丹参酮ⅡA抑制心肌细胞的纤维化

背景:转化生长因子β-Smads信号通路是心肌纤维化的关键通路;丹参酮ⅡA具有抑制心肌纤维化作用。目的:验证丹参酮ⅡA对转化生长因子β1致心肌纤维化的作用并探讨其机制。方法:取出生24h内的SD大鼠心脏,利用酶消化法结合差速贴壁体外培养心肌成纤维细胞。取上述第3代心肌成纤维细胞,用5μg/L转化生长因子β1培养15,30,60,120min或6,12,24h后收集细胞,用不同浓度(10-5mol/L、10-4mol/L)丹参酮ⅡA预处理2h后再加入5μg/L转化生长因子β1培养120min或24h后收集细胞,并设空白对照组。免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定,反转录聚合酶链反应检测结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达,Western Blot检测Smad7及磷酸化Smad3蛋白表达。免疫组织化学染色及免疫荧光法检测磷酸化Smad3、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原蛋白表达。结果与结论:转化生长因子β1在一定范围内以时间依赖方式诱导结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原、磷酸化Smad3及Smad7的表达,刺激终末结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原mRNA的表达量明显上升(均P<0.01);磷酸化Smad3及Smad7蛋白表达量在刺激后1h达到峰值,表达量显著增加(均P<0.01)。高浓度丹参酮ⅡA预处理可显著下调磷酸化Smad3、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原表达(均P<0.01)。两种浓度的丹参酮ⅡA预处理均可上调Smad7蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。提示丹参酮ⅡA对心肌纤维化有抑制作用,可能与其上调Smad7蛋白表达,抑制转化生长因子β1诱导的Smad3磷酸化,部分阻断转化生长因子β1-Smads信号通路有关。

乳腺肿瘤中CD_(44v6)、TGF-β_1和TGF-βRⅡ的表达与临床和病理特征的关系

目的 检测CD44v6、转化生长因子β1 (TGF-β1 )及其Ⅱ型受体(TGF-βRⅡ)在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤和浸润性乳腺癌中的表达,探讨其和乳腺癌预后的关系。方法 用免疫组化S-P法检测26例正常乳腺组织、33例乳腺纤维腺瘤和57例浸润性乳腺癌中CD44v6、TGF-β1 和TGF-βRⅡ的表达。结果 在正常乳腺组织、乳腺纤维腺瘤和浸润性乳腺癌中的CD44v6表达阳性率分别为3. 8%、24. 2%和70. 2%;而TGF-β1表达阳性率分别为23%、48. 5%的73. 3%;TGF-βRⅡ表达阳性率分别为76. 9%、39. 3%和17. 5%。CD44v6的表达和临床分期与淋巴结状态正相关,TGF-β1 的表达和临床分期正相关,TGF-βRⅡ的表达和临床分期负相关。结论 CD44v6、TGF-β1的过表达和TGF-βRⅡ的表达缺失与乳腺癌的进展有关,并且三种蛋白表达的联合检测有助于乳腺肿瘤的诊断,并对乳腺癌的预后评估有重要的参考价值。

TGFβ1及其受体在大鼠整胚及胎肺发育过程中的表达

目的：观察TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育中的表达, 探讨它们与大鼠整胚及胎肺发育间的相互关系和作用机制.方法：半定量RT-PCR分析3种因子在13 ～17 d 全胚中的变化情况;免疫组化法检测3种因子在15 ～17 d 胎肺中的表达及该组织发育结构特点.结果：半定量RT-PCR示, 3种因子在发育13 ～15 d表达呈递增趋势, 16 ～17 d 出现下降.免疫组化结果显示, TGFβ1主要位于发育中支气管上皮细胞内, TβRⅠ、 TβRⅡ位于原始肺泡组织.结论：TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育过程中起着重要的调控作用, 尤其是对组织器官形态的发生.

转化生长因子β1对巨噬细胞清道夫受体-A表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1(TGF β1)对巨噬细胞清道夫受体 A(ScR A)的影响。 方法 利用鼠单克隆抗人TGF β1抗体 (AntiTGF β1Ab) ,细胞培养 ,受体摄取配体及Northernblot印迹方法 ,观察AntiTGF β1Ab对人类单核细胞株 (THP 1细胞 )由来巨噬细胞受体摄取乙酰化LDL(Ac LDL)以及对ScR AmRNA表达的影响。结果 巨噬细胞对Ac LDL的摄取随AntiTGF β1Ab浓度的增加而增加。Ac LDL结合量 (ng mgprotein)与对照组 (36 89± 1 31)比较 ,投用 1 0、3 0 μg mlAntiTGF β1Ab ,其Ac LDL结合量分别为 45 5 6± 0 81(P <0 0 5 ) ,6 0 94± 1 17(P <0 0 1)。摄入量 (ng mgprotein)与对照组 (35 0 5 9± 6 0 3)比较 ,分别为 40 3 48± 4 37(P <0 0 5 ) ,5 0 3 6 1± 11 77(P <0 0 1)。降解量 (ng mgprotein)与对照组 (1382 0 6± 3 0 9)比较 ,分别为 16 17 71± 39 0 8,1934 84± 42 6 7(P<0 0 1)。巨噬细胞ScR AmRNA表达随AntiTGF β1Ab浓度的增加而增强。与空白对照组比较 ,投用 1 0、3 0 μg mlAntiTGF β1Ab ,其ScR AmRNA表达分别增强 15 7%和 38 2 %。结论 TGF β1抑制THP 1细胞由来巨噬细胞ScR A的表达。TGF

缬沙坦对高糖培养的肾小球系膜细胞p38MAPK传导通路的影响

目的探讨高糖状态下肾小球系膜细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、其上游因子MAPK激酶3/6(MKK3/6)和下游因子cAMP反应元件结合蛋白1(CREB1)的表达以及血管紧张素受体1拮抗剂(AT1Ra)缬沙坦的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和缬沙坦干预,采用Western bolt检测MKK3/6、p38 MAPK和CREB1及其磷酸化蛋白的表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测系膜细胞内TGF-β1和FN mRNA的表达。放免法测定细胞上清液中纤维连接蛋白(FN)和IV型胶原的含量。MTT法检测缬沙坦在不同时间、不同药物浓度对细胞增殖状态的影响。结果①与低糖对照组相比,高糖组系膜细胞p-p38 MAPK、p-MKK3/6和p-CREB1表达明显上调,TGF-β1和FN mRNA的表达增加,FN和IV型胶原含量增加。②缬沙坦组p-p38 MAPK、p-MKK3/6和p-CREB1的表达明显下调,TGF-β1和FN mRNA的表达降低,同时FN和IV型胶原的含量减少。③MTT法检测显示不同浓度的缬沙坦对细胞增殖状态都有所抑制,并随药物浓度的增加而作用增强。结论缬沙坦抑制肾小球系膜细胞TGF-β1的表达和细胞外基质的分泌可能部分是通过影响p38 MAPK传导通路的激活来实现的。

TGFβ1及其受体在大鼠整胚及胎肾发育过程中的表达

目的 观察TGFβ1及TβRⅠ、TβRⅡ在大鼠整胚及胎肾发育中的表达，探讨它们与大鼠整胚及胎肾发育间的相互关系和作用机制。方法 半定量RT-PCR分析三种因子在13～17d全胚中的变化情况；免疫组化法观察三种因子在15～17d胎肾中的表达及该组织发育结构特点。结果 半定量RT-PCR示，3种因子在发育13～15d表达呈递增趋势，16～17d出现下降。免疫组化示，TGFβ1主要位于肾深部内管状结构的上皮细胞，TβRⅠ、TβRⅡ位于肾内管状结构及其周围的间充质组织细胞。结论TGFβ1及TβRⅠ、TβRⅡ在大鼠整胚及胎肾发育过程中起着重要的调控作用，尤其是对组织器官形态的发生。

TGF-β及其受体与马凡综合征的研究进展

马凡综合征(MFS)是一种常染色体显性遗传性结缔组织疾病。最近研究显示,转化生长因子β(TGF-β)信号调节在MFS患者中发挥着重要的作用,并且在部分MFS患者中已经鉴定了转化生长因子β受体2(TGFBR2)基因和转化生长因子β受体1(TGFBR1)的基因突变,现就TGF-β及其受体与MFS的研究进展做一综述。

腺相关病毒载体介导hTGFβ_1、β_3体外转染退变腰椎间盘细胞的生物学效应

目的比较研究腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)载体介导人转化生长因子β1(humantransforminggrowthfactorβ1,hTGFβ1)与hTGFβ3逆转兔腰椎间盘细胞退变的生物学效应。方法分离、培养兔腰椎间盘髓核细胞和纤维环细胞,并传代建立退变早、晚期细胞模型。采用荧光标记的pSNⅡ型腺相关病毒(pSNAV2),分别检测其对不同退变程度兔腰椎间盘细胞的转染效率,并在此基础上应用pSNAV2-hTGFβ1和pSNAV2-hTGFβ3转染不同退变程度的兔腰椎间盘细胞。通过细胞形态、胶原的免疫组织化学染色和35S标记蛋白多糖等方法,检测比较pSNAV2-hTGFβ1和pSNAV2-hTGFβ3对于退变早、晚期兔腰椎间盘细胞基质合成的影响。结果pSNAV2可高效转染退变早期兔腰椎间盘髓核细胞和纤维环细胞,而对于退变晚期兔腰椎间盘细胞的转染效率低。hTGFβ1和hTGFβ3可显著促进退变早期兔腰椎间盘细胞蛋白多糖和Ⅱ型胶原的合成,其中hTGFβ1的作用较hTGFβ3强。hTGFβ1可促进退变早、晚期兔腰椎间盘纤维环细胞Ⅰ型胶原的合成。hTGFβ3可促进退变晚期兔腰椎间盘髓核细胞Ⅱ型胶原的合成。结论pSNAV2-hTGFβ1和pSNAV2-hTGFβ3可促进退变早期兔腰椎间盘髓核细胞蛋白多糖和Ⅱ型胶原的合成以及纤维环细胞Ⅰ型胶原的合成,从而延缓和逆转椎间盘退变。对于退变晚期兔腰椎间盘髓核细胞,hTGFβ3可促进Ⅱ型胶原的合成。