开口箭甾体皂甙元的分离鉴定及其抗荔枝霜疫霉菌活性

在以荔枝霜疫霉菌为指示菌的生物活性测定导向跟踪下,运用TLC、硅胶柱层析、反相硅胶柱层析和凝胶柱层析等分离纯化方法,从开口箭(Tupistra chinensis)甲醇提取物的乙酸乙酯分部萃取物中分离纯化得到2个抗菌化合物。经现代光谱(MS、IR、1D NMR和2D NMR)分析,确定化合物1为1β,2β,3β,4β,5β,7α-六羟基螺甾-25(27)-烯-6-酮,化合物2为螺甾-25(27)-烯-1β,2β,3β,4β,5β,6β,7α-七醇。离体抗菌活性测定化合物1和化合物2抑制荔枝霜疫霉菌(Peronophythora litchii)孢子囊萌发的EC50分别为100.28 mg.mL-1和124.37 mg.mL-1。用质量浓度为500 mg.mL-1的两个化合物分别处理后接种霜疫霉菌,供试荔枝果实的发病率分别为16.7%和18.9%。

开口箭主要次生代谢物预试验与总皂甙提取

用系统预试验法对开口箭(Tupistra chinensis Bak.)根茎中的主要次生代谢产物进行了定性检测,用石油醚脱除开口箭甲醇提取物中的脂溶性成分后,再用正丁醇萃取出总皂甙。结果显示:开口箭根茎中含有甾体皂甙类和生物碱类化学成分,其总皂甙含量约为根茎干重的5.28%。

ICP-MS法测定开口箭根茎中27种金属元素含量

采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定了湖北长阳产开口箭(Tupistra chinensis Bak.)根茎中27种金属元素的含量。其中13种金属元素V、Cr、Mn、Fe、Cu、Zn、As、Se、Mo、Ag、Cd、Tl、Pb采用普通模式检测,14种金属元素Li、Be、B、Mg、Al、Co、Ni、Ga、Rb、Sr、Te、Ba、Bi、U采用碰撞/反应池技术(CCT)模式测定,以消除样品溶液中潜在的干扰。在试验条件下,Co、Ni、Cr、Zn、Se、Mo、Ag、Pb等8种金属元素未检出。ICP-MS检出限为:9.789 ng/mL(Fe)、2.691 ng/mL(Cr)、1.803 ng/mL(Zn)、2.076 ng/mL(B)、1.977ng/mL(Mg)、3.024 ng/mL(Al)、1.824 ng/mL(Ni),其他元素为0.003～0.921 ng/mL,方法的相对标准偏差为0.149%～9.732%,加标回收率为92.0%～110.0%。

开口箭皂苷诱导肿瘤细胞凋亡研究

目的:研究开口箭皂苷对肿瘤细胞凋亡的影响,并对其机制进行研究。方法:采用MTT法检测开口箭皂苷对体外培养的肿瘤细胞系HepG2、A549和SGC-7901增殖的影响,利用荧光染色技术及流式细胞术研究开口箭皂苷对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响,利用Western blotting技术检测Bax、Bcl-2、P53蛋白的表达情况。结果:开口箭皂苷对HepG2肝癌细胞具有显著的抑制作用,其24、48及72 h对HepG2细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为13.99μg/ml、11.78μg/ml和10.01μg/ml,且呈一定的量效关系和时效关系;对A549肺癌细胞的72h的IC50为23.68μg/ml,而对SGC-7901胃癌细胞的增殖无明显抑制作用。流式细胞仪检测结果显示,HepG2细胞经浓度为10、15和20μg/ml的开口箭皂苷处理24h后,S期细胞的比例分别为28.81%、34.96%、46.57%;凋亡细胞的比例分别为30.06%、30.32%和40.34%。Western blotting结果显示,随着开口箭皂苷浓度的增加,Bax、P53蛋白的表达量增加,而Bcl-2的表达量减少。结论:开口箭皂苷可抑制HepG2和A549细胞的增殖并诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与开口箭皂苷上调P53蛋白表达,从而影响Bax和Bcl-2表达,使细胞阻滞于S期,并最终导致细胞凋亡。