰 张毅 +7 位作者 苏超 付雪 史雪彬 尹洁 何津岩 王鑫廷 姚智 杨洁 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期55-60,共6页
目的:针对人Tudor-SN蛋白T103位点(103位苏氨酸,Thr103)制备兔源多克隆磷酸化抗体,并进行应激磷酸化的时相分析。方法:首先人工合成含磷酸化T103(pT103)位点的多肽,4次免疫新西兰大白兔后获取抗血清;然后以AKTA蛋白纯化系统进行纯化,并... 目的:针对人Tudor-SN蛋白T103位点(103位苏氨酸,Thr103)制备兔源多克隆磷酸化抗体,并进行应激磷酸化的时相分析。方法:首先人工合成含磷酸化T103(pT103)位点的多肽,4次免疫新西兰大白兔后获取抗血清;然后以AKTA蛋白纯化系统进行纯化,并利用Western blotting和细胞免疫荧光实验对纯化后的抗pT103抗体进行鉴定;最后以In-cell Western法进行Tudor-SN蛋白的应激磷酸化/去磷酸化时相性分析。结果:(1)确定并合成磷酸化多肽"TIENKpTPQGRC",收集约75 ml兔源抗血清,纯化后获取2.08 mg/ml抗pT103抗体;(2)当HeLa细胞受到氧化应激时,以pT103抗体检测的磷酸化信号增强,可在胞浆中检测到颗粒状信号,与内源性Tudor-SN应激颗粒存在共定位关系;(3)在氧化应激及应激去除后恢复过程中,T103位点的磷酸化水平呈现一定的波动性时相。结论:成功制备针对Tudor-SN蛋白T103位点的兔源多克隆抗pT103抗体,有助于从磷酸化修饰角度进行Tudor-SN在细胞应激方面的机制探讨。 展开更多
关键词 tudor-SN 磷酸化 抗体 应激颗粒
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重组原核质粒GST-hTudor-SN-SN(1~4)的构建及表达
13
作者 苏超 朱梦瑜 +5 位作者 高星杰 王鑫廷 张桂敏 付晓 葛林 杨洁 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期483-487,共5页
目的 将人类Tudor-SN(tudor staphylococcal nuelease)蛋白SN(1~4)基因片段分别定向连入pGEX-4T-1质粒,使Tudor-SN蛋白sN各功能片段与(;"蛋白在大肠埃希菌BL21细胞内融合表达.方法 以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩... 目的 将人类Tudor-SN(tudor staphylococcal nuelease)蛋白SN(1~4)基因片段分别定向连入pGEX-4T-1质粒,使Tudor-SN蛋白sN各功能片段与(;"蛋白在大肠埃希菌BL21细胞内融合表达.方法 以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的 基因,利用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切法将目的 片段连接纠pGEX-4T-1载体卜,再将构建成功的GST-hTudor-SN-SN(1~4)重组质粒转化人大肠埃希菌BL-21内,IPTG诱导表达后再以考马斯亮蓝染色法检测GST融合蛋白的表达.结果 以单/双酶切和基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,考马斯亮监染色法观察到GST融合蛋白的正确表达.结论 重组原核GST.hTudor-SN-SN(1-4)质粒成功构建和表达. 展开更多
关键词 人类tudor-SN蛋白 PGEX-4T-1 重组质粒 融合蛋白
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Tudor-SN蛋白一级结构间断的SN5结构域质粒的拼接构建
14
作者 钱宝鑫 朱梦瑜 +6 位作者 高星杰 刘欣 苏超 付晓 王保亚 王鑫廷 杨洁 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期204-209,共6页
目的 实现Tudor-SN蛋白TSN结构域内间断的SN5基因片段(SN5α、SN5β)的拼接以及与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中的融合表达.方法 利用Geno 3D对拼接的SN5进行结构预测.以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR分别扩增出SN5α和SN5β的基... 目的 实现Tudor-SN蛋白TSN结构域内间断的SN5基因片段(SN5α、SN5β)的拼接以及与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中的融合表达.方法 利用Geno 3D对拼接的SN5进行结构预测.以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR分别扩增出SN5α和SN5β的基因,双酶切并纯化后,先将SN5β引入pEGFP-C2,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5β,再将SN5α引入pEGFP-C2-SN5β,完成重组质粒pEGFP-C2-SN5.将pEGFP-C2-SN5β/ SN5脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况,Western印迹检测融合蛋白的表达.结果 ① 拼接的SN5结构预测显示与TSN完整结构中的SN5高度重合;②对重组质粒进行双酶切鉴定可见SN5α、SN5β、SN5的cDNA片段;③ 转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达;④ Western印迹后可在相应位置检测到融合蛋白.结论 pEGFP-C2-SN5/SN5β重组质粒构建成功,SN5α和SN5β在pEGFP-C2中实现了顺序拼接;目的片段可与绿色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达,融合蛋白可与抗GFP抗体结合用于蛋白检测. 展开更多
关键词 人类tudor-SN蛋白 SN5 PEGFP-C2 结构预测 拼接 重组质粒 融合蛋白
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重组真核质粒pEGFP—C2-hTudor—SN—SN(1~4)的构建及表达
15
作者 辛灵彪 高星杰 +6 位作者 付雪 张毅 史雪彬 陈朴 尹洁 何津岩 杨洁 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第4期241-245,共5页
目的将人类Tudor—SN(tudor staphylococcal nuclease)蛋白SN(1~4)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使Tudor—SN蛋白SN各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目... 目的将人类Tudor—SN(tudor staphylococcal nuclease)蛋白SN(1~4)基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒,使Tudor—SN蛋白SN各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切法将目的片段连接到pEGFP—C2载体上,再将构建成功的pEGFP-C2-Tudor—SN-SN(1~4)重组质粒转染入HeLa细胞内,以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的融合表达情况。结果以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达。结论重组pEGFP-C2-hTudor—SN-SN(1—4)质粒成功构建并表达。 展开更多
关键词 人类tudor-SN蛋白 PEGFP-C2 重组质粒 融合蛋白
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人Tudor-SN基因启动子荧光素酶报告基因表达质粒的构建及活性检测 被引量:1
16
作者 赵虹 高星杰 +5 位作者 葛林 朱梦瑜 段中潮 宋娟 付雪 杨洁 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第3期198-203,共6页
目的 将人类Tudor-SN基因的启动子序列片段定向连入pGL3-Basic质粒载体,并进行鉴定和启动子活性检测.方法 以HeLa细胞全基因组DNA为模板,PCR法扩增出目的基因,利用XhoⅠ和HindⅢ双酶切法将目的片段连接到pGL3-Basic载体上.再将构建成功... 目的 将人类Tudor-SN基因的启动子序列片段定向连入pGL3-Basic质粒载体,并进行鉴定和启动子活性检测.方法 以HeLa细胞全基因组DNA为模板,PCR法扩增出目的基因,利用XhoⅠ和HindⅢ双酶切法将目的片段连接到pGL3-Basic载体上.再将构建成功的pGL3-Basic-Tudor-SN-promoter重组质粒和内参质粒β-gal瞬时共转染入宫颈癌HeLa细胞,培养48 h后检测萤火虫荧光素酶活性.结果 双酶切和基因测序法鉴定构建的重组质粒无误,转染重组质粒后可检测到萤火虫荧光素酶活性.结论 成功构建了人类Tudor-SN基因启动子重组质粒,为Tudor-SN蛋白基因调控机制的研究奠定基础. 展开更多
关键词 人类tudor-SN蛋白 启动子 重组质粒 虫荧光素酶
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蛋白表达抑制稳定株MDA—MB-231-Tudor—SNI的筛选和鉴定
17
作者 王保亚 刘欣 +4 位作者 高星杰 朱梦瑜 杨振霞 赵秀娟 杨洁 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期401-405,共5页
目的采用针对人类Tudor—SN基因的RNA干扰(RNAi)技术建立Tudor—SN表达抑制的乳腺癌MDA—MB-231稳定细胞株。方法利用脂质体转染方法将pGenesil—shRNA—hTudor—SNI质粒转染进入MDA—MB-231细胞,经G418筛选出稳定株,通过RT—PCR检... 目的采用针对人类Tudor—SN基因的RNA干扰(RNAi)技术建立Tudor—SN表达抑制的乳腺癌MDA—MB-231稳定细胞株。方法利用脂质体转染方法将pGenesil—shRNA—hTudor—SNI质粒转染进入MDA—MB-231细胞,经G418筛选出稳定株,通过RT—PCR检测Tudor—SN的mRNA水平,再以Western印迹技术鉴定Tudor—SN蛋白表达情况并计算蛋白表达抑制率。结果与对照组相比,以G418筛选的MDA—MB-231-Tudor—SNI稳定株Tudor—SN的mRNA水平降低(P〈0.01,n=3),蛋白表达水平明显下调(P〈0.01,n=3),蛋白表达抑制率达78.12%。结论成功筛选并鉴定人类Tudor—SN蛋白表达抑制MDA—MB-231稳定株,有助于深入研究Tudor—SN蛋白在乳腺癌中的作用。 展开更多
关键词 人类tudor—SN蛋白 RNA干扰 细胞筛选 稳定株
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葡萄球菌核酸酶样结构蛋白1/SLC7A11抑制铁死亡对骨肉瘤发生发展的影响
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作者 王胜涛 徐淑娟 +3 位作者 贵鹏 李欣咛 隋玉涵 李朝旭 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期11-18,共8页
目的探讨葡萄球菌核酸酶样结构蛋白1(SND1)对骨肉瘤细胞生物学功能的影响,及其通过SLC7A11调控骨肉瘤细胞铁死亡的作用机制。方法检测人成骨细胞hFOB1.19以及骨肉瘤细胞系Saos-2、U2OS、HOS和143B中SND1的表达水平。采用小干扰RNA敲减... 目的探讨葡萄球菌核酸酶样结构蛋白1(SND1)对骨肉瘤细胞生物学功能的影响,及其通过SLC7A11调控骨肉瘤细胞铁死亡的作用机制。方法检测人成骨细胞hFOB1.19以及骨肉瘤细胞系Saos-2、U2OS、HOS和143B中SND1的表达水平。采用小干扰RNA敲减骨肉瘤细胞HOS和143B中SND1的表达(si-SND1),采用CCK8法、细胞克隆形成实验、细胞迁移和侵袭实验探究SND1的表达对骨肉瘤细胞生物学功能的影响;调控骨肉瘤细胞中SND1以及SLC7A11基因的表达,探究SND1通过SLC7A1基因对骨肉瘤铁死亡介导的肿瘤细胞凋亡的影响。结果骨肉瘤细胞Saos-2、U2OS、HOS和143B中SND1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于人成骨细胞hFOB1.19(P均<0.01)。与对照组比较,si-SND1转染显著降低HOS和143B细胞中SND1的表达水平(P均<0.01),且细胞活性显著降低,克隆形成数量显著减少,细胞迁移和侵袭能力显著降低(P均<0.001)。铁死亡诱导剂Erastin促进骨肉瘤HOS和143B细胞凋亡,而抑制剂Ferrostatin-1刺激上调细胞活性(P均<0.001)。敲减SND-1后使用Erastin可进一步降低骨肉瘤HOS和143B细胞活性,而使用Ferrostatin-1刺激后可显著恢复细胞活性(P均<0.001);Erastin处理后,si-SND1组细胞中铁离子和丙二醛表达增高,谷胱甘肽表达降低(P均<0.001)。体内实验结果显示,敲减SND1可以明显抑制143B裸鼠移植瘤的瘤体质量(P<0.001)。敲减SND1后骨肉瘤HOS和143B细胞中SLC7A11的表达水平显著减少(P均<0.001),且铁死亡水平升高(P<0.001,P=0.020)。结论骨肉瘤细胞中SND1表达显著增高,其可能通过上调SLC7A11的表达抑制铁死亡,进而促进骨肉瘤细胞活性。 展开更多
关键词 骨肉瘤 葡萄球菌核酸酶样结构蛋白1 铁死亡
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都铎早期英格兰地权冲突与立法应对——以用益授予为中心的考察
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作者 孙小娇 《山东师范大学学报(社会科学版)》 北大核心 2024年第3期68-81,共14页
诺曼征服后,英格兰进入封建社会,形成了以封土为纽带的封君封臣关系。封臣需要向封君履行封建义务且不能自由处分土地。到中世纪后期,封臣广泛借助用益授予进行规避,产生并激化了双方之间的地权冲突。都铎早期英格兰处于封建王国向民族... 诺曼征服后,英格兰进入封建社会,形成了以封土为纽带的封君封臣关系。封臣需要向封君履行封建义务且不能自由处分土地。到中世纪后期,封臣广泛借助用益授予进行规避,产生并激化了双方之间的地权冲突。都铎早期英格兰处于封建王国向民族国家转变的重要阶段,国王亨利八世在对外摆脱教会控制、对内加强国家控制之时,借助议会之手全面规范用益授予以控制土地流动,获取封建权益,树立国王权威。土地立法进程相当曲折,国王通过分化议员与输送利益的方式推动了《用益法》和《登记法》的颁布,很快又因为普遍不满和国内暴动进行了妥协。尽管土地立法效果未如国王所愿,但用益授予获得了合法地位,用益主体之间的信义关系亦得到承认。 展开更多
关键词 都铎早期 英格兰 用益授予 地权冲突 土地立法
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Crystal structure of TDRD3 Tudor domain
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作者 Danny Reinberg 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期348-348,共1页
The Tudor domain is a small, ~60 amino acid structure motif that serves to mediate intermolecular protein interactions. Recently, both structural and biochemical evidences
关键词 TDRD3 tudor DOMAIN methylated ARGININE
原文传递
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