转录因子Twist 1和PPARγ在3T3-L1细胞中的作用及调控关系

目的探讨转录因子Twist 1和PPARγ在3T3-L1细胞中的表达水平及其与基因调控的关系。方法体外培养3T3-L1细胞,诱导分化为成熟3T3-L1细胞,western blot检测Twist 1和PPARγ在诱导分化第0、2、4、8、12天时的表达水平;采用PPARγ激动剂匹格列酮和抑制剂T0070907分别处理3T3-L1细胞24 h,western blot检测Twist 1蛋白的表达水平;用基因重组技术分别构建靶向干扰和过表达Twist 1基因的慢病毒载体并感染3T3-L1细胞,通过形态学观察、油红O染色及western blot分析Twist 1表达变化对诱导分化进程及对PPARγ的影响。结果随着3T3-L1细胞诱导分化时间的延长,PPARγ和Twist 1表达水平均显著升高,且分别自诱导分化第2天(t=2.78,P<0.05)和第4天上调显著(t=2.13,P<0.05)。western blot检测结果显示,匹格列酮和T0070907作用3T3-L1细胞24 h后Twist 1和PPARγ均表达下调;干扰和过表达Twist 1基因不影响3T3-L1诱导分化进程,但干扰Twist 1基因能够下调PPARγ的表达(P<0.05),且过表达Twist 1能够上调PPARγ的表达(P<0.05)。结论在3T3-L1细胞中Twist 1和PPARγ存在正向相互调控关系。

EMT相关调控因子Snail、Twist 1在口腔鳞状细胞癌中表达的相关性分析

目的研究上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的转录因子Snail、Twist 1与口腔鳞状细胞癌(OSCC)的表达及关系。方法实时定量PCR分析(RT-qPCR)技术和免疫组织化学(IHC)技术用于检测49例口腔鳞状细胞癌(OSCC)手术患者癌组织和癌旁组织中EMT相关转录因子SNAIL和TWIST 1的基因和蛋白的表达量。将二者的表达水平与临床病例信息相结合,分析OSCC患者发病因素,预防和治疗等方面与EMT之间的关系。结果 OSCC患者癌组织中Snail 蛋白及mRNA的相对表达量较癌旁组织高,Twist 1 蛋白和mRNA相对表达量较癌旁组织高(P<0.01)。Snail蛋白和mRNA的表达与T分期等无关(P>0.05),与吸烟、饮酒、淋巴结转移相关(P<0.05),Twist 1蛋白和mRNA的表达与患者性别、T分期、分化程度等无关(P>0.05),与淋巴结转移及吸烟情况相关(P<0.05)见表1-4。结论 Snail、Twist 1在OSCC中表达量较癌旁正常组织升高,并与转移及分化程度、吸烟、饮酒等因素相关,提示EMT相关调控转录因子Snail、Twist 1与OSCC的发生、发展及转移有着密切的联系。

Twist 1 correlates with poor differentiation and progression in gastric adenocarcinoma via elevation of FGFR2 expression

AIM:To explore the correlation between Twist-related protein(Twist)1,fibroblast growth factor receptor(FGFR)2 and gastric adenocarcinoma differentiation and progression.METHODS:We evaluated Twist1 and FGFR2 in 52 gastric adenocarcinoma samples by immunohistochemistry and quantitative real time polymerase chain reaction,and analyzed the correlation between Twist1,FGFR2 and cancer differentiation.We also detected Twist1 and FGFR2 expression in gastric adenocarcinoma cell lines,and evaluated Twist1 influence on FGFR2 expression.In addition,we studied the role of FGFR2 in Twist1-promoted cancer progression,including proliferation,invasion and epithelial-mesenchymal transition(EMT).RESULTS:Twist1 and FGFR2 were detected in almost all the gastric adenocarcinoma samples.Twist1(P=0.0213)and FGFR2(P=0.0310)m RNA levels had a significant association with gastric adenocarcinoma differentiation.Moreover,Twist1 and FGFR2 expression in poorly differentiated cells(SNU-1 and SNU-16)was notably higher than in well-differentiated cells(MKN-7 and MKN-28).In poorly differentiated gastric adenocarcinomas,FGFR2 m RNA level was significantly positively correlated with Twist1 m RNA level(P=0.004).Twist1 was proved to promote FGFR2 by regulating Twist1 expression by knockdown and overexpression.Additionally,Twist1 could induce proliferation,invasion and EMT in gastric cancer;of these,FGFR2 was required for invasion and EMT,rather than proliferation.CONCLUSION:Twist1 and FGFR2 are highly associated with differentiation of gastric adenocarcinoma;Twist1 can facilitate invasion and EMT in gastric adenocarcinoma via promotion of FGFR2 expression.

基于NF-κB/Twist 1通路二甲双胍对GDM大鼠子代胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞EMT的作用机制

目的探讨二甲双胍(Met)对妊娠糖尿病(GDM)大鼠子代胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞上皮间质转化(EMT)的作用及其机制。方法将SD孕鼠随机分为正常组(Normal组)和GDM组。GDM组孕鼠采用高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素(STZ)建立GDM模型,测定空腹血糖水平(FBG)。无菌条件下取胎鼠肺组织,分离肺泡上皮细胞,不同浓度Met处理细胞48 h,MTT法检测细胞存活率。将肺泡上皮细胞随机分为对照组(Control组)、GDM组和Met组,Met组细胞用80μmol/L Met处理48 h,Control组和GDM组细胞不做处理。Transwell实验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR检测细胞中上皮钙粘蛋白(E-cad)、神经钙粘蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vimentin)mRNA相对表达量,蛋白印迹法检测磷酸化核因子-κB(NF-κB)和Twist1蛋白相对表达量。结果GDM组孕鼠的FBG水平明显高于Normal组(P<0.05);细胞存活率随Met浓度的增加而降低,且具有剂量依赖性(P<0.05);与Control组比较,GDM组侵袭细胞数、N-cad、Vimentin mRNA相对表达量以及p-NF-κB p65和Twist1蛋白相对表达量升高,E-cad mRNA相对表达量降低(P<0.05);与GDM组比较,Met组侵袭细胞数、N-cad、Vimentin mRNA相对表达量及p-NF-κB p65和Twist1蛋白相对表达量降低,E-cad mRNA相对表达量升高(P<0.05)。结论Met可抑制GDM大鼠子代胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞EMT过程,其可能是通过抑制NF-κB/Twist1信号通路发挥作用。

TFF3依赖TWIST1上调TRIB3促结直肠癌转移的机制

目的探讨TFF3基因过表达对结直肠癌HT29细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,以及与癌转移相关的机制。方法构建TFF3过表达的HT29细胞系,qRT-PCR和Western blot法检测TFF3、TWIST1/TRIB3信号通路及上皮间质转化过程中相关mRNA和蛋白的表达,CCK-8法检测HT29细胞增殖能力,细胞划痕实验和Transwell实验评估细胞迁移和侵袭能力,透射电子显微镜观察TFF3过表达前后细胞形态的变化。结果pIRES2-TFF3质粒转染HT29细胞后,相较于对照组,TFF3 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01),细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增强(P<0.01),且TWIST1、TRIB3、Vimentin、Snail的表达也显著上升,而E-cadherin的表达则明显下降(P<0.05)。TFF3过表达后的HT29细胞出现了多种变化,如细胞间连接减少、绒毛脱落、伪足形成,以及形态上梭形细胞增多等。结论TFF3过表达可能通过Twist1/TRIB3信号通路促进结直肠癌细胞的EMT过程,从而提高其转移潜力,加速癌症的恶性进展。

子宫内膜癌组织CTGF、TWIST1、NCAPH的表达与临床病理特征及预后的关系

目的 探讨子宫内膜癌组织中结缔组织生长因子(CTGF)、TWIST1和非平滑肌细胞凝聚素Ⅰ复合亚单位H(NCAPH)蛋白的表达,以及与肿瘤临床病理特征及患者预后的关系。方法 回顾性分析2017年1月至2019年1月于南通大学附属海安医院行全子宫切除术140例患者的临床资料,其中术后病理证实为子宫内膜癌68例(子宫内膜癌组)、不典型增生42例(不典型增生组)和正常子宫内膜30例(正常组)。采用免疫组化染色法检测3组CTGF、TWIST1和NCAPH蛋白的阳性表达率,分析其与子宫内膜癌患者的肿瘤病理特征和预后的关系。结果 子宫内膜癌组CTGF、TWIST1和NCAPH蛋白的阳性表达率均明显高于不典型增生组和正常组,差异有统计学意义(P<0.05),而不典型增生组和正常组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。子宫内膜癌组CTGF、TWIST1和NCAPH蛋白的阳性表达率与患者年龄、肿瘤分化程度和病理类型无相关性(P>0.05),而与肿瘤临床分期、淋巴结转移和肿瘤肌层浸润深度密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,子宫内膜癌组CTGF、TWIST1和NCAPH阳性表达患者的累积总生存率均明显低于阴性表达患者(P<0.05)。单因素和多因素COX回归分析显示,国际妇产科联盟(FIGO)分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移阳性、CTGF、TWIST1和NCAPH阳性表达是患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论 子宫内膜癌患者组织CTGF、TWIST1和NCAPH表达上调可能与肿瘤发生和发展密切相关,三者可作为预测生存预后的重要生物标志物。

复方黄柏液激活Notch1/Twist1轴对皮肤溃疡大鼠伤口愈合的影响

目的:探究复方黄柏液对皮肤溃疡大鼠伤口愈合的影响及可能的作用机制。方法:构建皮肤溃疡大鼠模型,并随机分为模型组、复方黄柏液低、中、高剂量组(复方黄柏液L、M、H组)、红霉素软膏组,10只/组;另随机选取10只大鼠作为正常组。复方黄柏液L、M、H组分别给予2.5 ml、5 ml、10 ml复方黄柏液;红霉素软膏组使用棉签将红霉素软膏均匀涂抹在创面;模型组和正常组不给予药物处理。在给药0 d、3 d、7 d和14 d时分别拍照记录大鼠创面愈合情况,并计算创面愈合率。给药14 d时,通过HE、Masson染色法检测大鼠创面组织病理变化及胶原蛋白沉积情况;试剂盒检测创面组织中IL-1β、TNF-α、一氧化氮(NO)及转化生长因子-β(TGF-β)、羟脯氨酸水平;Western blot检测创面组织Notch1、Twist1蛋白表达情况。结果:给药7 d、14 d时,与模型组比较,复方黄柏液L、M、H组和红霉素软膏组大鼠创面愈合率明显提高(P<0.05),且给药14 d时大鼠炎症细胞浸润等现象明显获得改善,大鼠创面胶原蛋白沉积也明显增加。给药14 d时,与正常组比较,模型组大鼠创面组织中IL-1β、TNF-α、NO、羟脯氨酸、TGF-β水平明显升高(P<0.05),Notch1、Twist1蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,复方黄柏液L、M、H组和红霉素软膏组IL-1β、TNF-α、NO水平明显下降(P<0.05),羟脯氨酸、TGF-β水平及Notch1、Twist1蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:复方黄柏液能够通过激活Notch1/Twist1轴促进皮肤溃疡大鼠伤口愈合。

miR⁃32⁃5p通过调节Twist1抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-32-5p在甲状腺癌组织中的表达及其对甲状腺癌细胞生物学行为的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测甲状腺癌组织和对应癌旁组织中miR-32-5p的表达水平,筛选miR-32-5p高表达的甲状腺癌细胞系TPC-1细胞和低表达的甲状腺癌细胞系KTC-1细胞。采用miR-32-5p inhibitor转染TPC-1细胞(inhibitor-miR-32-5p)和miR-32-5p mimics转染KTC-1细胞(mimics-miR-32-5p),另分别转染无关系列作为阴性对照(inhibitor-NC和mimics-NC)。使用平板克隆形成、CCK-8法检测各组细胞增殖能力,划痕实验、Transwell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting检测各组细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达水平。采用荧光素酶报告基因测定Twist1与miR-32-5p的关系;利用转染法分别上调mimics-miR-32-5p-KTC-1细胞及沉默inhibitor-miR-32-5p-TPC-1细胞中Twist1的表达,并检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力和EMT相关蛋白的表达水平。结果甲状腺癌组织中的miR-32-5p水平显著低于对应癌旁组织(P<005)。甲状腺癌细胞系中miR-32-5p的表达水平也显著低于正常HTORI-3细胞系,其中TPC-1细胞miR-32-5p表达水平最高,KTC-1细胞miR-32-5p表达水平最低。过表达miR-32-5p后KTC-1细胞96 h的增殖活性、克隆形成能力、细胞迁移及侵袭能力下降,细胞凋亡率上升(P<005),同时EMT标志物E-cadherin表达升高,N-cadherin、Fibronectin、Snail和Vimentin的表达水平下降(P<005)。敲低miR-32-5p后TPC-1细胞96 h的增殖活性、克隆形成能力、细胞迁移及侵袭能力升高,细胞凋亡率下降(P<005),同时EMT标志物E-cadherin表达下降,N-cadherin、Fibronectin、Snail和Vimentin的表达水平上升(P<005)。miR-32-5p可抑制野生型Twist1-3′-UTR的荧光素酶活性(P<005),而对突变型Twist1-3′-UTR的荧光素酶活性无影响(P>005)。通过RNA干扰Twist1后功能学实验验证发现,上调Twist1后可回复miR-32-5p过表达对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的抑制,沉默Twist1后可回复miR-32-5p低表达对细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的增强。Western blotting检测结果显示,上调或下调Twist1均可回复miR-32-5p对EMT过程的调控作用。结论miR-32-5p通过靶向Twist1在甲状腺癌中作为肿瘤抑制因子抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

FAK/Twist1信号通路在颅缝闭合过程中的作用机制研究

目的探究FAK/Twist1信号通路在颅缝闭合过程中的作用。方法将10 d大鼠分为对照组(50只)和颅缝旋转组(50只),以大鼠人字缝中点为中心,直径约0.5 cm做一骨窗,将骨瓣在不损伤硬脑膜的情况下游离,对照组骨瓣原位复位,旋转组骨瓣旋转180°后复位,两组大鼠3周后进行实验。旷场试验测试行为学,测量两组体质量、头围、骨瓣面积、骨瓣厚度等生理学指标,显微镜及HE染色观察颅缝闭合情况,Western blot、Real time PCR、免疫组化染色测定骨瓣及骨瓣下硬脑膜FAK/Twist1通过表达情况。结果旋转组骨瓣厚度大于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),头围、体质量、骨瓣面积、术区面积无明显差异;显微镜下及HE染色中结果显示:旋转组颅缝完全闭合,对照组颅缝保持正常形态;行为学试验结果显示,颅缝闭合后大鼠行动能力下降且出现抑郁倾向;Western blot、Real time PCR、免疫组化染色显示:旋转组FAK在颅骨和硬脑膜中表达量均高于对照组且差异有统计学意义(P<0.05),旋转组Twist1在硬脑膜中表达量低于对照组且差异有统计学意义(P<0.05),在颅骨中两组Twist1表达量相近,差异无统计学意义。结论颅缝旋转后可以导致颅缝早闭,并会出现行动能力下降等行为学异常,FAK/Twist1可能在颅缝闭合过程中发挥着重要作用。

Twist1调控Bmi1对胆囊癌细胞侵袭迁移的影响及其机制研究

目的 探讨Twist1对胆囊癌细胞侵袭转移的影响,以及对Bmi1、E-Cadherine、N-Cadherine的调控作用。方法 构建Twist1 shRNA慢病毒载体感染GBC-SD细胞做为实验组,空载慢病毒感染GBC-SD细胞为阴性对照组,不做任何处理的GBC-SD细胞为空白对照组。细胞划痕及Transwell侵袭小室实验检测细胞的迁移及侵袭能力,Western blot及RT-PCR检测Twist1、Bmi1、E-Cadherine及N-Cadherine的蛋白及mRNA的相对表达量。结果 与阴性组、空白组相比,实验组细胞划痕愈合度低、侵袭数少(P <0.000 1),而阴性组及空白组间细胞迁移率、侵袭数比较差异均无统计学意义(P> 0.05)。阴性组及空白组的Twist1、Bmi1、NCadherine的蛋白及mRNA的相对表达量明显高于实验组(P <0.001),而E-Cadherine蛋白及mRNA的相对表达量则明显低于实验组(P <0.000 1),阴性组及空白组组间各蛋白及mRNA的相对表达水平比较差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 靶向沉默Twist1可以抑制胆囊癌细胞的迁移侵袭,其机制可能与抑制Bmi1的表达及抑制上皮间质转化过程相关。

子宫内膜癌CTGF、TWIST1和NCAPH表达与肿瘤病理特征及临床预后的关系探讨

目的:探讨子宫内膜癌(EC)组织中结缔组织生长因子(CTGF)、转录因子相关蛋白(TWIST1)和非平滑肌细胞凝聚素Ⅰ复合亚单位H(NCAPH)蛋白的表达与肿瘤病理特征以及患者临床预后的关系。方法:回顾性总结2020年1月—2022年1月因子宫内膜病变于烟台市烟台山医院行全子宫切除术患者110例,术后病理证实为EC68例(其中I期18例,Ⅱ期20例,Ⅲ期22例,IV期8例),不典型增生(AH)42例。另有30例患者因异常子宫出血,药物治疗不能有效控制行全子宫切除术,术后病理证实为正常子宫内膜(NE)作为对照组。采用免疫组化染色法检测三组CTGF、TWIST1和NCAPH蛋白的阳性表达率,分析它们与EC患者肿瘤病理特征和生存预后的关系。结果:EC组CTGF、TWIST1和NCAPH蛋白的阳性表达率高于AH组和NE组,差异有统计学意义(P<0.05);但AH组和NE组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。EC组CTGF、TWIST1和NCAPH蛋白阳性表达与患者年龄、肿瘤分化程度和病理类型无关,差异无统计学意义(P>0.05);而与肿瘤临床分期、淋巴结转移和肿瘤肌层浸润深度密切相关(P<0.05)。单因素和多因素Cox回归分析显示,FIGO分期Ⅲ~Ⅳ、淋巴结转移阳性、CTGF、TWIST1和NCAPH阳性表达是患者死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论:EC患者组织CTGF、TWIST1和NCAPH表达率上升可能与肿瘤发生和发展密切相关,可作为预测生存不良的重要生化标志物。

转录因子TWIST1干扰神经发生对睡眠剥夺小鼠抑郁样行为的影响

目的探究转录因子TWIST1对睡眠剥夺诱发抑郁样行为小鼠神经发生的影响。方法将小鼠随机分为对照(Con)组,对照+LV-sh TWIST1(Con+LV-sh TWIST1)组,睡眠剥夺(SD)组,睡眠剥夺+LV-sh TWIST1(SD+LV-sh TWIST1)组。通过LV-shTWIST1降低小鼠脑组织中TWIST1表达,采用睡眠剥夺构建小鼠抑郁症模型,连续7 d,期间每天腹腔注射50 mg/kg BrdU溶液。通过糖水偏好测试、悬尾测试、强迫游泳测试与旷场测试检测小鼠抑郁样症状,Morris水迷宫检测小鼠学习、记忆能力,Western blot检测神经发生相关蛋白表达,电生理测试检测突触可塑性,免疫荧光检测神经发生情况。结果与Con组比较,SD组小鼠糖水偏好率与旷场测试评分明显减少(P<0.05),悬尾与游泳不动时间明显增加(P<0.05),Morris水迷宫中首次到达平台时间明显增加(P<0.05)。然而,与SD组比较,SD+LV-shTWIST1组糖水偏好率与旷场测试评分明显增加(P<0.05),悬尾与游泳不动时间明显减少(P<0.05),Morris水迷宫中首次到达平台时间明显减少(P<0.05)。此外,Western blot检测TWIST1表达明显降低的同时Wnt3a与β-catenin蛋白表达明显增加,与此同时,fEPSP斜率明显升高且BrdU阳性细胞数明显增加。结论睡眠剥夺造成的小鼠抑郁样行为与脑组织中TWIST1表达升高相关,通过降低TWIST1表达能够激活Wnt3a/β-catenin信号通路,促进神经发生,达到改善小鼠抑郁样行为的作用。

XBP1、Twist1、VEGF在人脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨X盒结合蛋白1(XBP1)、Twist相关蛋白1(Twist1)、血管内皮生长因子(VEGF)在人脑胶质瘤中的表达及临床意义。方法选取2018年9月至2020年6月南阳市第二人民医院保存的50份脑胶质瘤组织作为研究对象,其中男性28例,女性22例,年龄(37.66±5.66)岁,根据预后将其分为生存组和死亡组。同时选取40份正常脑组织作为对照组,男性24例,女性16例,年龄(37.75±7.68)岁。检测各组组织XBP1、Twist1、VEGF阳性表达;分析其与临床病理特征的相关性;采用logistic回归分析影响患者预后的危险因素;Kaplan-Meier进行生存分析。结果与对照组相比,生存组和死亡组XBP1、Twist1、VEGF阳性表达均较高(χ^(2)=57.270、55.350、55.589,均P<0.05);XBP1、Twist1、VEGF与患者组织分化(χ^(2)=6.349、10.938、8.140,P=0.012、0.001、0.004)、临床分期(χ^(2)=4.504、8.295、6.062,P=0.034、0.004、0.014)以及Karnofsky功能状态评分(χ^(2)=8.333、4.688、6.527,P=0.004、0.067、0.011)有显著相关性;XBP1、Twist1、VEGF均是影响患者预后的危险因素(均P<0.05);与XBP1、Twist1、VEGF阴性表达相比,阳性表达患者的生存时间较短,均P<0.05。结论XBP1、Twist1、VEGF与脑胶质瘤患者临床病理特征、预后及生存有一定的相关性。

白杨素调控NF-κB/Twist 1信号通路抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化的机制研究

研究白杨素(ChR)是否通过影响核转录因子κB(NF-κB)/Twist 1信号通路,进而抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)而产生抗肺纤维化作用。动物实验设对照组、博莱霉素组(BLC)、BLC+ChR(50 mg·kg^(-1))和BLC+ChR(100 mg·kg^(-1))剂量组,每组动物15只。气管注射BLC(7500 U·kg^(-1))诱导肺纤维化大鼠模型,造模后连续灌胃给药28 d。细胞实验设对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)(5 ng·mL^(-1))组、TGF-β1+ChR(1,10,100μmol·L^(-1))组,Ⅱ型肺泡上皮细胞先用TGF-β1处理24 h,再用TGF-β1和(或)不同剂量ChR处理48 h。肺组织病理变化和胶原沉积情况分别采用HE染色、Masson染色和免疫组化法进行观察。肺组织和细胞内Ⅰ型胶原(collagenⅠ)、E钙粘蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、核转录因子κB抑制因子α(IκBα)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-p65)和Twist 1 mRNA及蛋白表达分别采用qPCR和(或)Western blot法检测。动物实验结果显示,与BLC组相比,ChR给药28 d后,大鼠肺纤维化程度明显减轻;肺组织collagenⅠ表达明显下降(P<0.05或P<0.01);肺组织肺泡上皮细胞EMT程度明显受到抑制[ZO-1和E-cadherin的表达明显升高,α-SMA和vimentin的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)];肺组织细胞浆内IκBα和p65磷酸化水平、胞核内NF-κB p65和Twist 1的表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果表明,不同剂量ChR能够明显减轻TGF-β1诱导的collagenⅠ的表达(P<0.05或P<0.01),显著抑制细胞EMT[E-cadherin和ZO-1的表达明显升高,vimentin和α-SMA的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)],同时能够明显抑制TGF-β1诱导的细胞浆内IκBα和p65磷酸化水平并降低细胞核内NF-κB p65和Twist 1的表达(P<0.05或P<0.01)。综上结果推测ChR能够逆转肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT、缓解肺纤维化,其机制可能与其降低细胞内IκBα磷酸化水平、抑制NF-κB p65的磷酸化和其核转移,进而下调Twist 1的表达有关。

TGF-β1诱导结肠癌细胞SW480发生上皮-间质转化及对Twist1表达的影响

目的探讨TGF-β1诱导结肠癌细胞SW480发生上皮-间质转化(EMT)及对Twist1表达的影响。方法采用10 ng/ml的TGF-β1作用结肠癌细胞SW480 72 h,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;细胞划痕实验检测细胞体外迁移能力;细胞免疫荧光、Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测E-cadherin、Vimentin及Twist1的蛋白和mRNA表达。结果经TGF-β1诱导72 h后,SW480细胞呈典型间质型细胞形态,且细胞的迁移能力明显增强(P<0.05);E-cadherin蛋白及mRNA表达显著下降,Vimentin、Twist1蛋白及mRNA表达水平均明显增加(P<0.05)。结论 TGF-β1诱导结肠癌细胞SW480发生上皮间质转化时可促进Twist1的表达。

食管鳞癌组织中Twist1的表达及其临床意义

目的探讨转录因子Twist1基因在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组化EnVision法检测Twist1基因在164例食管鳞癌中的表达,分析Twist1基因表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结及远处转移、肿瘤分化程度、临床分期及生存率等临床病理学特征之间的关系。结果 Twist1在食管鳞癌组织中主要表达于癌周边间质纤维细胞,部分表达于癌细胞。食管鳞癌间质细胞中Twist1在T1期和临床分期Ⅰ期中的表达明显低于其他分期(P均<0.05),有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P<0.05),死亡组高于生存组(P<0.05);Twist1在食管鳞癌间质细胞中的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、有无远处转移和肿瘤复发均无关(P>0.05)。食管鳞癌细胞中Twist1表达在死亡组明显高于生存组(P<0.001),复发组明显高于未复发组(P<0.001);Twist1在食管鳞癌细胞中表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、TNM分期均无关(P>0.05)。结论检测Twist1在食管鳞癌中的表达可成为判定食管鳞癌患者预后的重要辅助参考指标。

Twist1在恶性血液肿瘤中的研究进展

Twist是编码碱性螺旋-环-螺旋（helix-loop-helix,HLH）DNA结构域的转录因子。Twist家族包括Twist1和Twist2两种基因,通常指Twist即为Twist1。尽管Twist1在癌发生及上皮-间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）中的作用研究较多。

Twist1在乳头状甲状腺癌中的表达及意义

目的:检测Twist1在乳头状甲状腺癌组织及细胞中的表达情况,并探讨其与乳头状甲状腺癌的临床病理因素和生物学行为的关系。方法:研究应用免疫组织化学方法检测120例乳头状甲状腺癌组织中Twist1的表达。体外细胞研究构建靶向Twist1的shRNA真核表达质粒,转染乳头状甲状腺癌细胞,采用MTT法检测细胞转染前后增殖能力变化,通过Boyden小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估甲状腺癌细胞株体外侵袭能力的变化;同时检测细胞间连接及黏附相关蛋白E-cadherin、Vimentin等的表达情况。结果:免疫组化结果显示,Twist1在乳头状甲状腺癌中的表达水平与肿瘤的淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与其他临床病理因素(如临床分期、分化程度等)没有明显相关性。RNA干扰使乳头状甲状腺癌细胞株IHH-4中Twist1的表达下调;与阴性对照组比较,Twist1蛋白表达分别降低了50%(KD-A)、60%(KD-B)和64%(KD-C)。且E-cadherin表达上调,Vimentin表达下调。结论:Twist1在人乳头状甲状腺癌中表达上调,与肿瘤的淋巴结转移相关。针对Twist1的shRNA真核表达载体能明显抑制乳头状甲状腺癌细胞的Twist1表达,并有效抑制乳头状甲状腺癌细胞的体外侵袭能力。Twist1可能通过调控乳头状甲状腺癌的上皮-间质转化过程来影响其局部浸润及淋巴结转移。

Twist和HIF-1α在乳腺癌中的表达及其相关性

目的:探讨Twist和HIF-1α蛋白在乳腺癌组织中表达及其相关性。方法:应用免疫组织化学法检测60例乳腺癌组织Twist、HIF-1α蛋白表达情况。结果:乳腺癌组织中Twist阳性表达为56.7%(34/60),HIF-1α阳性表达为68.3%(41/60),在乳腺癌组织中Twist、HIF-1α蛋白的表达之间存在显著正相关,r=0.518,P<0.01。结论:乳腺癌组织中存在Twist、HIF-1α蛋白的高表达,且两者间具相关性。HIF-1α蛋白可能通过上调Twist表达,成为其促进乳腺癌浸润、转移的可能途径之一。

Twist1、VE-cadherin和血管生成拟态在子宫内膜样腺癌侵袭转移中的作用及意义

目的探讨子宫内膜样腺癌中Twist1、VE-cadherin和血管生成拟态(VM)的表达以及与肿瘤侵袭转移的关系。方法采用免疫组化方法,结合组织芯片技术,检测124例子宫内膜样腺癌、28例不典型增生内膜、35例正常内膜组织中Twist1、VE-cadherin和VM的表达水平,分析三者与临床病理因素的关系及相关性。结果子宫内膜样腺癌组织中Twist1、VE-cadherin和VM的表达率分别为56.5%、48.4%、16.9%,与正常内膜和不典型增生内膜相比,差异均显著(P<0.01)。Twist1表达与病理分级、肌层浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.05)。VE-cadherin和VM与肿瘤肌层浸润和淋巴结转移显著相关(P<0.01)。子宫内膜样腺癌中VE-cadherin表达分别与Twist1和VM呈正相关趋势(r=0.232,P=0.010;r=0.251,P=0.005)。结论 Twist1、VE-cadherin和VM参与子宫内膜样腺癌的发生、发展过程,三者联合检测可能对肿瘤的进展及预后判断有重要意义。