重组pcDNA 3.0-WWOX构建对胆囊癌细胞表达及△Ψm的影响

目的体外构建及鉴定Pc DNA3.0-WWOX真核表达载体,探讨过表达WWOX对人胆囊癌细胞WWOXm RNA表达、蛋白表达及跨膜电位(△Ψm)的影响.方法提取人胆囊癌细胞总RNA,RT-PCR反应合成WWOX的c DNA,PCR产物回收纯化.目的基因WWOX和pc DNA3.0载体经限制性内切酶ECORⅠ和XhoⅠ酶切,将双酶切WWOX片段与pc DNA 3.0载体在T4 DNA连接酶的作用下进行连接重组.pc DNA 3.0-WWOX重组质粒转化后,提取质粒经双酶切鉴定及测序鉴定.将pc DNA 3.0-WWOX重组质粒转染人胆囊癌GBC-SD细胞,应用RT-PCR、Western Blot检测WWOX基因的表达水平、JC-1染色检测胆囊癌细胞线粒体跨膜电位(△Ψm)变化.结果成功构建了pc DNA3.0-WWOX重组载体,经测序DNA序列与Gene Bank中WWOX序列一致.成功转染pc DNA3.0-WWOX重组质粒至胆囊癌GBC-SD细胞中.RT-PCR及Western blot结果显示:胆囊癌GBC-SD细胞转染pc DNA3.0-WWOX重组质粒48 h后pc DNA-3.0-WWOX组灰度比值明显高于各对照组(P<0.05),对照组间m RNA表达量差异无统计学意义(P>0.05).pc DNA3.0-WWOX组蛋白表达灰度比值均明显高于各对照组(P<0.05),对照组间蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05).pc DNA3.0-WWOX组细胞线粒体内绿色荧光信号较对照组增高(P<0.05),而对照组间细胞线粒体内绿色荧光信号差异无统计学意义(P>0.05).结论体外成功构建了Pc DNA3.0-WWOX重组载体,顺利进行了重组载体的转化和转染实验.靶向Pc DNA3.0-WWOX重组载体可有效抑制胆囊癌细胞WWOXm RNA降解,促进其蛋白的表达,同时有效促进细胞的早期凋亡.WWOX可能参与线粒体依赖的凋亡途径调控胆囊癌细胞的生长.

WWOX抑癌基因研究进展

WWOX基因定位于染色体16q23.3-24.1,在卵巢癌、乳腺癌、肝细胞癌、前列腺癌及其他肿瘤中检测到其杂合性缺失及染色体重排。该基因位于染色体普通脆性位点16D,包含9个外显子,编码414个氨基酸相对分子量为46000大小的蛋白。原发肿瘤组织及细胞系的研究证明该基因为肿瘤抑制基因,其失活可能导致肿瘤的发生,基因敲除实验证实了上述假设。WWOX可能和c-Jun,TNF,p53,p73,AP-2γ,及E2F-1等相互作用而发挥凋亡作用。目前对于该基因是否为肿瘤抑制基因仍存在不同观点,随着研究结果的积累,WWOX基因的功能会日渐明了,并对肿瘤的诊断、治疗和预防产生积极的影响。

PCR检测原发性肝细胞癌WWOX基因表达及意义

目的检测染色体普通型脆性位点FRA16D(16q23.3-q24.1)上WWOX(WW domain containing oxidoreductase)基因在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达及意义。方法用RT-PCR、荧光定量PCR方法分别对40例原发性肝细胞癌癌组织(以下简称肝癌组织)、癌旁组织中WWOX基因的Δ6-8变异情况及其mRNA表达差异进行检测。结果WWOX mRNA在肝癌组织的表达(0.318±0.0559)显著低于癌旁组织(1.0),P<0.05;而且在肝癌组织中Δ6-8变异体的出现频率为20%(8/40),显著高于癌旁组织2.5%(1/40),P<0.05。结论WWOX基因的低表达、变异可能在肝癌的发生发展中起重要作用,并有可能作为肝癌的早期诊断指标之一。

肝细胞癌中wwox基因启动子甲基化与蛋白表达的关系

目的:探讨wwox基因启动子甲基化及蛋白表达与肝细胞性肝癌的关系.方法:通过甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法及免疫组织化学(immunohistochemestry,IHC)法分别检测60例肝细胞性肝癌组织和癌旁组织中wwox基因启动子甲基化状态和蛋白表达水平.结果:癌组织及癌旁组织中wwox基因启动子甲基化阳性率分别为41.67%(25/60)和8.33%(5/60)(P=0.000).WWOX蛋白在癌和癌旁组织中的表达具有显著性差异[35.00%(21/60)vs70.00%(42/60),P=0.001].wwox基因启动子甲基化和蛋白表达与肝外转移、肿瘤直径、肿瘤细胞分化密切相关(P=0.007,0.014,0.011);WWOX蛋白表达与临床分期、肿瘤直径、肿瘤细胞分化密切相关(P=0.018、0.023、0.001).wwox基因启动子甲基化与蛋白表达显著负相关(γ=-0.408,P=0.001).结论:启动子区甲基化是wwox基因失活的重要机制.wwox启动子区异常甲基化可能参与了肝癌的发生发展,在肝癌的进展发挥重要作用.

WWOX基因在脑胶质瘤中的表达

目的探讨抑癌基因WWOX在胶质瘤发生发展中的作用以及与胶质瘤病理分级的关系。方法采用半定量RT-PCR方法检测31例胶质瘤手术切除标本和3例正常脑组织WWOX mRNA的表达情况,用琼脂糖凝胶电泳PCR产物,凝胶图像分析系统检测基因的相对量。最后实验数据采用SAS软件行χ2检验,分析WWOX mRNA的表达与胶质瘤病理分级的关系。结果31例胶质瘤组织中共有17例(54.8%)发生WWOX基因表达缺失,3例正常脑组织均无基因表达缺失。胶质瘤组织和正常脑组织中WWOX mRNA失表达水平存在明显差别(P<0.05)。各病理分级组间WWOX mRNA失表达水平无明显差别(P>0.05)。结论WWOX mRNA在胶质瘤中表达缺失率较高,且胶质瘤组织和正常脑组织中WWOX mRNA失表达水平存在明显差别(P<0.05)。但恶性程度高的胶质瘤组织与恶性程度低的胶质瘤组织WWOX mRNA失表达水平无明显差异,这表明WWOX基因缺失或低表达在胶质瘤发生过程中起重要作用,但可能对胶质瘤的进一步发展作用不明显。

WWOX基因和肿瘤的研究进展

WWOX是公认的抑癌基因之一，与肿瘤坏死因子、p53蛋白及诸多其它信号通路蛋白相互作用而诱导细胞凋亡，同时WWOX的活性可被E2F-1、c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）等因子调控。在肿瘤中WWOX失活主要是频发甲基化修饰、6～8外显子的丢失、LOH及WWOX蛋白表达的降低。增加该基因在肿瘤细胞和癌症患者中的表达将抑制肿瘤的发生发展。目前该基因的信号通路过程还不明了，有待于进一步的研究。

WWOX蛋白在皮肤血管瘤中的异常表达及意义

目的应用免疫组织化学方法检测不同时期血管瘤组织中WWOX蛋白的表达,探讨其在血管瘤发生、发展过程中的作用机制。方法收集武汉大学人民医院病理科2005年9月-2009年12月皮肤毛细血管瘤存档蜡块50例,其中男性25例,女性25例。采用免疫组织化学S-P法检测50例皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织WWOX蛋白的表达水平,采用HPIAS-1000图文报告管理系统对WWOX蛋白的表达进行定量分析,并用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果在增生期血管瘤血管内皮细胞中可见少量的棕黄色颗粒,WWOX蛋白弱表达。正常皮肤组及退化组血管内皮细胞中可见密集分布的棕黄色颗粒,WWOX蛋白高表达。增生期组WWOX蛋白的表达明显低于退化期组和正常皮肤组(P<0.05)。结论 WWOX蛋白在增生期血管瘤组织中表达减少或缺失,可能与血管瘤的发生发展有密切关系。

抑癌基因WWOX在消化道肿瘤中的研究进展

WWOX基因定位于染色体16q23.3～24.1,位于染色体普通脆性位点FDR16D,包含9个外显子,编码414个氨基酸,WWOX可能与p53、Bmi1、survivin、p73、Ap2α/γ、c-Jun、ErbB4、Runx2等相互作用而发挥凋亡作用。在多种消化道肿瘤中均发现WWOX基因杂合子缺失,WWOX mRNA表达低下或缺失,WWOX蛋白表达水平低。

卵巢浆液性腺癌中抑癌基因WWOX和PTEN的表达及临床意义

目的研究抑癌基因WWOX及PTEN对卵巢浆液性腺癌细胞生长的影响,探讨卵巢癌基因治疗的新靶点。方法于2013年10月—2016年10月福州市第一医院方便选取的60例卵巢浆液性腺癌标本作为研究对象,另选取30例正常卵巢组织作为对照。采用免疫组化检测抑癌基因WWOX及PTEN的阳性率表达,RT-PCR法测WWOX及PTEN的m RNA相对表达量。结果卵巢浆液性腺癌中抑癌基因WWOX及PTEN的免疫组化阳性率及m RNA相对表达量均显著低于正常卵巢组织组(P<0.05)。结论 WWOX及PTEN基因缺失可能是卵巢浆液性腺癌发生的重要分子基础,可能会干扰卵巢癌细胞的细胞周期并抑制其生长增殖,临床研究有待从基因分子调控等方面进一步深入探讨,为卵巢浆液性腺癌的基因治疗提供一种新方法。

抑癌基因WWOX在甲状腺癌中的表达及意义

目的探讨WWOX基因在甲状腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测50例甲状腺癌，31例甲状腺腺瘤及20例正常组织中WWOX蛋白的表达，并分析其与病理指标及临床特征之间的相关性。结果WWOX在甲状腺癌、甲状腺腺瘤及正常甲状腺组织中的平均积分光密度分别为：50．86±6．05、70．95±4．23、87．77±8．46。WWOX在甲状腺癌中的表达与后两者之间差异有统计学意义（P〈0．05）。未发现WWOX蛋白表达在不同临床病理指标间存在显著性差异。结论WWOX蛋白在甲状腺癌组织中呈低表达，该蛋白表达的缺失可能在甲状腺癌的发生、发展过程中发挥重要作用。

抑癌基因WWOX与恶性肿瘤的关系研究进展

目的：探讨WW结构域氧化还原酶基因（WWOX）与肿瘤的关系,为临床提供理论依据.方法：在PubMed和中国期刊全文数据库中查阅近年来国内外有关文献,并做进一步综合分析.结果：WWOX位于人类普通型染色体脆性位点FRA16D上,在多种恶性肿瘤中表达下调或缺失,与WWOX作用相关的蛋白均处于信号转导的关键点.结论：WWOX可以增强多种抑癌基因的功能,抑制原癌基因的表达,从而发挥抑制肿瘤作用.