六味地黄汤对老化模型大鼠视网膜组织铁死亡通路的影响

目的:观察六味地黄汤对老化模型大鼠视网膜组织中铁蛋白、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达水平的影响。方法:将45只SD大鼠随机分成空白组、模型组、中药组,各15只。空白组腹腔注射生理盐水,模型组、中药组腹腔注射D-半乳糖[500 mg/(kg·d)],同时,中药组灌服六味地黄汤[6.75 g/(kg·d)],空白组、模型组灌服等体积生理盐水,连续8 wk。检测各组大鼠视网膜组织中铁蛋白、SLC7A11、GSH、GPX4的表达水平。结果:模型组较空白组大鼠视网膜组织中铁蛋白表达增高(P<0.05),GSH、SLC7A11、GPX4表达降低(P<0.05)。中药组较模型组大鼠视网膜组织中GSH、SLC7A11、GPX4表达增高(P<0.05)。结论:六味地黄汤可能通过调控铁死亡途径发挥延缓视网膜老化的作用。

基于生物信息学探讨犀角地黄汤治疗银屑病的作用机制

目的运用生物信息学方法筛选银屑病炎症相关的特征基因并探索犀角地黄汤的干预机制。方法从GEO数据库中筛选包含银屑病皮损及正常对照的数据集。从GSEA数据库中获得炎症相关基因。使用limma包筛选出差异表达基因并与炎症相关基因取交集获取差异表达的炎症相关基因(differentially expressed inflammation-related genes,DEIRGs),并对DEIRGs进行基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。通过加权基因共表达网络分析(weighted geneco-expression network analysis,WGCNA)和最小绝对值收敛和选择算子(least absolute shrinkage and selection operator,LASSO)回归筛选出银屑病炎症相关的特征基因,并进行受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)检验。检索TCMSP、TCMID数据库,筛选犀角地黄汤活性成分和靶点,与DEIRGs取交集得到有效作用成分和有效靶点。然后,通过Pubchem、PDB数据库获取相关结构文件,再利用swissdock数据库进行分子对接并计算结合能。结果本研究共筛选560个差异表达基因和20个DEIRGs。GO和KEGG富集分析共得到779条生物功能和37条通路。WGCNA分析共筛选出483个基因,与20个DEIRGs取交集得到9个银屑病核心炎症反应基因,通过LASSO回归筛选出6个与银屑病发病高度相关的炎症反应特征基因,分别为CXCL10、F3、NMI、P2RY2、RTP4和TPBG。ROC曲线显示各个基因的曲线下面积(area under curve,AUC)均>0.9,LASSO回归模型的AUC为1。将犀角地黄汤的中药成分采用网络药理学检索解析后发现赤芍中的活性成分鞣花酸(ellagic acid)可作用于CXCL8,芍药苷(paeoniflorin)可作用于IL-6;牡丹皮中的活性成分栎精(quercetin)可作用于CXCL8、IL-6、F3和CXCL10。结论CXCL10、F3、NMI、P2RY2、RTP4和TPBG可能是银屑病的炎症相关特征基因,预测犀角地黄汤中的赤芍、牡丹皮有作用于银屑病相关特征基因的成分,可为后续药物研究提供参考。

六味地黄丸治疗早发性卵巢功能不全模型小鼠的分子机制

背景:在临床上,大多数治疗早发性卵巢功能不全的方剂均以六味地黄丸为基础方演变而来,并且取得了较好的疗效。目前对六味地黄丸的实验研究大多为体内动物模型的形态学观察及生理生化指标的检测,而分子机制方面的研究报道较少。目的:探讨六味地黄丸治疗早发性卵巢功能不全的分子作用机制。方法:环磷酰胺120 mg/kg联合白消安12 mg/kg腹腔注射制备早发性卵巢功能不全小鼠模型,然后用六味地黄丸混悬液对早发性卵巢功能不全小鼠进行干预,干预12周采用ELISA法检测小鼠血清中促卵泡刺激素、促黄体生成素、雌激素、抗苗勒氏管激素、8-羟脱氧鸟苷、总抗氧化能力、活性氧水平;苏木精-伊红染色观察小鼠卵巢形态学改变;透射电镜观察小鼠卵泡颗粒细胞超微结构及颗粒细胞线粒体的凋亡情况;免疫组化法检测六味地黄丸对小鼠卵巢颗粒细胞中核受体转录辅激活因子(receptor gamma coactivator-1 alpha,PGC-1α)、线粒体转录因子A(mitochondrialtranscriptionfactorA,TFAM)的表达水平。结果与结论:①与模型组比较,实验组小鼠血清促卵泡刺激素、促黄体生成素、活性氧、8-羟脱氧鸟苷水平降低(P<0.05),雌激素、抗苗勒氏管激素、总抗氧化能力水平升高(P<0.05);②苏木精-伊红染色发现模型组小鼠卵巢组织中闭锁卵泡和黄体较多,个别可见次级卵泡,间质纤维化增生;实验组小鼠卵巢组织可见大量闭锁卵泡,黄体较少,边缘可见原始卵泡,次级卵泡较少,未见明显成熟卵泡;③透射电镜发现实验组小鼠卵巢颗粒细胞内细胞器较完整;④免疫组化结果显示,实验组小鼠卵巢组织PGC-1α的表达水平在第4周稍有升高至第8,12周无明显变化,与模型组有明显差异;实验组小鼠卵巢组织TFAM的表达水平在第4周时短暂升高,然后稍有所下降,但结果均与模型组有明显差异;⑤结果表明,六味地黄丸通过PGC-1α-TFAM-ROS信号通路在一定程度上抑制早发性卵巢功能不全小鼠卵巢颗粒细胞凋亡,从而改善卵巢的内分泌功能,提高机体抗氧化能力,减轻氧化应激损伤程度。

犀角地黄汤预防小鼠中暑效果及血液指标的变化

为了探究犀角地黄汤对中暑小鼠的预防效果及血液指标变化的影响。将30只小鼠随机分为对照组、中暑组和干预组,每组10只,干预组小鼠每天使用11.375 g/kg犀角地黄汤进行灌胃,连续用药5 d,对照组和中暑组小鼠灌胃等量的生理盐水。在最后一次灌胃后2 h进行中暑造模。将中暑组和干预组小鼠置于40℃的恒温环境中持续60 min,对照组小鼠置于室温环境中,对比各组小鼠的抗中暑效果,试验结束后,小鼠眼眶分别采集抗凝血用于血常规检测,取血清用于血清生化和ELISA检测。结果显示,与空白组相比,中暑组小鼠的肛温显著升高(P<0.05),与中暑组相比,干预组小鼠肛温显著下降(P<0.05);与空白组相比,中暑组小鼠血液WBC、Gran#、Lymph#、Mon#、RBC、HGB、HCT、MCV、RDW、MPV、PDW水平显著升高(P<0.05),PLT、PCT水平显著下降(P<0.05),与中暑组相比,干预组小鼠血液WBC、Gran#、Lymph#、Mon#、RBC、HGB、HCT、MCV、MPV、PDW显著下降(P<0.05),PLT、PCT水平显著升高(P<0.05);与空白组相比,中暑组小鼠血清AST、ALT、BUN、CREA和CK含量显著升高(P<0.05),与中暑组相比,干预组小鼠血清AST、ALT、BUN、CREA、CK显著下降(P<0.05);与空白组相比,中暑组小鼠血清MDA、TNF-α、IL-6和IL-1β含量显著升高(P<0.05),SOD、GSH-PX和HSP70显著下降(P<0.05),与中暑组相比,干预组血清MDA、TNF-α、IL-6和IL-1β含量显著下降(P<0.05),HSP70、SOD和GSH-PX含量显著升高(P<0.05)。表明犀角地黄汤可以有效地预防小鼠中暑疾病的发生,其机制可能与抑制炎性反应和提高机体的抗氧化水平有关,可为犀角地黄汤用于中暑病的防治提供一定的理论依据。

加减参芪地黄汤治疗慢性肾脏病3-4期的临床研究

目的探讨加减参芪地黄汤在慢性肾病3-4期患者临床治疗中的作用。方法将2019年1月至2023年5月在苏州市中医医院住院及门诊治疗的慢性肾病3-4期患者60例,按随机数字表分组,各30例。对照组在常规治疗的基础上辅以肾衰宁片口服,治疗组在常规治疗的基础上给予加减参芪地黄汤中药治疗。检测两组患者肌酐、尿素氮、尿酸等指标,比较两组患者中医证候积分及临床疗效。结果治疗组总有效率为86.67%,显著高于对照组(77.33%)(P<0.05)。治疗组治疗后血Scr、BUN、UA显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗组倦怠乏力、食少纳呆、腰膝酸软、肢体困重等证候积分与对照组比较均有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。结论加减参芪地黄汤对慢性肾病3-4期患者疗效良好,可降低血肌酐、尿素氮、尿酸,改善临床症状,延缓慢性肾脏病进展。

百合地黄汤及其类方在肿瘤治疗中的应用

肿瘤进展及化疗、放疗、手术各种治疗过程中患者常发生的不适症状(例如抑郁、心烦、食欲时好时坏、呕吐、口苦、小便色黄、身体虚弱)与百合病类似。仲景病证结合思路也适用于肿瘤治疗。例如,百合地黄汤加减治疗非小细胞肺癌及放射性肺炎、百合类方治疗肿瘤相关性抑郁焦虑、百合知母汤加减治疗乳腺癌术后心烦夜寐难安及肿瘤并发出血,百合滑石散加减治疗直肠癌术后抑郁兼小便灼热、百合滑石代赭汤加减治疗胃癌。以百合地黄汤为主方的病证结合思路在运用到肿瘤治疗时需注意明辨证型,抓住主症,病证结合。此外,对于百合地黄汤的其他类方(百合鸡子汤、百合洗方、栝蒌牡蛎散)目前虽未见肿瘤临床文献报道,但亦可应用于今后临床实践中,从而提高患者生活质量。

六味地黄丸联合大黄液治疗慢性牙周炎的效果分析

目的:分析六味地黄丸联合大黄液治疗慢性牙周炎的效果及对牙龈指数(GI)、探针深度(PD)的影响。方法:选取2021年1月-2022年1月广州市胸科医院诊治的慢性牙周炎患者86例作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和联合组,各43例。两组患者均采用常规治疗,对照组在此基础上局部应用大黄液治疗,联合组在对照组基础上给予六味地黄丸治疗。比较两组临床疗效、中医证候积分、牙周健康指标和炎性因子水平。结果:联合组临床疗效总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.044)。治疗后,两组牙齿松动、肢体沉重、牙龈红肿、胸闷口苦、反复咽痛评分均下降,且联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组GI和PD均下降,联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β水平均下降,且联合组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:六味地黄丸联合大黄液治疗慢性牙周炎的临床效果显著,可有效改善患者中医证候积分和牙周健康指标,降低炎性因子水平。

阴虚水肿浅见

水肿病与肺的通调、脾的转输、肾的水液代谢调节、肝的疏泄、心的行血、三焦的气化有关。多数医家认为水为阴邪,得温则化,故虚证水肿多与脾肾阳气虚损有关,治疗常应用具有温热作用的中药以化水。但阴虚水肿亦不少见。阳虚、阴虚均可导致水肿的发生,现代医家多重视阳虚水肿,对阴虚水肿有所忽视。故此文对阴虚水肿的病因及治疗方剂(济阴汤、白茅根汤、加减八味地黄汤、滋阴清燥汤、猪苓汤)进行论述,尤推《医学衷中参西录》之济阴汤、白茅根汤、加减八味地黄汤。

杞菊地黄汤联合通窍明目针法治疗糖尿病视网膜病变的临床观察

目的 探讨杞菊地黄汤联合通窍明目针法治疗糖尿病视网膜病变(DR)的临床效果。方法 将98例非增殖期DR患者随机分为对照组49例和试验组49例。对照组予以常规治疗及羟苯磺酸钙胶囊,试验组在对照组基础上予以杞菊地黄汤联合通窍明目针法治疗。2组患者治疗时间均为8周。比较2组临床疗效,视网膜渗漏总面积及毛细血管无灌注区总面积,黄斑区视网膜平均厚度(CAT)、体积(CV)及中央区厚度(CST)。结果 治疗后,试验组总有效率为93.88%(46/49),高于对照组的75.51%(37/49)(P<0.05)。与对照组比较,试验组治疗后视网膜渗漏总面积及毛细血管无灌注区总面积较低,黄斑区CAT、CV及CST较低(P<0.05)。结论 杞菊地黄汤联合通窍明目针法能明显改善DR患者眼底视网膜微血管病变,缓解黄斑区视网膜水肿,临床疗效显著。

六味地黄汤治疗细菌性阴道病的疗效及对阴道菌群和免疫功能的影响

目的 观察六味地黄汤治疗细菌性阴道病的疗效及对阴道菌群和免疫功能的影响。方法 选取2021年10月—2023年10月于泉州市中医院门诊就诊的细菌性阴道病患者95例,依照双盲法将患者随机分为试验组47例和对照组48例。对照组采用替硝唑栓治疗,试验组在对照组治疗的基础上采用六味地黄汤治疗,7 d为1个疗程,2组均治疗3个疗程。比较2组治疗效果、临床症状消失时间,治疗前后阴道菌群、阴道微生态情况及免疫功能指标。结果 试验组总有效率为95.74%,高于对照组的81.25%(χ^(2)=4.873,P=0.027);试验组白带异常、外阴瘙痒、阴道疼痛消失时间短于对照组(P<0.01)。治疗3个疗程后,2组阴道乳杆菌数量及阴道pH值≤4.5者占比和乳杆菌占优势者占比高于治疗前,肠杆菌、类杆菌及支原体、白色念珠菌数量少于治疗前,白介素-12、γ-干扰素水平低于治疗前,且试验组变化幅度大于对照组(P<0.01)。结论 六味地黄汤治疗细菌性阴道病临床治疗效果较好,可加速症状缓解,平衡阴道内酸碱度,促进患者阴道内有益菌的生长,同时能够调节免疫功能,增强患者的抵抗力,加速疾病痊愈。

加味百合地黄汤对围绝经期抑郁症模型大鼠HPO轴和雌激素受体表达的影响

目的基于下丘脑-垂体-卵巢(hypothalamic-pituitary-ovarian,HPO)轴及雌激素受体(estrogen receptor,ER)探明加味百合地黄汤治疗围绝经期抑郁症的功效及潜在机制。方法将大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性药物组(氟哌噻吨美利曲水溶液1.89 mg/kg)以及加味百合汤高、中、低剂量组(16.2 g/kg、8.1 g/kg、4.05 g/kg),每组10只。除正常对照组外,其他组均采用双侧卵巢摘除联合慢性不可预见性应激建立围绝经期抑郁症大鼠模型。各组给药21 d后采用糖水偏好实验和强迫游泳实验评价大鼠抑郁样行为,酶联免疫吸附法检测血清促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E2)含量,HE染色观察下丘脑、垂体、海马等组织病理损伤情况,RT-PCR和Western blot法检测下丘脑、海马组织雌激素受体基因及蛋白的表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠糖水偏好度显著下降(P<0.01),强迫游泳不动时间显著增加(P<0.01),表现出明显抑郁样行为,血清GnRH、FSH、LH含量均显著升高(P<0.01或P<0.05),E2降低(P<0.01),下丘脑、垂体及海马组织受损,雌激素受体表达显著降低(P<0.01);经加味百合地黄汤干预治疗后,模型组大鼠抑郁样行为显著改善(P<0.01或P<0.05),HPO轴亢进状态及海马损伤得以缓解,下丘脑、海马雌激素受体表达均显著增加(P<0.01或P<0.05)。与阳性药物组比较,加味百合地黄汤高剂量组下丘脑雌激素受体基因表达显著增加(P<0.05)。结论加味百合地黄汤通过抑制HPO轴亢进及增加脑内雌激素受体水平,发挥抗围绝经期抑郁症作用。

丹荷六味地黄汤对绝经后NAFLD患者脂代谢及心理状态评分的影响

目的:探讨丹荷六味地黄汤对绝经后非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者脂代谢及心理状态评分的影响。方法:选取2021年12月至2022年12月河南中医药大学第一附属医院收治的绝经后NAFLD患者68例,按随机数字表法分为观察组和对照组,每组34例。观察组给予丹荷六味地黄汤,对照组给予维生素E软胶囊,2周为1个治疗周期,对比两组患者治疗6个周期后的肝功能、脂代谢、雌激素E2、脂肪变和肝纤维化评分、改良Kupperman评分、焦虑自评量表评分(SAS)、自评抑郁量表评分(SDS)及不良反应。结果:治疗6个周期后,观察组患者总有效率88.2%,高于对照组的65.6%(P<0.05)。观察组患者BMI、腰围减少,ALT、AST、GGT、TG、TC、HDL、LDL、游离脂肪酸、雌激素E2水平改善,肝硬度指数(CAP)、肝硬度值(LSM)、APRI值降低,改良Kupperman评分、SAS和SDS降低均优于对照组(P<0.05)。结论:丹荷六味地黄汤治疗绝经后NAFLD疗效确切,具有改善肝功能、脂代谢、雌激素水平,减少肝脂肪变和纤维化评分的作用,且对绝经后NAFLD患者的心理状态具有一定调节作用。

犀角地黄汤加减方抑制焦亡相关蛋白减轻脓毒症致急性肺损伤机制研究

目的探讨犀角地黄汤加减方通过抑制焦亡相关蛋白减轻脓毒症小鼠肺损伤的机制。方法将小鼠分为假手术组、模型组、抑制剂组、中药低剂量组和中药高剂量组。采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症小鼠模型,于造模后12 h处死小鼠,双抗体夹心酶联免疫吸附法测定小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)水平,留取完整左肺组织行病理切片,评估肺损伤情况,留取右肺组织提取RNA和蛋白,RT-PCR、Western blotting定量检测肺组织中NF-κB、NLRP3和Caspase-1、GSDMD的表达。结果与模型组比较,抑制剂组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平显著降低(P<0.01),肺组织中Caspase-1、GSDMD基因和蛋白的表达下调,差异均具有显著统计学意义(P<0.01);与模型组相比,中药组小鼠血清中IL-1β、IL-18水平显著降低(P<0.01),肺损伤减轻,肺组织中NF-κB、NLRP3和Caspase-1、GSDMD基因和蛋白的表达下调,差异均具有统计学意义(P<0.01),且中药高、低剂量组间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论犀角地黄汤加减方能够通过抑制焦亡相关通路蛋白来减轻脓毒症肺损伤,且与药物浓度相关。

参芪地黄汤合多靶点免疫抑制治疗IgA肾病合并膜性肾病个案报道

报道1例IgA肾病重复肾活检为IgA肾病合并膜性肾病的病例。患者病史长达11年且多种免疫抑制治疗均疗效不佳,属于难治性肾病,临床主要表现为大量蛋白尿及肾功能异常,伴有血尿、高血压。李伟教授根据多年用药经验及相关文献研究结果,给予参芪地黄汤联合多靶点免疫抑制治疗,重点分析中医辨证论治同西医病理结合,以益气活血清泄为原则,探讨其治疗方案及疾病转归,并复习相关文献,为中西医结合诊治IgA肾病合并膜性肾病提供治疗方向和临床依据。

犀角地黄汤联合来氟米特对系统性红斑狼疮的改善作用

目的观察犀角地黄汤联合来氟米特对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythema,SLE)的改善及对Th1/Th2失衡的影响。方法选取123例急性活动期热毒炽盛证SLE患者,用随机数字表法分为对照组(n=61)和试验组(n=62)。对照组采用醋酸泼尼松片联合来氟米特治疗,试验组在对照组治疗的基础上用犀角地黄汤治疗。比较治疗前、治疗后1个月和治疗后3个月2组疾病活动度评分、中医证候评分、补体C3水平和Th1/Th2值;比较2组抗ds-DNA抗体阳性率、临床疗效和不良反应。结果治疗前2组SLE疾病活动度评分(SLE disease activity score,SLEDAI)、中医证候评分、补体C3水平和Th1/Th2值比较,差异无统计学意义;治疗后1、3个月试验组SLEDAI评分、中医证候评分、Th1/Th2值和抗ds-DNA抗体阳性率均明显低于对照组,补体C3水平和临床总有效率均明显高于对照组(P<0.05);试验组不良反应发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论犀角地黄汤可改善急性活动期热毒炽盛证SLE患者疾病活动度及中医证候、实验室指标,提升临床疗效,减少糖皮质激素及免疫抑制剂所致的不良反应。

地黄饮子治疗痴呆效果研究的Meta分析

目的:系统评价地黄饮子加减及联合常规西药治疗痴呆的有效性。方法:计算机检索中国知网、中国生物医学文献数据库、万方数据库、维普数据库、PubMed、Web of science、Embase数据库中地黄饮子加减及联合常规西药治疗痴呆的随机对照试验,检索时间为各数据库建库至2023年9月。筛选符合纳入标准的文献进行质量评价,提取相应资料,采用RevMan5.3软件进行Meta分析。结果:共纳入文献21篇,1647例患者。Meta分析结果显示,治疗组的临床疗效高于对照组[OR=4.22,95%CI(3.22,5.52),P<0.00001],治疗组改善痴呆的MMSE评分高于对照组[MD=3.88,95%CI(1.98,5.77),P<0.0001],治疗组改善痴呆的HDS评分高于对照组[MD=3.86,95%CI(1.85,5.88),P<0.01],治疗组改善痴呆的ADL评分低于对照组[MD=-2.79,95%CI(-4.56,-1.02),P<0.01]。治疗组痴呆的不良反应发生率未明显低于对照组[OR=0.50,95%CI(0.25,0.99),P=0.05>0.01]。结论:地黄饮子加减及联合常规西药治疗痴呆的总有效率高于单纯常规西药治疗,且可改善简易精神状态检查量表(mini-mental state examination,MMSE)、长谷川痴呆量表(hastgawa dementia scale,HDS)和日常生活能力量表(activity of daily living scale,ADL)评分。本研究存在一定的局限性,仍需多中心、大样本、高质量的研究补充论证。

基于网络药理学的犀角地黄汤治疗川崎病和过敏性紫癜“异病同治”研究

目的采用网络药理学方法分析犀角地黄汤治疗川崎病和过敏性紫癜“异病同治”机制,为相关研究提供参考。方法通过TCMSP数据库检索犀角地黄汤活性成分及作用靶点,利用GeneCards、OMIM、DrugBank数据库检索川崎病和过敏性紫癜的靶点基因,通过STRING平台构建蛋白相互作用网络,应用Metascape平台分析靶点参与的生物学过程及作用通路,构建犀角地黄汤成分-川崎病和过敏性紫癜靶点-通路网络,最后进行分子对接验证。结果犀角地黄汤治疗川崎病和过敏性紫癜的核心成分为槲皮素、山柰酚、黄芩素等,核心靶点有IL6、AKT1等。犀角地黄汤治疗川崎病和过敏性紫癜的生物学通路主要作用于血管病变通路及炎症因子通路,其功能主要为调节细胞因子及信号受体的生命活动等。GO富集分析结果显示,交集靶点富集于细胞因子相互作用及信号相互作用。结论犀角地黄汤通过保护血管内皮、抗炎、调节免疫等作用达到川崎病和过敏性紫癜“异病同治”目的,其机制可能是槲皮素等通过抑制IL6、AKT1生成,阻止TNF信号通路激活及保护流体剪切力谱。

基于网络药理学结合动物实验探究六味地黄丸治疗孤独症谱系障碍的作用机制

目的采用网络药理学、分子对接技术结合动物实验探究六味地黄丸治疗孤独症谱系障碍(autism spectrum disorder,ASD)的潜在作用机制。方法通过TCMSP数据库获取六味地黄丸的有效活性成分及对应的靶基因信息,通过GeneCards、OMIM、DrugBank数据库获取ASD疾病靶基因;将上述靶基因用韦恩图取交集后再用STRING数据库构建关键靶点PPI网络;用Metascape数据库对关键靶点进行GO功能和KEGG信号通路富集分析;用Autodock软件对核心靶点及六味地黄丸有效成分进行分子对接。动物实验验证:选用8只SPF级SD孕鼠,随机分为空白孕鼠组(1只)及模型孕鼠组(7只),采用腹腔注射丙戊酸钠(valproate,VPA)造模。筛选符合ASD疾病模型的30只雄性仔鼠,随机分为模型对照组,维生素D组和中药高、中、低剂量组;同样筛选出空白仔鼠,为空白组,每组6只。中药低、中、高剂量组分别予六味地黄丸悬浮液0.75、1.5、3 g/kg灌胃;维生素D组予维生素D滴剂1480 IU/kg灌胃;模型组、空白组予等量生理盐水灌胃。均干预1次/d,连续干预2周。采用三箱社交实验、旷场实验评估大鼠社交情况;ELISA检测各组仔鼠海马体糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)、β-连环蛋白(β-Catenin)水平;Western blot检测各组仔鼠海马体中β-Catenin、髓细胞增生原癌基因(cellular myelocytomatosis oncogene,c-Myc)、细胞周期蛋白D1(cell cycle protein D1,Cyclin D1)蛋白表达水平。结果从六味地黄丸中筛选共得到74个活性成分及205个药物靶基因,3903个ASD疾病靶基因,127个关键靶点及蛋白激酶Bα(protein kinase Bα,Akt1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、肿瘤坏死因(tumor necrosis factor,TNF)等核心靶点。GO功能富集显示主要作用于有机氮原化合物的细胞反应、突触后膜、突触后神经递质受体活动等,KEGG通路富集显示调控TNF、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、Wnt等信号通路。分子对接结果显示,六味地黄丸中的有效成分可与核心蛋白Akt1结构稳定。动物实验结果显示,在社交能力测试阶段,模型组、维生素D组及中药低、中、高剂量组仔鼠接触陌生鼠1的时间均短于空白组(P<0.05);给药2周后,维生素D组及中药低、中、高剂量组接触陌生鼠1的时间延长(P<0.05)。在社交新颖性测试阶段,模型组、维生素D组和中药低、中、高剂量组仔鼠接触陌生鼠2的时间短于较空白组(P<0.05);给药2周后,维生素D组及中药低、中、高剂量组接触陌生鼠2的时间延长(P<0.05)。矿场实验结果提示,治疗后,中药低、中剂量组活动总路程及中央区域活动路程均增加(P<0.05),维生素D组、中药高剂量组活动总路程增加(P<0.05)。与模型组比较,维生素D组及中药低、中、高剂量组GSK-3β水平升高(P<0.05),β-Catenin水平降低(P<0.05),β-Catenin、c-Myc蛋白表达减少(P<0.05);中药低剂量组Cyclin D1蛋白表达减少(P<0.05)。结论六味地黄丸可有效调控Wnt信号通路,改善VPA诱导的ASD仔鼠社交行为、焦虑状态。

参芪地黄汤的现代药理研究及肾脏疾病的应用

参芪地黄汤作为中医学中气阴双补的经典方剂,在临床应用极其广泛,尤其是肾脏疾病的常用方。参芪地黄汤配伍精妙和网络药理学研究、其内中药成分的现代药理学研究以及动物实验和临床观察均表明其治疗气阴两虚型肾脏疾病有显著疗效。临床治疗原发性、继发性肾脏疾病,以及相关并发症和其他疾病中,参芪地黄汤作为基础用方联合常规西医治疗得到广泛应用,疗效确切。

六味地黄丸介导RAGE抑制MMP-2/MMP-9对Aβ_(1-40)损伤bEnd.3细胞紧密连接蛋白的影响

目的探讨六味地黄丸对β淀粉样蛋白1-40(Aβ_(1-40))损伤的小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)的保护作用及其机制。方法采用CCK8法检测Aβ_(1-40)和六味地黄丸含药血清(MSLDP)对细胞活性的影响,筛选合适的作用浓度。将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、MSLDP+Aβ_(1-40)组和MSLDP组,采用Western blot检测低密度脂蛋白相关蛋白1(LRP1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达,免疫荧光检测LRP1、RAGE、ZO-1表达;再将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、FPS-ZM1(RAGE抑制剂)+Aβ_(1-40)组和FPS-ZM1+Aβ_(1-40)+MSLDP组,Western blot检测RAGE、MMP-9、MMP-2、ZO-1蛋白表达。结果Aβ_(1-40)呈剂量依赖性降低bEnd.3细胞活性(P<0.01),MSLDP对Aβ_(1-40)损伤的细胞活性具有保护作用(P<0.05,P<0.01),因此选择10μmol/L Aβ_(1-40)和10%MSLDP进行后续实验。与对照组比较,Aβ_(1-40)组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.01),LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),并且LRP1、ZO-1荧光强度降低(P<0.01),RAGE荧光增强(P<0.01);与Aβ_(1-40)组比较,MSLDP组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达和RAGE荧光强度降低(P<0.05,P<0.01),而LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达和LRP1、ZO-1荧光强度升高(P<0.05,P<0.01)。与Aβ_(1-40)组比较,Aβ_(1-40)+FPS-ZM1组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.05);Aβ_(1-40)+FPS-ZM1+MSLDP组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.01),FPS-ZM1和MSLDP联合使用的效果更佳。结论六味地黄丸能够保护Aβ_(1-40)损伤的脑微血管内皮的细胞紧密连接,减轻血脑屏障障碍,保护神经血管单元防治阿尔茨海默病,可能通过调节RAGE途径抑制MMP-2/MMP-9途径实现。