不同制动时相兔骨骼肌萎缩与细胞凋亡的实验研究—原位缺口末端标记法(TUNEL)的观察检测

探讨制动后骨骼肌萎缩的发生机制与骨骼肌细胞凋亡的关系。按照 Sievanen法制备不同时相的制动实验组 ,2 4只实验兔随机分为 4组 ,每组 6只 ,实验侧用管形石膏固定 ,自身未固定侧做对照组。在制动后 3、7、14和 2 8d取材 ,应用末端转移酶介导的 U TP缺口末端标记法 (Td T— mediated d UTP nick end labeling,TUNEL )检测萎缩骨骼肌中有无凋亡的骨骼肌细胞 ,并与形态学的观察结果相对照。对各组的数据进行统计学处理。结果表明不同制动时相所致的萎缩骨骼肌中均可发现有程度不一的骨骼肌细胞发生凋亡 ,以 14 d组最为显著。不同时相凋亡的肌细胞在空间的分布上呈不一致性。制动所致萎缩的骨骼肌中有时可见呈假阳性 TU NEL染色 ,但与凋亡的肌细胞的表现是不同的。我们认为 (1)制动后骨骼肌萎缩有骨骼肌细胞凋亡的参与。 (2 )骨骼肌细胞凋亡的多少与制动时相密切相关 ,以制动后 14 d最为明显。 (3)凋亡的骨骼肌细胞在空间分布上随制动时相不同而不同 ,呈不一致性。 (4 )制动后骨骼肌萎缩的程度与肌细胞凋亡的程度密切相关。

原位末端标记法检测喹乙醇诱导的鲤鱼肝细胞凋亡

方法:采用200 mg/kg饲料的喹乙醇拌料连续饲喂实验鱼,分别于染毒后的第7、14、20、25和30 d剖杀4尾鱼取肝脏用TdT介导的原位末端标记法检测其细胞凋亡。结果:在组织切片中观察到了含棕色或棕黑色颗粒的凋亡细胞。结论:喹乙醇可诱导鲤鱼肝脏细胞凋亡。且检出率随时间的延长而升高,对照组在整个实验过程中保持一个相对恒定很低的检出率。

原位末端标记法观察钉螺细胞凋亡的研究

目的使用原位末端标记法观察钉螺细胞凋亡,探讨其在钉螺研究上使用效果和前景。方法经苦楝叶浸提液处理的钉螺和对照钉螺去壳后连续冰冻切片,使用原位末端标记法(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL)和苏木素-伊红(Hematoxylin and eosin,HE)染色观察其细胞凋亡。结果诱导组钉螺细胞凋亡发生在消化腺、足部表皮和足部肌肉纤维之间等部位,对照组凋亡则发生在消化腺和足部表皮部位,两组细胞凋亡值有显著差异(P<0.05);TUNEL法观察和HE染色观察钉螺细胞凋亡,两组凋亡值没有显著差异(P>0.05)。结论 TUNEL法可以运用于钉螺细胞凋亡原位检测。

原位末端标记检测实验性变态反应性神经炎胸腺细胞的凋亡

目的为了探讨地塞米松对实验性变态反应性神经炎（ＥＡＮ）小鼠胸腺细胞的影响。方法应用原位末端标记法和电镜检测ＥＡＮ小鼠胸腺细胞的凋亡。结果以上两种方法均发现地塞米松处理组胸腺细胞凋亡率明显高于自然病程组和正常对照组。结论地塞米松可明显增强ＥＡＮ小鼠胸腺细胞凋亡。

原位末端标记检测重症肌无力大鼠中枢损害时脑改变

目的 :探讨重症肌无力 (MG)中枢 (CNS)受损的可能机制 .方法 :将MG患者血中提取的AChRab经侧脑室注射到大鼠脑室系统 ,建立CNS受损的MG大鼠模型 .用原位末端标记 (TUNEL)的方法观察脑细胞凋亡具体情况及不同病程变化 ,并和用健康人血清提取的IgG注入大鼠侧脑室建立的对照组进行比较 .另一组不予任何处理作为空白对照 .结果 :模型大鼠表现出类似实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型样症状 .TUNEL结果示 :实验组大鼠脑组织切片标记后棕蓝混合染色的阳性细胞 (因行苏木素复染 )于注射后 2wk出现且随时间逐渐增多 ,至 3wk后数目最多 .脑内多部位都有凋亡细胞出现 ,以皮层和海马区较明显 .与对照组比较差别明显 .结论 :经侧脑室注入到大鼠脑室系统的MG患者AChRab可以引起大鼠CNS功能障碍 ,神经细胞发生凋亡 ,凋亡细胞数目随大鼠症状的加重而增加 ,提示细胞凋亡在MG。

原位末端标记检测食管癌凋亡的临床病理学意义

目的:通过对食管癌组织中细胞凋亡的原位观察,评价其临床病理学意义.方法:采用原位末端标记法检测30例食管癌石腊组织切片.结果:在确诊的30例食管癌病人中,凋亡发生率为93.3%,凋亡指数为10.07±13.11,凋亡指数高低与肿瘤病理分级及淋巴结转移明显相关(P<0.01).结论:在食管癌组织中,细胞凋亡是一种自发现象,其发生情况各有不同,可作为评价预后及指导综合治疗的研究指标之一.

原位细胞凋亡TUNEL法的改进及其应用

目的 :寻找一种能快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料的原位细胞凋亡的 TUNEL法。方法 :在原已建立的 TUNEL技术基础上作了如下改进 :1石蜡切片用微波修复技术替代蛋白酶 K的消化作用 ;冰冻切片与细胞爬片或涂片用含 0 .1 % Triton X- 1 0 0和 0 .1 %枸橼酸三钠混合液作穿透处理。 2在滴加反应混合物前 ,切片用 0 .1 %焦碳酸二乙酯 ( DEPC)浸泡 ,抑制内源性核酸内切酶活性。 3在 POD转换剂前 ,切片用 3% H2 O2 -甲醇液阻断内源性过氧化物酶活性 ,并用正常山羊血清封闭非特异结合位点。4苏木素套染细胞核。结果 :改进后的 TUNEL法能特异地显示凋亡细胞为棕黄色 ,其他细胞核为蓝色 ,且对比明显 ,背景浅 ,组织结构完整清晰 ,便于显微照相等特点。结论 :改进后的 TUNEL法是一种快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料细胞凋亡的有效方法。

TUNEL法原位检测凋亡细胞的某些改进

目的 :探索避免TUNEL法检测凋亡细胞出现的假阳性和消除非特异性反应的方法。方法 :脑和心肌组织石蜡切片 ,改进的TUNEL染色。选用多聚甲醛固定 ,蛋白酶K修复抗原 ,将H2 O2 封闭内源性过氧化物酶放在反应液标记DNA片段之后 ,先后用小牛血清或羊血清两次封闭非特异性反应。结果 :证实本实验方法避免了假阳性 ,背底十分清亮。结论

细胞凋亡原位检测的TUNEL法

细胞凋亡原位检测的ＴＵＮＥＬ法刘勇（江西省人民医院病理科，南昌３３０００６）细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ），又称程序性细胞死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｄｅａｔｈ，ＰＣＤ），是细胞的一种生理性死亡过程，有关细胞凋亡的研究近年来受到高度重视。末端转移...

一种组织原位双重标记的方法

目的在同一张切片上 ,分别进行两种标记 ,两种显色系统进行显色。方法应用免疫组织化学S P法检测结肠癌细胞Fasl表达 ,再用TUNEL法检测同一组织切片上细胞凋亡情况。结果同一组织切片Fasl阳性表达于癌细胞胞质和 /或胞膜 ,凋亡表达于细胞核清晰可禁。结论组织原位双重标记结果更为客观可靠。

原位细胞凋亡的荧光、酶免疫化学法检测实验研究

用荧光法和酶免疫化学法末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）实验分别对小鼠心肌组织、人慢性肝炎肝组织和内膜增生的小型猪血管组织进行了细胞凋亡检测。结果显示：①心肌无凋亡细胞发现，肝组织和血管内膜组织有散在的０～１２个细胞／２５倍物镜视野的细胞标记阳性（凋亡）。②酶免疫化学法ＴＵＮＥＬ实验的检测敏感度较荧光法ＴＵＮＥＬ实验的敏感度高。③过高的末端转移酶可导致假阳性的产生，对荧光法ＴＵＮＥＬ实验，末端转移酶／标记缓冲液比例应为１∶９～１９。

采用原位末端标记法检测人植入前胚胎中的凋亡征象

目的建立原位末端标记法(TdT-mediated nick end labeling TUNEL)检测人植入前胚胎凋亡征象的方法,阐明凋亡与人类植入前胚胎发育的关系。方法取试管婴儿助孕技术后异常受精的三原核(3PN)胚胎,于2-10细胞期进行固定,采用TUNEL法检测3PN胚胎中的凋亡征象。结果在发育正常3PN胚胎中,未检测到凋亡征象;在20%有碎片的3PN胚胎中检测到TUNEL阳性信号。结论采用TUNEL法可以有效检测人植入前胚胎中的凋亡征象,植入前胚胎中的细胞碎片可能与凋亡有关。

TUNEL检测心肌细胞凋亡的影响因素探讨

目的:探讨避免TUNEL法检测心肌细胞凋亡出现的假阳性和消除非特异性反应的方法以及选择合适的蛋白酶K浓度。方法:4%多聚甲醛固定心肌组织,制作石蜡切片。①将试剂盒说明常规步骤加以改良,将0.3%H2O2放在反应液标记DNA片段之后,先后用小牛血清或羊血清两次封闭非特异性反应;②按蛋白酶K不同剂量分为10、20μg/mL蛋白酶K和不加蛋白酶K组(均n=5),再按照改良的TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果:①改良TUNEL法,避免了假阳性,背景清晰;②未加蛋白酶K组较10或20μg/mL蛋白酶K组心肌细胞凋亡率显著减少(均P<0.05),两组蛋白酶K组心肌细胞凋亡率差异未见有统计学意义(P>0.05)。结论:①改良后的TUNEL方法适用于心肌细胞凋亡的检测;②TUNEL法检测心肌细胞凋亡选择10、20μg/mL蛋白酶K是适当的。

冰冻和石蜡切片对TUNEL染色结果的影响

目的与方法:为比较不同组织切片方法对细胞凋亡TUNEL反应结果的影响,用雏鸭胸腺分别制成冰冻(8μm)和石蜡(6μm)切片,然后进行TUNEL染色。结果:冰冻切片组细胞凋亡阳性率高,背景清晰,特异性好。石蜡切片组则阳性率相对较低,反差较小,容易出现假阳性。结论:不同制片法对TUNEL结果有影响,即冰冻切片可能较石蜡切片具有更高的反应敏感性。

冷冻干燥法对人精子DNA的影响

目的探讨冷冻干燥法用于人类精子保存的安全性。方法取健康志愿者合格精液40份,平均分为4组,其中3组分别加入不同的冻干保护剂(ETBS;ETBS+海藻糖;ETBS+海藻糖+蛋黄)后给予冷冻干燥处理,在4℃冰箱中保存3周;1组作为新鲜精液对照组。对4组标本分别以原位缺口末端标记(TUNEL)法和彗星试验进行DNA断裂精子百分率检测。结果ETBS、ETBS+海藻糖、ETBS+海藻糖+蛋黄组和新鲜精液组DNA断裂精子百分率以TUNEL法检测,分别为(6.39±1.46)%、(5.75±1.29)%、(5.20±1.38)%、(4.94±1.86)%;以彗星试验检测,分别为(6.48±1.58)%、(5.83±1.48)%、(5.28±1.42)%、(5.12±1.65)%。冷冻干燥保存后的各组与新鲜精液相比较,DNA断裂精子百分率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论以ETBS或ETBS加海藻糖、蛋黄为保护剂的冷冻干燥法对人精子DNA无明显损伤,可有效地保护人精子的DNA。