TWIST1通过激活自噬促进肺动脉高压大鼠模型肺血管重塑作用及机制的实验研究

目的探讨Twist相关蛋白1(Twist-related protein 1,TWIST1)对野百合碱(Monocrotaline,MCT)诱导的肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)大鼠肺血管重塑的影响及机制。方法将50只健康雄性SD大鼠,随机分为5组,即对照组、模型组、二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)溶剂处理的模型组、TWIST1抑制剂Harmine组、自噬抑制剂羟氯喹组。检测右心室收缩压(RVSP),右心室肥厚指数(RVHI)和内膜厚度百分比(MT%)以评估大鼠PAH的发展。采用免疫印迹法检测TWIST1,自噬相关蛋白LC3B以及RND3的蛋白质水平。结果与对照组比较,MCT诱导的PAH大鼠中TWIST1和LC3B表达增加,分别为对照组的2.32±0.22倍和0.87±0.19倍,差异具有统计学意义(t=15.812,11.227,均P<0.001);同时RND3表达下调,为对照组的0.32±0.07倍,差异具有统计学意义(t=-13.003,P<0.001)。给与TWIST1抑制剂Harmine或自噬抑制剂羟氯喹可显著抑制MCT诱导的自噬激活和RND3表达下调,同时降低了MCT诱导的PAH大鼠的RVSP,RVHI和MT%,差异具有统计学意义(t=-24.277~16.636,均P<0.001)。结论TWIST1通过诱导自噬激活促进肺血管重塑,促进PAH的发生发展。

miR-214靶向TWIST1对子宫内膜癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化的影响

目的:探讨微小RNA(miR)-214靶向Twist相关蛋白1(TWIST1)对子宫内膜癌HEC-1A细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响。方法:将miR-214模拟物(mimics)转染至HEC-1A细胞后,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-214和TWIST1 mRNA表达;双荧光素酶报告基因实验检测miR-214和TWIST1靶向关系;将体外培养的HEC-1A细胞分为Blank组、miR-214 mimics组、pcDNA-TWIST1组和miR-214 mimics+pcDNA-TWIST1组,免疫印迹法检测细胞中TWIST1、钙粘附蛋白E(E-cadherin)、N-钙粘附分子(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭。结果:转染miR-214 mimics使HEC-1A细胞中miR-214表达升高,TWIST1 mRNA表达降低;miR-214可直接靶向结合TWIST1。与Blank组比较,miR-214 mimics组细胞中TWIST1、N-cadherin、Vimentin蛋白和划痕愈合率以及侵袭细胞数均降低,E-cadherin蛋白表达升高,而pcDNA-TWIST1组细胞中TWIST1、N-cadherin、Vimentin蛋白和划痕愈合率以及侵袭细胞数均升高,而E-cadherin蛋白表达降低(均P<0.05)。与pcDNA-TWIST1组比较,miR-214 mimics+pcDNA-TWIST1组细胞中TWIST1、N-cadherin、Vimentin蛋白表达和划痕愈合率以及侵袭细胞数均降低,E-cadherin蛋白表达升高(均P<0.05)。结论:miR-214可通过靶向调控TWIST1抑制子宫内膜癌HEC-1A细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化。

TWIST2通过调控FGF21介导的AMPK/mTOR通路诱导卵巢癌细胞氧化应激和凋亡

目的探究TWIST2对卵巢癌细胞氧化应激和凋亡的作用及相关机制。方法收集2018年6月至2019年10月在山东省妇幼保健院进行治疗的30例卵巢癌患者的癌组织和癌旁组织,将pcDNA3.1-TWIST2质粒(TWIST2组)和pcDNA3.1阴性对照质粒(阴性对照组)分别转染卵巢癌细胞(SK-OV-3和HO-8910),未转染质粒组为空白对照组。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹(Western blot)实验检测组织和细胞中TWIST2 mRNA和蛋白质的表达量;细胞计数试剂盒CCK-8检测TWIST2组、阴性对照组和空白对照组的细胞活力;Western blot实验检测3组的凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Bcl-2,AMPK/mTOR通路相关蛋白FGF21、p-AMPK和p-mTOR的蛋白表达水平;试剂盒检测3组活性氧(ROS)基因、ATP的水平和超氧化物歧化酶(SOD)的酶活性。通过检测不同处理组的细胞凋亡率和ROS水平,研究TWIST2与FGF21的相互作用。结果TWIST2在卵巢癌组织和卵巢癌细胞中的表达量显著低于癌旁组织和正常卵巢上皮细胞的表达量(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,TWIST2组的细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著提高(P<0.05);ROS的水平显著升高,SOD酶活力、ATP水平、NAD~+/NADH水平显著降低(P<0.05)。TWIST2可以抑制FGF21、p-AMPK、p-mTOR蛋白的表达(P<0.05);在TWIST2组中加入FGF21或AMPK激动剂时,p-AMPK、p-mTOR蛋白表达水平显著升高,卵巢癌细胞的凋亡率和ROS水平显著降低(P<0.05),TWIST2与FGF21的表达量呈负相关(r=-0.6254,P<0.01)。结论TWIST2能够促进卵巢癌细胞氧化应激和凋亡,其作用机制是通过调控FGF21介导的AMPK/mTOR通路来实现的。

miR-10b、LMP1和Twist1联合检测在鼻咽癌早期诊断及复发诊断中的应用

目的探究血清miR-10b、潜伏膜蛋白1(LMP1)和Twist相关蛋白1(Twist1)联合检测在鼻咽癌早期诊断及复发诊断中的应用价值。方法选取2018年6月至2019年12月期间于郑州颐和医院行各项检查的82例疑似鼻咽癌受检者临床资料,根据后续实际诊断结果分为确诊组51例与未确诊组31例,比较两组血清miR-10b、LMP1 mRNA、Twist1 mRNA水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估上述指标单独对鼻咽癌的早期诊断效能及联合诊断效能。将确诊组根据后续实际复发情况分为复发组23例与未复发组28例,比较两组血清miR-10b、LMP1 mRNA、Twist1 mRNA水平,采用ROC曲线评估上述指标单独对鼻咽癌复发的诊断效能及联合诊断效能。结果确诊组血清miR-10b、LMP1 mRNA、Twist1 mRNA水平均显著高于未确诊组,差异均有统计学意义(P<0.05)。上述指标早期诊断鼻咽癌的ROC曲线AUC分别为0.842、0.860、0.910,三者联合诊断AUC为0.978(P<0.05)。复发组血清miR-10b、LMP1 mRNA、Twist1 mRNA水平显著高于未复发组,差异均有统计学意义(P<0.05)。上述指标诊断鼻咽癌复发的ROC曲线AUC分别为0.804、0.818、0.733,三者联合诊断AUC为0.932(P<0.05)。结论血清miR-10b、LMP1、Twist1水平在鼻咽癌早期诊断及复发诊断中均具有良好效能,三者联合应用诊断效能更佳,可用于鼻咽癌患者病情监测。