丹参酮Ⅱ_A对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响

目的:通过观察丹参酮ⅡA(TSN)对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖及Ⅰ型胶原合成的影响,探讨其抗心肌纤维化的作用机制。方法:差速贴壁法提取原代CFs,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,ELISA法检测Ⅰ型胶原合成,RT-PCR法半定量检测Ⅰ胶原mRNA表达。结果:①AngⅡ组OD值高于空白对照组,两者比较有显著性差异(P<0.01);AngⅡ+TSN组OD值低于AngⅡ组,两者比较有显著性差异(P<0.01)。②AngⅡ组有促进心肌成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原的作用,与空白对照组比较,有显著性差异(P<0.01);AngⅡ+TSN组Ⅰ型胶原含量低于AngⅡ组,两者比较,有显著性差异(P<0.01)。③AngⅡ组Ⅰ型胶原mRNA表达高于空白对照组,两者比较有显著性差异(P<0.05);AngⅡ+TSN组Ⅰ型胶原mRNA表达低于AngⅡ组,两者比较有显著性差异(P<0.05)。结论:AngⅡ可直接诱导CFs的增殖,促进其分泌Ⅰ型胶原,并能显著增加Ⅰ型胶原mRNA的表达;TSN对AngⅡ诱导的CFs增殖及Ⅰ型胶原分泌增加,及Ⅰ型胶原mRNA表达增强均有抑制作用。提示:TSN抗心肌纤维化作用的产生可能与丹参酮ⅡA抑制心脏局部的RAS系统有关。

髁突骨上组织改建中Ⅰ、Ⅱ型胶原的免疫组织化学研究

目的 :研究髁突骨上组织改建中Ⅰ、Ⅱ型胶原的变化特征 ,增加对颞颌关节改建的进一步认识。方法 :用免疫组织化学的方法检测拔除成年家兔左侧下颌磨牙后 2周、1月和 3月时Ⅰ、Ⅱ型胶原分布及含量的变化。结果 :术后 2周Ⅰ、Ⅱ型胶原的表达均明显减少 ,1月和 3月其表达有所回升 ,并且Ⅰ型胶原出现不均衡分布 ;拔牙侧与非拔牙侧相比 ,前者Ⅰ型胶原的表达较后者稍强 ,而Ⅱ型胶原的表达则较弱。结论 :成年家兔颞颌关节的改建能力有限 ,超过一定限度时 ,细胞合成及分泌Ⅰ、Ⅱ型胶原的能力发生改变 ,使纤维软骨的抗压性和弹性下降。

骨关节炎软骨中Ⅰ型和Ⅱ型胶原的分布

目的 :研究骨关节炎软骨中Ⅰ型和Ⅱ型胶原的分布。方法 :从正常关节软骨和骨关节炎软骨上取样本做切片。所有样本行HE、蕃红 0染色及Ⅰ型和Ⅱ型胶原免疫组化。结果 :骨关节炎软骨中Ⅱ型胶原免疫组化染色不均匀。Ⅰ型胶原染色 ,在表层和中层的部分区域有不规则着色。纤维样组织中 ,Ⅰ型胶原免疫组化呈阳性 ,Ⅱ型胶原免疫组化不着色。结论 :骨关节软骨基质中Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的破坏增强与软骨细胞对其合成增强同时存在 ,软骨修复的过程中 ,部分软骨细胞发生去分化 。

复元胶囊对大鼠膝骨关节炎软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白多糖的影响

目的观察复元胶囊对大鼠膝骨关节炎(OA)软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白多糖的影响,探讨其保护关节软骨的作用机理。方法采用Hulth法建立OA模型,随机分为6组:正常组、模型组、四环素组及复元胶囊低、中、高剂量组。各药物组分别给不同剂量药物灌胃每天1次,持续12周。免疫组化检测软骨Ⅰ、Ⅱ型胶原表达,甲苯胺蓝染色软骨蛋白多糖含量。结果复元胶囊各组软骨Ⅱ型胶原及蛋白多糖显著高于模型组(P<0.01),而Ⅰ型胶原低于模型组(P<0.05)。结论复元胶囊能增加大鼠膝骨关节炎软骨中Ⅱ型胶原表达及蛋白多糖水平,同时降低Ⅰ型胶原表达,对维持正常胶原表型、保护关节软骨有一定的作用。

烟酰胺对椎间盘Ⅰ、Ⅱ型胶原的调控作用

目的:考察烟酰胺对白介素-1β诱导的体外兔腰椎间盘退变模型中Ⅰ、Ⅱ型胶原的保护作用,并初步探讨其机制。方法:构建兔腰椎间盘组织凝胶培养模型,将其分为正常对照组,烟酰胺对照组(加入0.5mg/ml烟酰胺),退变组(加入10ng/mlIL-1β)和3个烟酰胺治疗组(加入IL-1β的同时,并分别加入0.5mg/ml,0.25mg/ml和0.05mg/ml烟酰胺)。培养3天及1周时取各组髓核和纤维环分别行Ⅰ、Ⅱ型胶原基因RT-PCR检测,培养2周时行Ⅰ、Ⅱ型胶原、iN-OS、TGF-β1及Caspase-3免疫组化检测。结果:①RT-PCR显示3天及1周时,各治疗组Ⅰ、Ⅱ型胶原表达均强于退变组,烟酰胺的保护作用随浓度增加而增强。②Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组化显示,各治疗组椎间盘正常结构和胶原含量均优于退变组,以大剂量烟酰胺治疗组最显著。③iNOS、Caspase-3免疫组化显示,治疗组阳性细胞染色率均低于退变组(P<0.01)。TGF-β1免疫组化显示,治疗组阳性细胞染色率高于退变组(P<0.01)。结论:烟酰胺能够抑制IL-1β诱发的椎间盘Ⅰ、Ⅱ型胶原表达及含量的下降,这种保护机制与其抑制iNOS、Caspase-3表达和维持TGF-β1表达的作用有关。

温和灸对大鼠颈椎间盘退变组织Ⅰ型、Ⅱ型胶原表达的影响

目的:观察温和灸对大鼠颈椎间盘退变组织Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原表达的影响。方法:采用动静力失衡性颈椎间盘退变模型,运用原位杂交技术观察温和灸天柱穴、大杼穴对大鼠颈椎间盘组织Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原表达的影响,并设假手术组、芬必得组、模型对照组。结果:对大鼠颈椎间盘组织内的Ⅰ型胶原蛋白表达,假手术组与其他各组之间比较有非常显著性差异(P<0.01);温和灸组、假手术组与模型组之间比较无显著性差异(P>0.05)。而对Ⅱ型胶原蛋白的表达,假手术组与其他各组之间比较有非常显著性差异(P<0.01);温和灸组与芬必得组、模型组之间比较有非常显著性差异(P<0.01,P<0.05)。结论:温和灸可以促进Ⅱ型胶原的合成,降低Ⅰ型/Ⅱ型胶原比值,从而增加颈椎间盘的抗牵拉能力,维持椎间盘正常的力学特性。

兔软骨细胞的分离及其与Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜共培养实验研究

目的探讨体外分离兔软骨细胞的方法并观察其与Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜共培养时的生物活性。方法取4周龄的新西兰大耳兔,处死后在无菌条件下取关节软骨。通过胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化软骨细胞。倒置相差显微镜下观察软骨细胞特点,制作细胞爬片行甲苯胺蓝染色。将第3代兔软骨细胞与Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜共培养,噻唑蓝(MTT)法和糖胺聚糖含量测定法检测软骨细胞在胶原膜上的细胞活性,扫描电镜观察软骨细胞在复合胶原膜上的生长情况。结果分离出的原代软骨细胞初为卵圆形,贴壁后变成三角形或多边形,可被甲苯胺蓝染色。软骨细胞在Ⅰ/Ⅱ型复合胶原膜上生长良好。结论两部酶法可获得大量软骨细胞,MTT法和扫描电镜证实软骨细胞可在复合胶原膜上正常扩增。

bFGF、IGF-Ⅰ对兔关节软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(insuline-likegrowthfactor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)单独及联合应用对体外培养多次传代的兔关节软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响,探讨传代多次的软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。方法:第3、5、7代体外培养的兔关节软骨细胞,以常规培养组作为对照组,bFGF(5ng/ml)或和IGF-Ⅰ(100ng/ml)单独刺激及联合刺激作为实验组,免疫组化法测定Ⅱ型胶原的定性表达,并通过图像分析作半定量分析。结果:对照组细胞第5代以后无阳性表达。第3、5、7代细胞在bFGF或IGF-Ⅰ刺激下,Ⅱ型胶原表达强度显著高于对照组(P<0.01);bFGF和IGF-Ⅰ联合作用下,Ⅱ型胶原表达强度均显著高于单独以bFGF或IGF-Ⅰ刺激组(P<0.05)。结论:bFGF、IGF-Ⅰ能促进多次传代软骨细胞Ⅱ型胶原的表达,且联合应用时促进作用更为明显。多次传代软骨细胞在生长因子刺激下,仍有再分化的能力,而有成为软骨组织工程种子细胞的可能。

针刺颈夹脊穴对大鼠退变颈椎间盘Ⅰ、Ⅱ型胶原及髓核超微结构的影响

目的观察针刺颈夹脊穴对大鼠退变颈椎间盘Ⅰ、Ⅱ型胶原及髓核超微结构的影响,探讨针刺治疗椎间盘退变的作用和机理。方法建立大鼠动静力失衡性颈椎间盘退变模型,随机分为对照组、针刺组、药物组,并设空白组对照,针刺组取颈部夹脊穴,药物组采用布洛芬加颈复康灌胃,治疗30d后,取部分椎间盘测Ⅰ、Ⅱ型胶原含量;取部分椎间盘在光镜和电镜下观察组织细胞学变化。结果与椎间盘退变正相关的Ⅰ型胶原含量测定,空白组少于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05),针刺组和药物组少于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);与椎间盘退变负相关的Ⅱ型胶原含量测定,空白组多于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05),针刺组和药物组多于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),其他组间比较无明显差异;光镜、电镜下椎间盘组织细胞学退变程度由轻至重顺序为空白组<针刺组<药物组<模型组;椎间盘胶原测定结果与镜下椎间盘组织细胞学退变程度相一致。结论针刺颈夹脊穴可以通过调控椎间盘细胞外基质胶原系统抑制椎间盘退变。

骨形态发生蛋白2对退变椎间盘组织学和Ⅰ,Ⅱ型胶原的影响

背景:研究表明,退变椎间盘细胞外基质的主要变化是Ⅱ型胶原和蛋白多糖含量的减少和Ⅰ型胶原含量的增加。目的:观察腺相关病毒介导的骨形态发生蛋白2基因(AAV-BMP-2)对兔退变腰椎间盘内髓核Ⅰ,Ⅱ型胶原的影响。方法:将12只新西兰大白兔L2-3,L3-4,L4-5,L5-6椎间盘针刺制造退变模型后随机分为3组,每组4只。其中AAV-BMP-2组兔椎间盘注射AAV-BMP-2,AAV组兔椎间盘注射不携带目的基因的空载体,生理盐水组兔椎间盘注射生理盐水,注射后第8周处死动物取其相应的椎间盘常规石蜡包埋,组织切片,以苏木精-伊红染色观察其髓核组织学变化,免疫组织化学法检测髓核组织Ⅰ型、Ⅱ型胶原表达并进行半定量分析。结果与结论:普通苏木精-伊红染色结果显示AAV-BMP-2组椎间盘内髓核细胞数目较多,呈单个或者簇状分布,髓核结构清晰,无纤维样组织填充。而AAV组和生理盐水组的组织结构相似,髓核内细胞数目少,髓核皱缩干瘪,细胞间为纤维样组织填充且排列紊乱。免疫组织化学染色显示:AAV-BMP-2组椎间盘髓核内Ⅱ型胶原的表达均高于AAV组和生理盐水组(P<0.05);AAV-BMP-2组椎间盘髓核内Ⅰ型胶原的表达均低于AAV组和生理盐水组(P<0.05)。结果说明,体内转染AAV-BMP-2能抑制椎间盘髓核细胞表达Ⅰ型胶原,促进椎间盘髓核细胞表达合成Ⅱ型胶原,提示维持椎间盘内胶原的含量、种类,可维持椎间盘内组织学的结构和形态,稳定髓核细胞生长环境,延缓椎间盘的退变。

加味温胆汤治疗自发性高血压大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及AngⅡ的影响

目的：本课题旨在探讨加味温胆汤与开博通（卡托普利）联用对自发性高血压大鼠（SHR）血压Ⅰ、Ⅲ型胶原及AngⅡ的影响。方法：将48只10周龄雄性SHR随机分为6组,分别为SHR对照组（SHR-K）、加味温胆汤高剂量和开博通联合用药组（ZX-H）、加味温胆汤中剂量和开博通联合用药组（ZX-M）、加味温胆汤低剂量和开博通联合用药组（ZX-L）、加味温胆汤中剂量组（Z）及开博通组（X）,每组8只,治疗8周后,测量大鼠尾动脉收缩压,观察Ⅰ、Ⅲ型胶原及AngII的改变。结果：加味温胆汤和开博通联用药治疗后,各剂量组大鼠收缩压均有所下降。加味温胆汤和开博通联用药高、中剂量组大鼠下降最明显（P〈0.01）,且降压效果优于加味温胆汤中剂量及开通博;各治疗组均可显著降低SHR大鼠左心室心肌组织胶原Ⅰ、Ⅲ型蛋白的表达,温胆汤和开博通联合用药组作用显著,明显优于纯中药组和西药开博通组;局部心肌AngⅡ与自然病程对照组相比,各药物治疗组均可明显降低局部心肌AngⅡ浓度（P〈0.05）,其中加味温胆汤大剂量与开博通联合用药组效果最佳,与自然病程对照组相比,各药物治疗组均可明显降低血浆AngⅡ浓度（P〈0.01~0.05）。其中加味温胆汤各剂量与开博通联合用药组作用相似,降低血AngⅡ最显著,均优于加味温胆汤与开博通单用组（P〈0.01~0.05）。结论：味温胆汤和开博通联合用药具有降压、降低左心室心肌组织胶原Ⅰ、Ⅲ型蛋白的表达及降低血浆和心肌肉组织中AngⅡ的浓度。

特发性脊柱侧凸椎间盘Ⅰ、Ⅱ型胶原表达的研究

目的:通过研究青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者椎间盘不同部位I、II型胶原表达的异常,总结胶原变化情况,探讨胶原代谢在脊柱侧凸发生发展中的作用。方法:取25例AIS患者经前路松解、骨骺阻滞或前路矫形手术切除之顶椎区的椎间盘,分纤维环的凹侧、凸侧两部分。其中取胸椎椎间盘(T8-11)11例,腰椎椎间盘(L1-2)14例。利用RT-PCR的方法逆转录合成I型胶原(220bp)和II型胶原(359bp),1%琼脂糖凝胶电泳,Gelwork图像分析系统进行半定量分析研究。结果:AIS患者顶椎区椎间盘纤维环I、II型胶原的表达凸侧较凹侧高(P<0.05)。腰椎表达较胸椎高,但除腰椎凹侧椎间盘纤维II型胶原的表达高于胸椎对应部位II型胶原的表达外(P<0.01),其余部位均无统计学差异。结论:AIS患者椎间盘纤维环的I、II型胶原的表达存在异常,且不同节段的表达存在差异。提示AIS患者的椎间盘发生变性,椎间盘胶原的代谢与AIS的发生密切相关,可能是导致AIS发生的原因之一,是脊柱侧凸进展的重要因素。

促红细胞生成素对血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞增殖及Ⅰ/Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响研究

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的系膜细胞增殖及Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响。方法将体外培养大鼠肾小球系膜细胞分为4组:对照组,AngⅡ组(0.1、1.0、10.0μmol/L),EPO组(1、10、100 U/L),AngⅡ+EPO组(EPO 1、10、100 U/L预处理1 h后加AngⅡ1.0μmol/L)。各组处理0、24、48 h时,CCK-8法检测系膜细胞增殖情况,免疫印迹法检测系膜细胞ColⅠ、ColⅣ和FN蛋白表达水平,ELISA法检测系膜细胞培养上清液中ColⅠ、ColⅣ和FN蛋白水平。结果单独给予AngⅡ或EPO均可刺激系膜细胞增殖,AngⅡ组亚组和EPO组亚组24、48 h时系膜细胞增殖水平均高于对照组,且48 h时高于24 h时,24 h时高于0 h时,差异均有统计学意义(P<0.05);单独给予AngⅡ或EPO均可促进系膜细胞合成及分泌ColⅠ、ColⅣ和FN,除EPO 1 U/L亚组ColⅠ蛋白表达水平与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)外,AngⅡ组亚组和EPO组其他亚组ColⅠ、ColⅣ和FN蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与AngⅡ1.0μmol/L+EPO 1 U/L亚组比较,AngⅡ1.0μmol/L+EPO 10 U/L亚组和AngⅡ1.0μmol/L+EPO 100 U/L亚组在24、48 h时系膜细胞增殖水平及ColⅠ、ColⅣ和FN蛋白表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05),但与对照组及同浓度单纯EPO亚组比较,AngⅡ1.0μmol/L+EPO组各亚组24、48 h时系膜细胞增殖水平及ColⅠ、ColⅣ和FN蛋白表达水平均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AngⅡ能刺激系膜细胞增殖,促进系膜细胞合成及分泌ColⅠ、ColⅣ和FN,EPO亦有一定程度类似作用,但两者同时存在时,EPO可拮抗AngⅡ诱导的系膜细胞增殖及ColⅠ、ColⅣ和FN的合成及分泌,提示EPO除可纠正肾性贫血外,可能对AngⅡ诱导的肾小球硬化具有抑制作用而保护肾功能。

定向结构Ⅰ/Ⅱ型胶原支架上兔软骨细胞生长增殖观察及新生组织生物力学检测

目的探讨采用定向结构Ⅰ/Ⅱ型胶原软骨支架复合软骨细胞体外构建生物力学性能更好的组织工程软骨。方法利用牛跟腱和猪软骨分别提取Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原并以超微量分光光度计测定其最大紫外吸收峰。利用快速冷冻自然真空冻干筛选成型法制备垂直定向微孔结构的Ⅰ/Ⅱ型胶原复合支架,同时采用普通冷冻干燥法制备非定向Ⅰ/Ⅱ型胶原复合支架。将兔软骨细胞分别接种在两组支架上,体外静态培养3 d后扫描电子显微镜下观察软骨细胞生长情况,MTT法测量两组支架体外静态培养14 d内细胞生长情况,通过测量第7天和第14天杨氏模量和抗拉强度检测两种新生组织工程软骨的生物力学性能。结果扫描电镜观察在两组支架上体外培养3 d后的软骨细胞生长情况良好;定向Ⅰ/Ⅱ型胶原复合支架上种子细胞在5~11 d内增殖速度高于非定向Ⅰ/Ⅱ型胶原复合支架,两者差异有统计学意义（P〈0.05）;定向结构Ⅰ/Ⅱ型胶原软骨支架的压缩弹性模量和抗拉强度高于非定向Ⅰ/Ⅱ型胶原软骨支架,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论定向结构Ⅰ/Ⅱ型胶原软骨支架能够在特定时间段内促进细胞增殖,与软骨细胞体外静态培养后能够成功生成具有定向纤维结构、生物力学性能更好的组织工程软骨,是有良好应用前景的组织工程软骨支架材料。

壳聚糖与Ⅰ型胶原制备组织工程复合支架材料的扫描电镜研究

【目的】通过扫描电镜观察壳聚糖和Ⅰ型胶原在不同温度下以不同比例制备成冻干状组织工程复合支架材料的微观结构,以获得最佳浓度、比例、温度匹配组合,制备理想的组织工程复合支架材料。【方法】在-5℃、-20℃和-80℃将不同浓度的壳聚糖、Ⅰ型胶原以及它们不同比例的混合液冷冻12h后冻干24h,扫描电镜观察不同材料表面和内部的微观结构,并计算其平均孔径和孔隙率。【结果】壳聚糖、Ⅰ型胶原以及它们的混合液冻干后都形成白色海绵状固体,冷冻温度越低冻干后材料的孔径越小,孔隙率越低;材料的浓度越高冻干后孔径越小,孔隙率越低;壳聚糖-Ⅰ型胶原混合液中壳聚糖含量越高,材料冻干后孔径越小,孔隙率越低。【结论】壳聚糖-Ⅰ型胶原复合支架的孔径和溶液浓度、二者配比以及冻干前的冷冻温度密切相关。

壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料的制备及其性能的研究

目的:探讨壳聚糖/I型胶原复合物作为软骨组织工程支架材料的物理性能和生物学特性。方法:将壳聚糖溶液与I型胶原溶液混合,梯度冷冻后通过冷冻干燥法制备成复合支架。以纯壳聚糖支架材料作为对照。扫描电镜检测支架材料的形貌,检测支架材料的孔径、孔隙率和吸水率。酶消化法培养滑膜细胞,将第3代滑膜细胞接种于支架材料中,检测滑膜细胞在支架材料中的粘附情况,并通过噻唑蓝(MTT)法检测支架材料对滑膜细胞增殖的影响。结果:制备的支架材料呈孔隙分布均匀的海绵状。支架材料的平均孔径为(119.32±38.67)μm,孔隙率为(91.40±1.41)%,吸水率为(69.10±5.61)水g/支架干重g。滑膜细胞在壳聚糖/Ⅰ型胶原支架材料中的粘附率为98.73%,并且该支架材料对滑膜细胞的增殖具有明显促进作用。结论:壳聚糖/Ⅰ型胶原支架材料可作为细胞载体应用于软骨组织工程。

黄芪甲苷对心肌成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响

目的:通过观察黄芪甲苷对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞(CFB)Ⅰ型胶原合成的影响,探讨其抗心肌纤维化的作用机制。方法:差速贴壁法提取原代CFB,采用ELISA法检测Ⅰ型胶原合成,RT-PCR法半定量检测Ⅰ胶原mRNA表达。结果:AngⅡ10-7mol/L有促进Ⅰ型胶原mRNA表达及心肌成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原的作用,与空白对照组比较,有显著性差异;Losartan10-6mol/L可降低AngⅡ引起的Ⅰ型胶原mRNA表达及分泌增加,两者比较有显著性差异;黄芪甲苷100μg/mL有降低AngⅡ引起Ⅰ型胶原mRNA表达及分泌增加的趋势,但无统计学意义,P>0.05。结论:AngⅡ可直接促进CFB分泌Ⅰ型胶原,并能显著增加Ⅰ型胶原mRNA的表达;黄芪甲苷对AngⅡ诱导的Ⅰ型胶原mRNA表达及分泌增加未见明显抑制作用。提示,黄芪甲苷抗心肌纤维化作用的产生可能不是通过直接抑制AngⅡ诱导的Ⅰ型胶原的合成增加来实现的。

丹参酮ⅡA抑制心肌细胞的纤维化

背景:转化生长因子β-Smads信号通路是心肌纤维化的关键通路;丹参酮ⅡA具有抑制心肌纤维化作用。目的:验证丹参酮ⅡA对转化生长因子β1致心肌纤维化的作用并探讨其机制。方法:取出生24h内的SD大鼠心脏,利用酶消化法结合差速贴壁体外培养心肌成纤维细胞。取上述第3代心肌成纤维细胞,用5μg/L转化生长因子β1培养15,30,60,120min或6,12,24h后收集细胞,用不同浓度(10-5mol/L、10-4mol/L)丹参酮ⅡA预处理2h后再加入5μg/L转化生长因子β1培养120min或24h后收集细胞,并设空白对照组。免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定,反转录聚合酶链反应检测结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达,Western Blot检测Smad7及磷酸化Smad3蛋白表达。免疫组织化学染色及免疫荧光法检测磷酸化Smad3、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原蛋白表达。结果与结论:转化生长因子β1在一定范围内以时间依赖方式诱导结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原、磷酸化Smad3及Smad7的表达,刺激终末结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原mRNA的表达量明显上升(均P<0.01);磷酸化Smad3及Smad7蛋白表达量在刺激后1h达到峰值,表达量显著增加(均P<0.01)。高浓度丹参酮ⅡA预处理可显著下调磷酸化Smad3、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原表达(均P<0.01)。两种浓度的丹参酮ⅡA预处理均可上调Smad7蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。提示丹参酮ⅡA对心肌纤维化有抑制作用,可能与其上调Smad7蛋白表达,抑制转化生长因子β1诱导的Smad3磷酸化,部分阻断转化生长因子β1-Smads信号通路有关。

狼疮肾炎鼠肾组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因表达和胶原沉积研究

目的 研究前胶原基因表达和胶原沉积与狼疮肾炎进展的关系。方法 狭线印迹杂交方法检测ＢＸＳＢ小鼠肾脏组织Ⅰ、Ⅲ型前胶原基Ｎ ｍＲＮＡ转录水平。斑点印迹法测定肾组织 Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积情况。结果狼疮肾炎发病较重的 ６月龄雄性 ＢＸＳＢ小鼠肾脏组织表达 Ⅰ、 Ⅲ型前胶原 ｍＲＮＡ的量显著增加（ Ｐ均＜ ０． ０５），分别为 ３月龄雄鼠肾脏表达量的３．２倍和１．５倍，肾内Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积较对照鼠显著增多（Ｐ分别＜０．０１）。结论Ⅰ、Ⅲ型前胶原ｍＲＮＡ的异位大量表达及Ⅰ、Ⅲ型胶原在肾脏沉积增加，是狼疮肾炎肾小球细胞外基质病理性积聚的重要原因，可能会引起肾小球结构和功能多方面的改变，在狼疮肾炎的进展和肾小球硬化的形成过程中起重要作用。

rhBMP-2和bFGF复合至壳聚糖-Ⅰ型胶原支架后在体外的降解和释放

目的:探讨rhBMP-2和bFGF复合至壳聚糖-Ⅰ型胶原支架材料后在体外的释放规律。方法:制备壳聚糖-Ⅰ型胶原支架及含rhBMP-2和bFGF的复合膜。扫描电镜观察测量支架孔径;体外观察降解情况,在不同时点收集浸出液,ELISA检测因子的释放浓度;观察浸出液对牙周膜细胞的影响。结果:复合膜呈疏松多孔海绵状,高、中、低3种壳聚糖-Ⅰ型胶原支架平均孔径分别为(106±17)μm、(141±13)μm和(173±11)μm;复合膜在含溶菌酶的PBS中可以降解,壳聚糖浓度越高支架降解越慢,rhBMP-2和bFGF的释放开始为"爆发性",此后释放逐渐减慢,最后在低浓度可缓慢而持久地释放,壳聚糖浓度越高的复合支架,因子释放越慢越持久。与含溶菌酶的PBS间接接触的因子层随着其表面支架的降解而逐渐释放因子,释放延迟时间和表面支架的降解速度有关。复合bFGF因子支架的浸出液作用于HPDLCs,可以明显促进细胞的增殖。结论:壳聚糖-Ⅰ型胶原复合因子支架体外可以降解并释放因子,降解和因子释放速度与壳聚糖的浓度密切相关;可以通过分层制作复合因子支架来控制因子有序释放,所释放的因子具有正常生物学功能。