急性肺损伤大鼠肺组织PPARαmRNA表达的变化

目的:观察内毒素(LPS)复制的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织过氧化物酶增殖体激活受体α(PPARα)mR-NA表达的变化,探讨PPARα在ALI中可能的作用。方法:将40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、LPS致伤1h组、2h组、4h组和8h组。用LPS(5mg/kg)静脉注射复制大鼠ALI模型,分别在LPS致伤后1h、2h、4h、8h时处死大鼠,采用RT-PCR与ELISA法检测肺组织中PPARα和肿瘤坏死因子α(TNFα)mRNA的表达及肺组织匀浆中TNFα浓度。结果:LPS致伤后2h、4h、8h肺组织病理积分较对照组明显升高(P均<0.01);LPS致伤后2h、4hPPARαmRNA表达(IOD值)较对照组显著降低(P均<0.05);而LPS致伤后1h、2h、4h、8hTNFαmRNA(IOD值)和蛋白水平表达均较对照组显著升高(P均<0.01)。结论:PPARαmRNA在ALI大鼠肺组织表达降低;而肺组织TNFαmRNA和蛋白水平均升高。该研究提示PPARα在ALI的发病机制中具有一定的作用。

奈普生在脑脊髓炎中的实验性变应性治疗研究

目的:探讨奈普生对大鼠实验性变应性脑脊髓炎(Experimental Allergic Encephalomyelitis,EAE)的治疗作用,观察其对大鼠脑组织中炎性标志物肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α) m RNA表达的影响。方法:采用免疫诱导方法制备EAE大鼠模型,分别予不同剂量的奈普生对其进行实验性干预治疗,对其神经功能缺损加以评分并计算其发病率,RT- PCR法半定量TNF- αm RNA的表达。结果:与EAE模型组相比,奈普生干预组大鼠的临床症状显著改善(P<0 .0 5 ) ,而其发病率与EAE模型组无显著性差异;RT- PCR结果显示,奈普生干预组TNF- αm RNA的表达较EAE模型组明显降低(P<0 .0 5 ) ;神经功能缺损评分的改善和TNF- αm RNA的表达的降低均以低剂量奈普生治疗组为显著(P<0 .0 1)。结论:奈普生能够显著改善EAE的临床症状,并且能够抑制EAE脑白质的TNF-αm RNA的表达,特别是小剂量的奈普生对EAE具有更为明显的抗炎作用,可能奈普生具有过氧化物酶体增殖激活受体-γ(Peroxi-some proliferator- activated receptor- γ,PPAR- γ)激动作用。

GFP-hTRAIL融合蛋白表达质粒的构建与卵巢癌细胞内表达

目的构建GFP-hTRAIL融合蛋白表达质粒,测定其在卵巢癌细胞中的表达。方法以GFP基因为报告基因,hTRAIL为目的基因,将hTRAIL基因插入GFP基因上游,构建成GFP-hTRAIL融合基因表达质粒,并通过酶切和测序对重组体进行鉴定。经脂质体法转染培养的卵巢癌细胞,用荧光显微镜观察GFP的表达。流式细胞仪分析转染后卵巢癌细胞的凋亡率。结果测序结果证实构建的为GFP-hTRAIL融合基因表达载体。质粒经脂质体转染后,有大约20％的卵巢癌细胞表达融合蛋白。流式细胞仪结果表明转染该质粒可诱导卵巢癌细胞凋亡。结论构建了1个可以表达GFP-hTRAIL融合蛋白的新质粒,该表达载体的构建成功为进一步开展卵巢癌的基因治疗奠定了基础。

肿瘤坏死因子-β抗肿瘤及作用机制的研究

目的 :探讨肿瘤坏死因子 -β(tu mornecrosisfactor β ,TNF β)对 3种人癌细胞的增殖抑制作用及其细胞分子机制。方法 :采用多种体外及体内实验方法 ,从多侧面证实TNF β的抗肿瘤作用。并采用细胞内游离钙浓度测定、12 5I cAMP放免检测法检测cAMP含量。结果 :不同浓度TNF β对肿瘤细胞系均有增殖抑制作用 ,且呈剂量依赖性。当TNF β与顺铂和多柔比星合用 ,JF3 0 5细胞死亡百分比分别达到 ( 68 6±9 0 ) %和 ( 76 5± 7 9) %。TNF β实验组细胞内cAMP浓度明显增加 ,JF3 0 5细胞由( 0 0 5 72± 0 0 176)上升到 ( 0 2 896±0 0 784) pmol/10 6个细胞。此外细胞内钙浓度上升并且凋亡。结论 :TNF β具有体内、外抗肿瘤作用 。

MyD88非依赖性信号通路在枸杞多糖抑制糖尿病小鼠肿瘤坏死因子α中的作用

目的:研究枸杞多糖对髓样分化因子88(My D88)非依赖性信号通路的影响,探讨枸杞多糖影响TNF-α生成的机制。方法:采用高糖高脂饲料联合链脲菌素诱导My D88基因敲除小鼠形成2型糖尿病模型。将造模成功的小鼠随机分为模型对照组、阳性对照组和枸杞多糖组,另取8只小鼠作为健康对照组。干预三个月后,采用实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测小鼠腹腔巨噬细胞中TRAM、TRIF、TRAF6、RIP1和TNF-α基因和蛋白表达,ELISA法测定小鼠血清TNF-α水平。结果:枸杞多糖抑制了糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞中Tram、Trif、Traf6和Tnf-α的基因表达,激活了Rip1基因(均P<0.05),但对TRAM、TRIF、TRAF6、RIP1和TNF-α蛋白表达和血清TNF-α水平无影响(均P>0.05)。结论:枸杞多糖可能不能通过My D88非依赖性信号通路抑制TNF-α的生成。

FOXO4在大鼠急性酒精性肝病中的表达及作用机制

目的 通过酒精灌胃诱导急性酒精性肝病的方法建立大鼠实验性急性酒精性肝病模型,明确TNFα在急性酒精摄入导致肠黏膜损伤的机制,进一步阐明TNFα、叉头框蛋白O4（FOXO4）、NF-κB及紧密连接蛋白之间的关系.方法 雄性Wister大鼠64只,按随机数字表法分为正常组;模型组;模型＋TNFα组;模型＋抗TNFα-IgG抗体组;模型＋wortmannin组;模型＋ IGF-1组;模型＋等量生理盐水腹腔注射组;模型＋等量生理盐水尾静脉注射组,每组8只.采用Western blotting检测小肠标本Occludin、紧密连接蛋白-1（ZO-1）、FOXO4及NF-κB,生物化学及ELISA等方法检测血清肝功能、TNFα等指标.结果 正常对照组大鼠血清的ALT、AST、TNFα表达水平最低,造模后的大鼠上述指标表达水平升高,与正常组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;造模前给予TNFα及胰岛素样生长因子-1（IGF-1）后,表达水平进一步升高,与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.相反造模前给予抗TNFα-IgG抗体及wortmannin后,其表达水平明显低于模型组,差异有统计学意义,而二者之间差异无统计学意义（P＞0.05）.Western Blotting法检测ZO-1及NF-κB mRNA水平与蛋白质水平：正常对照组大鼠小肠组织TJ（包括ZO-1和occludin）表达水平最高,造模后的大鼠上述指标表达水平降低,与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.造模前给予TNFα及IGF-1后,表达水平进一步降低,与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,相反造模前给予抗TNFα-IgG抗体及wortmannin后,其表达水平明显高于模型组,差异有统计学意义,而二者之间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 急性酒精性肝病时血清大鼠体内增高的TNFα能降低小肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1的分布及表达;血清TNFα水平影响FOXO4的活性,FOXO4通过磷酸化与去磷酸化调节NF-κB的表达,进而影响ZO-1的表达.

胃癌患者TNFα水平及其影响因素

目的研究胃癌患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）由细菌内毒素（ＬＰＳ）诱导产生ＴＮＦα的能力及胃癌患者自身血浆和吲哚美辛对产生ＴＮＦα的影响．方法采用ＥＬＩＳＡ法测定３６例胃癌患者（男２７例，女９例，年龄３８岁～７１岁，平均５２岁；其中，Ⅰ、Ⅱ期１７例，Ⅲ、Ⅳ期１９例）；２０例良性胃病患者（男１３例，女７例，年龄３２岁～７５岁，平均４９岁）；及２０例正常人（男１２例，女８例，年龄２５岁～５２岁，平均４７岁）ＰＢＭＣ经ＬＰＳ诱导培养上清液中ＴＮＦα水平．胃癌患者ＰＢＭＣ又给予另外两种处理：胃癌自身血浆＋ＬＰＳ和吲哚美辛＋ＬＰＳ．结果ＴＮＦα水平（μｇ／Ｌ）胃癌组（３０４±１６６）较良性胃病组（１０３±０６２）与正常组（０７６±０５７）均显著升高（Ｐ＜００５），良性胃病组与正常组之间无显著差异（Ｐ＞００５）；胃癌患者的不同病理分型间、分期间亦无显著差异（Ｐ＞００５）．胃癌组ＰＢＭＣ经ＬＰＳ诱导加自身血浆处理则ＴＮＦα水平较仅用ＬＰＳ诱导者显著下降（２０７±０９４，Ｐ＜００５），而经吲哚美辛处理较仅用ＬＰＳ处理者显著升高（６４±３０６，Ｐ＜００１）．结论ＴＮＦα水平可作为胃癌诊断的潜在标?