Optimization of Ultrasound-assisted Enzymatic Polysaccharide Extraction from Turpiniae Folium Based on Response Surface Methodology

Objective To optimize the extraction procedure and obtain the maximum total polysaccharide yield from Turpiniae Folium.Methods Response surface methodology(RSM),combining Plackett–Burman design(PBD),steepest ascent method,and Box–Behnken design(BBD),was employed.The significant factors contributing to polysaccharide production were determined by PBD.The path of steepest ascent method was performed to rapidly reach the neighborhood of the optimum region.BBD and RSM were applied to further investigate the mutual interaction between the variables and to define the optimal values.Results The significant factors contributing to polysaccharide production were enzyme concentration,extraction time,and liquid-to-solid ratio.The optimal conditions for maximal TFP were:enzyme concentration of2.8%,extraction time of41min,and liquid-to-solid ratio of27mL/g.The experimental yield of3.08%was in good agreement with the model-predicted yield of3.1%under the optimized conditions.Conclusion This study was successfully applied to optimize the extraction conditions of Turpiniae Folium polysaccharide,which can contribute to its further production and application.

基于mtDNA COⅠ基因序列的山香圆平背粉虱遗传多样性分析

为探究茶树害虫山香圆平背粉虱(Crenidorsum turpiniae)的遗传多样性,掌握山香圆平背粉虱的遗传分化现状及精准防控提供理论依据,通过基因组DNA提取、PCR扩增与测序,测定贵州省11个不同地理区域的山香圆平背粉虱种群mtDNA COⅠ基因序列片段,开展基因序列特征、单倍型及遗传多样性、遗传分化与基因交流、分子变异和单倍型系统发育分析。结果表明,山香圆平背粉虱mtDNA COⅠ基因序列片段扩增长度均为658 bp,序列具有明显的A+T偏倚性,共定义10个单倍型。贵州茶园山香圆平背粉虱总群体遗传多样性较高,表现出高单倍型多样性(Hd=0.800)和高核苷酸多样性(Pi=0.067 0)。11个地理种群的山香圆平背粉虱总群体遗传分化程度高(Fst=0.920 3),基因交流水平低(Nm=0.04)。AMOVA分析显示,山香圆平背粉虱的遗传变异主要来自组间(FCT=0.912 9);中性检验与错配分布分析综合表明,山香圆平背粉虱近期未发生过明显扩张现象;单倍型系统发育分析及中介网络图聚类结果均表明,山香圆平背粉虱聚为3分支,分化枝可能已达物种水平。

山香圆总黄酮体外对大鼠佐剂性关节炎免疫功能的影响

目的观察山香圆总黄酮（total flavonoids of turpinia arguta seen，TFS）体外对佐剂性关节炎（adjuvant arthritis，AA）大鼠免疫功能的影响。方法选择健康♂SD大鼠，采用弗氏完全佐剂（freunds complete adjuvant，FCA）诱导AA大鼠模型：将同一批号的的卡介苗80℃水浴1h灭活，用灭菌液体石蜡配成10g·L^-1的乳剂。d28处死大鼠，取AA大鼠的免疫细胞（脾细胞和腹腔巨噬细胞）体外给药培养并检测一些免疫指标：细胞增殖法检测ConA、LPS诱导的大鼠脾淋巴细胞增殖反应及IL-1、IL-2的分泌水平；放免法检测PGE2水平。结果与正常组相比，AA大鼠ConA、LPS诱导的脾淋巴细胞增殖功能低下，脾淋巴细胞产生的IL-2活性下降，LPS诱导的大鼠腹腔巨噬细胞产生的IL-1、PGE2水平明显升高。TFS（10^-8～10^-4）mg·L^-1可纠正AA大鼠低下的脾淋巴细胞增殖反应和脾细胞IL-2的产生，降低AA大鼠腹腔巨噬细胞产生过高的IL-1和PGE2。结论山香圆总黄酮对AA大鼠的异常免疫功能具有调节作用。

山香圆总黄酮对LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS,COX-2,NF-кB表达的影响

目的观察山香圆总黄酮对LPS诱导的RAW264.7细胞中iNOS、COX-2及NF-кB表达的抑制作用。方法采用Griess法检测山香圆总黄酮对NO生成的影响,通过westernblot分析i NOS、COX-2及NF-кB的表达。结果山香圆总黄酮能显著抑制RAW264.7细胞中NO的生成以及iNOS、COX-2及NF-кB蛋白的表达,且随着浓度的增加,抑制效果明显。结论山香圆总黄酮的抗炎作用是通过下调NF-кB的活性进而抑制i NOS、COX-2的表达来实现的。

山香圆总黄酮对慢性咽炎模型大鼠NF-κB、IκBα表达的影响

以2.5%氨水喷咽部建立大鼠慢性咽炎模型,用HE染色法观察咽部病理形态学改变,用ELISA法检测血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6,用RT-qPCR测定咽部组织NF-κBp65mRNA的表达,用Western blot检测咽部组织NF-κBp65和IκBα蛋白的表达,探讨山香圆总黄酮对慢性咽炎模型大鼠NF-κB、IκBα表达的影响.结果显示:山香圆总黄酮能明显改善模型大鼠咽部病理形态学;与模型组比较,山香圆总黄酮各组能不同程度地下调TNF-α、IL-1β、IL-6和NF-κBp65的表达并上调IκBα的表达,其中高剂量组最显著.这表明山香圆总黄酮能通过抑制NF-κB的表达和IκBα的解离下调炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,从而减轻炎症,发挥抗慢性咽炎作用.

山香圆化学成分及药理活性的研究进展

山香圆具有抗菌、抗炎、镇痛等药理作用。现对山香圆的化学成分、药理作用及临床应用等的研究进展做一综述,以期为进一步研究和开发利用提供参考。

山香圆属药学研究综述

对山香圆属的种属、成分、药理、临床应用等研究进行了综述,为深入开发利用提供科学依据。

山香圆叶化学成分研究

目的研究山香圆叶的化学成分。方法采用色谱技术进行分离、纯化，通过理化常数和波谱分析鉴定化合物结构。结果从山香圆叶中分离出10个化合物，分别为芹菜素（1），芹菜素-7-O-β-D-葡糖苷（2），芹菜素。7-新橙皮糖苷（3），芹菜素-7-（2’-α-L-鼠李糖基）芸香糖苷（4），对羟基桂皮酸（5），没食子酸乙酯（6），没食子酸（7），eucomic acid（8），β-谷甾醇（9），胡萝卜苷（10）。结论化合物4～6，8，9为首次从该属植物中分离得到。

山香圆颗粒联合抗病毒颗粒治疗小儿急性上呼吸道感染的临床疗效和安全性

目的:观察山香圆颗粒联合抗病毒颗粒治疗小儿急性上呼吸道感染的临床疗效和安全性观察。方法:将812例急性上呼吸道感染患儿随机分组,其中治疗组406例,给予山香圆颗粒联合抗病毒颗粒治疗;对照组406例,给予抗病毒颗粒治疗;疗程均为3d。观察两组患儿临床治疗效果以及不良反应情况。并对比其流涕及鼻塞停止时间、退热时间、咽部充血消失时间以及咳嗽停止时间。结果:治疗组各项临床时间指标均短于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组患儿治疗过程中及治疗后均无不良反应发生;治疗组总有效率为91.6%,高于对照组的78.3%,差异显著(P<0.05)。结论:山香圆颗粒联合抗病毒颗粒治疗小儿急性上呼吸道感染安全性较高,临床疗效显著,无不良反应情况发生,值得临床推广应用。

山香圆总黄酮提取工艺的研究

目的优化山香圆总黄酮提取工艺。方法采用乙醇回流浸提法,在单因素分析的基础上,通过L16(45)正交试验,优选出山香圆总黄酮的提取工艺。结果山香圆总黄酮的最佳提取工艺为:提取温度60℃、时间1.5 h、乙醇体积分数90%、料液比1:50、提取次数4次。结论该法适用于山香圆总黄酮的提取制备。

山香圆总黄酮对LPS诱导的RAW264.7细胞MAPK信号通路的影响

目的观察山香圆总黄酮对脂多糖诱导的RAW264.7细胞MAPK信号通路的影响。方法采用脂多糖刺激RAW264.7细胞制备炎症模型;CCK-8法测定细胞活力;ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌量;westernblot法检测ERK1/2、JNK和p38蛋白的磷酸化水平。结果低于400μg/mL的山香圆总黄酮对RAW264.7细胞生长无影响;山香圆总黄酮各剂量组均能抑制p-ERK1/2、p-JNK、p-p38蛋白的表达以及TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌,中、高剂量组呈显著性抑制(P<0.05,P<0.01)。结论山香圆总黄酮能通过抑制ERK1/2、JNK、p38磷酸化水平,降低TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌,发挥抗炎作用。

正交优化-微波辅助提取山香圆叶总黄酮的工艺研究

目的:研究微波辅助提取山香圆叶总黄酮的最佳工艺条件。方法:以总黄酮得率为指标,采用单因素试验与正交试验相结合的方法,优化微波辅助提取山香圆叶中总黄酮的提取工艺条件。结果:微波辅助法提取山香圆总黄酮的最佳工艺条件为乙醇浓度70%,微波辐射时间为6 min,微波功率为600 w,料液比为1∶40(g/mL)。在此条件下测得的提取率为1.606%。结论:微波辅助提取法可用于山香圆总黄酮的提取,其中乙醇浓度对总黄酮的提取有显著影响。

山香圆中三萜类化合物的研究

目的研究山香圆叶的化学成分。方法采用色谱技术分离、纯化,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物结构。结果从山香圆叶分离出9个五环三萜化合物,分别为熊果酸(I),pomolic acid(II),corosolic acid(III),tormentic acid(IV),maslinic acid(V),tormentic acid-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯(VI),arjunolic acid-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯(VII),2α,3β,23,29-四羟基齐墩果烷-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯(VIII),2α,3β,19α,23-四羟基乌苏烷-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯(IX)。结论化合物V-IX均为首次从该属植物中分离得到。

山香圆叶挥发油化学成分及抗氧化和抗炎活性研究

山香圆叶具有较好的临床疗效,但其挥发油的化学成分和生物活性尚未深入研究。本文应用超临界萃取法提取其挥发油,采用GC-MS对其小极性物质进行全面分析(甲酯化和非甲酯化),并对其中等极性物质进行LC-MS分析,采用了DPPH法和ABTS法测定了其抗氧化活性,采用LPS诱导RAW 264.7细胞模型探索山香圆叶挥发油的抗炎活性。GC-MS非甲酯化和甲酯化分别鉴定了38和42个化合物,主要为亚油酸、γ-谷甾醇、角鲨烯、2,2′-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)、反-9-十八碳烯酸、棕榈酸等物质。LC-MS的正负离子模式下,共鉴定出256个化合物,主要为萜类、苯丙素类、酚类、黄酮类、生物碱类、香豆素及其衍生物类、脂肪酰类、倍半萜类、脂肪酸类等化合物。活性研究表明,山香圆叶挥发油具有较好的抗DPPH和ABTS自由基能力,同时能显著抑制LPS诱导RAW 264.7细胞NO和IL-6的释放量,且成剂量依赖性。以上结果表明,山香圆叶挥发油具有较复杂的化学成分,并具有较好的抗氧化和抗炎作用,可作为开发功能性食品和药品的天然来源。

分光光度法测定山香圆片中黄酮的含量

采用不同溶剂经超声、微波、热回流三种方法提取山香圆片,以芦丁为对照品,用分光光度法测定总黄酮含量.结果表明:以70%乙醇作溶剂,回流3h的条件下,黄酮的提取量最高.

锐尖山香圆生物学特性及其容器育苗技术研究

通过锐尖山香圆种子的采集、处理和贮藏、催芽、袋装、苗期管理和病虫害防治等方面的试验,报道了锐尖山香圆的生物学特征,总结出锐尖山香圆种子繁殖容器苗培育关键技术,以期为药用山香圆仿生栽培提供参考。

山香圆叶药材高效液相指纹图谱研究

目的采用高效液相色谱法(HPLC)对山香圆叶药材的指纹图谱进行分析。方法色谱柱为Eclipse XDB-C18(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液,进行梯度洗脱,柱温30℃,检测波长200~400 nm。结果建立了山香圆叶药材高效液相指纹图谱,并得到了10个共有峰,相似度在0.85~0.98。结论此方法稳定可靠,重复性良好,可为山香圆叶药材质量控制提供参考。

山香圆叶提取物对文昌鸡生长性能、血清免疫和抗氧化功能以及肠道微生物的影响

本试验旨在研究饲粮中添加山香圆叶提取物(TFE)对文昌鸡生长性能、血清免疫和抗氧化功能及肠道微生物的影响。选择同批次的42日龄雌性文昌鸡432羽,随机分为4组,每组6个重复,每个重复18羽。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮中分别添加0.015%、0.030%、0.060%TFE的试验饲粮,试验期为42 d。结果表明:1)随着饲粮中TFE添加水平的增加,文昌鸡终末体重呈显著线性升高(P<0.05),料重比(F/G)呈显著线性和二次曲线变化(P<0.05)。与对照组相比,添加0.030%和0.060%的TFE显著提高了文昌鸡的平均日增重(ADG)(P<0.05)。2)随着TFE添加水平的增加,文昌鸡血清总蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量呈显著线性和二次曲线变化(P<0.05),血清免疫球蛋白M(IgM)含量呈显著线性增加(P<0.05)。与对照组相比,添加0.030%和0.060%的TFE显著提高了血清免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白G(IgG)含量(P<0.05),显著降低了血清丙二醛(MDA)、IL-6和TNF-α含量;添加0.060%的TFE显著提高了血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和IL-10含量(P<0.05),不同添加水平的TFE均显著提高了文昌鸡血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性(P<0.05),显著降低了血清IL-1β含量(P<0.05)。3)随着TFE添加水平的增加,空肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度呈显著线性和二次曲线变化(P<0.05)。4)与对照组相比,添加0.060%的TFE显著降低了盲肠变形菌门相对丰度(P<0.05),显著提高了粪肠杆菌属和乳酸杆菌属的相对丰度(P<0.05)。5)通过二次函数拟合,确定TFE最适添加水平为0.056%。综上所述,饲粮中添加TFE能够改善文昌鸡生长性能,提高文昌鸡血清免疫和抗氧化功能,可以通过提高血清抗炎因子含量,降低促炎因子含量,从而缓解机体炎症损伤,改善肠道组织形态,促进肠道对营养物质的吸收。本试验条件下,推荐42~84日龄文昌鸡TFE最适添加水平为0.056%。

锐尖山香圆叶中三萜类成分的研究

从锐尖山香圆(Turpinia arguta(Lindl.)Seem.)叶中分离得到了11个三萜类化合物。通过光谱分析,分别鉴定其结构为熊果酸(1),3β,6β,23-trihydroxy-12-oleanen-28-oic acid(2),3β,6β,23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid(3),3β,6β,19α,23-tetrahydroxyurs-12-en-28-oic acid(4),1α,3β,23-trihydroxy-12-oleanen-28-oic acid(5),arjunglucoside II(6),rosamultin(7),3β-O-β-D-glucopyranoylcincholic acid(8),cinchonaglycoside C(9),mussaendoside S(10)和3β-O-β-D-glucopyranosyl quinovic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester(11)。除化合物1和6,其它化合物均为首次从山香圆叶中分离得到。

表面活性剂-超声协同提取山香圆叶总黄酮工艺的优化

目的优化表面活性剂-超声协同提取山香圆Turpinia arguta Seem.叶总黄酮工艺。方法在单因素试验基础上,以十二烷基硫酸钠(SDS)用量、液料比、乙醇体积分数为影响因素,总黄酮提取率为评价指标,Box-Behnken设计优化提取工艺。结果最佳条件为十二烷基硫酸钠用量0.64%,液料比25∶1,乙醇体积分数50%,超声温度60℃,超声时间40 min,总黄酮提取率为3.48%。结论该方法简单、节能、省时,可用于山香圆叶总黄酮的提取。