肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的研究进展

肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcell,AT2)是构成哺乳类动物肺泡上皮的主要细胞之一,是合成和分泌肺泡表面活性物质的主要细胞。近年来研究发现其合成和分泌功能受多种体液及环境因素的影响和调控,并涉及多种相关基因、蛋白及信号通路。AT2具有增殖、分化及修复功能,其异常转分化可能与肺纤维化及肿瘤发生有关。AT2在维持肺泡内液体平衡中发挥重要作用,并受多种体液与炎症因子调控,可能参与肺损伤和肺水肿的病理过程。AT2参与固有免疫及免疫调节机制,可向T细胞呈递抗原并调节T细胞的分化。对肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的研究有助于理解肺泡生理功能和多种肺部疾病的发病和病理过程,对其功能调节机制的研究在多种肺部疾病的防治中有临床应用前景。

Ⅱ型固有淋巴细胞及其在支气管哮喘中的作用

Ⅱ型固有淋巴细胞（ILC2s）是新近发现的一类固有免疫细胞群,在上皮细胞源性细胞因子白细胞介素（IL）-25、IL-33、胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）及脂质递质等的刺激下可产生IL-5、IL-13等Th2型细胞因子,促进气道嗜酸粒细胞性炎症的发生。近年来,对于ILC2s介导的2型免疫应答在哮喘发病过程中作用方面所取得的研究取得了重大突破。本文就ILC2s及其在哮喘中的作用进行综述。

老年Ⅱ型糖尿病患者免疫状况的研究

目的:比较分析几项免疫检测指标在老年Ⅱ型糖尿病患者的变化情况,寻找可以真实反映老年Ⅱ型糖尿病患者机体免疫状况相对理想的指标。方法:运用细胞培养、细胞化学银染技术、全自动化学发光生物芯片分析仪、LA-2000型免疫图象分析系统及流式细胞仪等技术方法,分别检测健康人和老年Ⅱ型糖尿病患者外周血T淋巴细胞核仁形成区银染蛋白(argyrophilic nuclear organizer region associated proteins,Ag-NORs)、T细胞亚群及血浆细胞因子等项目。结果:与健康人比较,老年Ⅱ型糖尿病患者外周血T细胞Ag-NORs降低,CD4、CD4/CD8显著减少,血浆细胞因子IL-6和IL-8降低。结论:经过筛选,T细胞亚群、血浆细胞因子及外周血T淋巴细胞Ag-NORs等单项指标均可在一定程度反映老年Ⅱ型糖尿病患者的免疫状况。

1,25-二羟维生素D3对哮喘小鼠Ⅱ型固有淋巴细胞的影响

目的观察1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2-D3]对哮喘小鼠肺来源Ⅱ型固有淋巴细胞(typeⅡinnate lymphoid cells,ILC2s)及相关细胞因子的影响。方法将24只4~6周龄BALB/c雌性小鼠按随机数字法分为对照组、哮喘组、干预组,每组8只。哮喘组、干预组通过腹腔注射卵清蛋白致敏及雾化激发建立哮喘模型,对照组以PBS替代。干预组在激发前30 min腹腔注射1,25-(OH)2-D3混合液0.08 mL[含1,25-(OH)2-D3 0.08μg],对照组、哮喘组以PBS替代。末次激发24 h后,行肺泡灌洗术,留取肺泡灌洗液(BALF)进行炎性细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)计数;采用ELISA检测BALF中炎性因子白细胞介素33(IL-33)、白细胞介素5(IL-5)、白细胞介素13(IL-13)的表达;HE染色观察小鼠肺部病理变化;qRT-PCR检测肺组织抑瘤因子2(suppressor of tumorigenicity 2,ST-2)、可诱导共刺激分子(inducible costimulator,ICOS)、 IL-33、 IL-5、 IL-13 mRNA表达;流式细胞仪检测肺来源ILC2s比例变化;分析BALF中EOS计数、IL-33表达与ILC2s,IL-33与IL-13的相关性。结果哮喘组气道形态改变及炎症细胞浸润较对照组加重;干预组较哮喘组减轻。哮喘组及干预组BALF中炎性细胞总数、EOS计数、IL-33、IL-13、IL-5表达以及肺来源ILC2s(lineage-ICOS+ST-2+)比例均高于对照组(P<0.01);干预组BALF中IL-5表达与哮喘组比较差异无统计学意义,其余指标均低于哮喘组(P<0.01)。哮喘组及干预组肺组织ST-2、ICOS、IL-33、IL-5、IL-13 mRNA表达均高于对照组(P<0.01);干预组IL-5 mRNA表达高于哮喘组(P<0.05),其余指标均低于哮喘组(P<0.05)。BALF中EOS计数与ILC2s比例、IL-33表达与ILC2s比例、IL-33与IL-13表达均呈正相关关系(r=0.854、0.757、0.886,P<0.05)。结论 1,25-(OH)2-D3可通过抑制IL-33/ST-2通路调节ILC2s活化,减少IL-13分泌,改善哮喘小鼠气道炎症,而对IL-5无明显抑制。

慢性肝病患者的免疫功能指标与病理学改变关系的初步研究

目的：研究免疫功能指标与肝组织炎症和纤维化程度的关系。方法：对２００例慢性乙型肝炎患者行肝组织活检，并分析其免疫功能指标与肝组织炎症和肝纤维化程度、肝功能指标与血清纤维化指标的关系。结果：外周血Ｔ淋巴细胞亚群、白细胞介素（ＩＬ）２和ＩｇＭ水平在不同肝组织学炎症和纤维化程度患者间无显著差异（Ｐ＞００５），血清干扰素（ＩＦＮ）γ水平与肝组织炎症无明显相关（Ｐ＞０．０５），Ｓ０期显著低于其他各期（Ｐ＜０．０５），但Ｓ１～Ｓ４期间无显著差异（Ｐ＞０．０５）。外周血ＮＫ细胞活性随肝组织炎症程度的加重逐渐降低（Ｐ＜０．０５），随肝纤维化程度的加重有逐渐降低的趋势，但无显著差异（Ｐ＞０．０５）。ＩｇＡ水平随肝组织炎症程度的加重逐渐升高，在肝纤维化程度各分期间尽管有差异，但无显著性（Ｐ＞０．０５）。ＩｇＧ水平随肝组织炎症程度和纤维化程度加重有升高趋势，分别在Ｇ４（Ｐ＜０．０１）和Ｓ４（＜０．０５）期最高。相关分析表明ＮＫ细胞、ＩｇＡ和ＩｇＧ与肝功能指标和血清纤维化指标有一定相关性（Ｐ＜０．０５），其他免疫功能指标与肝功能和血清纤维化指标无显著相关（Ｐ＞０．０５）。结论：外周血ＮＫ细胞活性、ＩｇＡ和ＩｇＧ水平对辅助诊断肝纤维?

1型糖尿病的免疫机制研究进展

1型糖尿病(T1DM)是具有遗传倾向的自身免疫性疾病,发病率逐年递增,其发病机制较为复杂且尚未完全阐明,涉及到T淋巴细胞和多种固有免疫细胞的相互调控。免疫细胞攻击胰岛β-细胞使其损伤或减少被认为是T1DM的主要致病因素。目前的治疗方法也有各自的局限,包括传统的胰岛素注射、胰岛移植,以及近年来的免疫治疗和干细胞治疗等方法。随着对T1DM发病机制的深入研究,将为T1DM的防治提供更为有效的靶点和方法。

牛膝多糖对CD4^+T细胞的诱导和分化作用研究

目的:探讨牛膝多糖免疫调节作用的机制。方法:(1)以牛膝多糖(800mg/L)分别对哮喘和肺癌病人的(PBMC)进行体外诱导培养,在18h以RT-PCR检测IFN-γ和IL-4的基因表达率。(2)用牛膝多糖在不同时间内和不同剂量分别对Th细胞进行体外诱导其分化,并分别收集细胞悬液和抽提细胞中RNA,分别采用RT-PCR和ELISA检测Th细胞所分泌的IFN-γ和IL-4的含量。结果:(1)哮喘和肺癌患者PBMC中IFN-γmRNA表达率分别由6/25升到14/25(P<0·01)、3/22升到10/22(P<0·05),IL-4mRNA的表达率由17/25降到9/25(P<0·05)、14/22降到5/22(P<0·05)。(2)Th细胞培养至6h,即可检到IFN-γmRNA分泌,18h达到高峰,之后迅速下降,48h已难以检出。而IL-4被抑制。(3)IFN-γ蛋白表达量存在时间依赖性,从18-24h时段开始,蛋白表达量开始显著增加(P<0·05),但在24h、36h和48h的3个时段内,蛋白表达量增加不明显(P>0·05),进入平台期。IL-4蛋白表达量被抑制。(4)IFN-γ基因水平和蛋白表达量分别与牛膝多糖的诱导浓度相关(r=0·979)。400mg/L和800mg/L是较好的的诱导浓度。而IL-4的蛋白表达被抑制。结论:(1)应用牛膝多糖能初步纠正肺癌和哮喘患者Th1和Th2细胞因子的失平衡。(2)牛膝多糖能在转录水平和翻译水平促进Th1类细胞因子的分泌,而抑制Th2类细胞因子的分泌。

人脐血间充质干细胞抑制异体T淋巴细胞反应的实验及临床意义

目的:研究人脐血间充质干细胞(MSCs)对异体外周血T淋巴细胞抑制的影响.方法:分离、扩增脐血MSCs,流式细胞术检测表面标志以鉴定.取分离培养的脐血MSCs,与经分离的异体淋巴细胞共培养,在植物血凝素(PHA)刺激下,用MTT还原法测定细胞增殖,观察脐血MSCs对PHA刺激的T淋巴细胞转化抑制作用.采用ELISA检测培养上清中IFN-γ和IL-4的分泌水平.结果:脐血MSCs在PHA刺激下可抑制T淋巴细胞增殖,且其培养上清也具有抑制异体淋巴细胞增殖转化能力.ELISA检测7d共培养上清中IFN-γ和IL-4两种细胞因子的含量,发现IFN-γ分泌水平下调、IL-4分泌水平部分上调.结论:脐血MSCs具有抑制异体淋巴细胞免疫反应,降低移植物抗宿主反应(GVHD)的作用.具有研究价值和应用潜能.

ILC2参与哮喘发病机制的研究进展

Ⅱ型固有淋巴样细胞(ILC2)是ILC家族中最近发现的一个新成员。抗原暴露后,ILC2被上皮细胞来源的细胞因子、脂质递质和肿瘤坏死因子家族成员TL1A激活,促进气道结构细胞和免疫细胞反应。ILC2是固有免疫应答的关键部分,且与支气管哮喘的发病机制有关。文章就ILC2参与哮喘发病机制的研究进展作了综述。

黄芪建中汤对脾虚小鼠免疫功能的调节作用

为探讨脾虚证的免疫学变化及黄芪建中汤的免疫药理作用，采用小鼠大黄脾虚模型，用核素掺入法测定白细胞介素＿２（ＩＬ＿２）活性、核素标记靶细胞测定自然杀伤细胞（ＮＫ）活性、微量细胞病变法测定免疫干扰素（ＩＦＮ＿γ）水平。结果脾虚小鼠的免疫指标明显低于正常组；黄芪建中汤可使之提高至正常水平，而对正常小鼠免疫指标无明显影响。提示免疫功能降低是脾虚证重要表现之一，黄芪建中汤对此有调整作用，可提高到接近正常水平。

肥胖变应性鼻炎小鼠模型与瘦素及2型固有淋巴细胞相关性的研究

目的探讨瘦素(leptin)对2型固有淋巴细胞(ILC2)的活化是否促进肥胖变应性鼻炎(AR)小鼠模型的发病。方法高脂饮食及卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立肥胖小鼠AR模型。检测模型中leptin及leptin-R、ILC2及Th2相关因子、神经介素U(neuromedin U,NMU)及NMUR1的表达水平并分析相关指标的相关性;检测leptin干预后模型中ILC2、Th2相关因子及神经肽的变化。结果肥胖小鼠A R组leptin、N M U及其受体的表达均明显高于非肥胖A R组及对照组(P<0.05),其脾脏ILC2细胞数量及IL-4、IL-13水平均显著升高(P<0.05);肥胖AR小鼠中leptin及leptin-R与ILC2呈正相关(P<0.05);肥胖AR组中ILC2、Th2相关因子及神经肽因子的表达经leptin干预后显著升高(P<0.05)。结论leptin对ILC2的活化作用及相关的神经免疫机制可能在肥胖AR的发病中发挥作用。

HepG2细胞抗原对脐血CD34^+造血干细胞诱导分化的树突细胞免疫功能的影响

背景:树突细胞(DC)是体内功能最强的抗原呈递细胞,可激活初始型T细胞,生成辅助性T细胞和杀伤性T细胞。DC具有特异性呈递肿瘤抗原的能力,在肿瘤免疫中发挥重要作用。目的:探讨HepG2细胞抗原对脐血CD34^+造血干细胞诱导分化的DC免疫功能的影响。方法:分离培养脐血CD34^+造血干细胞后,加入细胞因子组合诱导生成DC并将其分成HepG2细胞抗原负载组和对照组,以流式细胞仪测定DC生成率和免疫表型,以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测干扰素-γ(IFN-γ)含量,以MTT法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL细胞)对HepG2细胞的杀伤作用。结果:DC生成率为60.2%±9.4%。与对照组相比,HepG2细胞抗原负载组DC免疫表型CD1a^+/CD40^+、CD83^+/CD86^+、CD14^+/HLA-DR^+比例显著增高(57.6%±5.4%对33.2%±6.0%、32.5%±3.9%对26.0%±2.8%、38.1%±2.6%对29.1%±2.1%,P<0.01);IFN-γ含量呈时间依赖性增高;CTL细胞对HepG2细胞的杀伤作用显著增强(43.3%±11.3%对13.9%±4.6%,P<0.01)。结论:应用HepG2细胞抗原孵育脐血CD34^+造血干细胞可诱导分化成熟DC,DC可促进异基因淋巴细胞活化分泌IFN-γ,并产生特异性CTL细胞,杀伤肝癌HepG2细胞。

IL-33诱导的小鼠过敏原非依赖性哮喘样模型肺组织免疫细胞及亚群的改变

目的本研究旨在通过对白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)诱导的过敏原非依赖性哮喘样模型小鼠的观察,探索IL-33对小鼠肺组织中T、B淋巴细胞亚群,自然杀伤T(natural killer T,NKT)细胞和固有淋巴样2型细胞(type 2 innate lymphoid cells,ILC2)的生物学作用。方法采用数字表法将小鼠随机分为氯化钠注射液(normal saline,NS)组和IL-33组,分别将NS、IL-33于1~6 d连续滴鼻,之后隔天滴鼻至18 d制备小鼠哮喘模型。采用有创肺功能检测小鼠气道高反应性;肺组织切片染色观察气道炎性反应;流式细胞术检测小鼠肺组织中T、B细胞亚群,NKT细胞和ILC2细胞数量及比例变化。结果与NS组相比,鼻腔给予IL-33刺激可引起小鼠气道反应性增高,气道周围炎性细胞浸润和杯状细胞增生。IL-33组小鼠肺组织T细胞(CD3^+T)及其亚群细胞数增多,Th2细胞(CD3^+CD8-IL-4^+)出现优势分化,Th1/Th2细胞比例下降(P<0.01);B细胞(CD19^+B)及其亚群(B1a:CD19^+CD23-CD5^+CD11b^+,B1b:CD19^+CD23-CD5-CD11b^+和B2:CD19^+CD23^+B220^+)以及ILC2细胞(lineage-ICOS^+ST2^+)数出现明显增加(P<0.01);NKT细胞(CD3^+CD8-CD49b^+)比例无明显改变(P>0.05)。结论 IL-33可能通过直接或间接作用造成肺组织T、B淋巴细胞亚群和ILC2细胞的数量及比例改变,打破局部免疫系统平衡,引发哮喘炎性反应。

microRNA-155与支气管哮喘的研究进展

哮喘是一种常见的异质性疾病,具有复杂的病理生理学过程。目前吸入性糖皮质激素和支气管舒张剂是控制哮喘最有效的治疗方案,但并不是对所有的患者都有效。以microRNA为靶点的治疗药物代表着一种新的治疗策略,其中microRNA-155是研究最为密集的免疫系统相关的miRNA之一,在活化的B细胞、T细胞、树突状细胞和巨噬细胞中高度表达,为固有免疫和/或适应性免疫应答的细胞功能所必需,通过基因水平调节哮喘的发生与发展,microRNA-155作用机制与哮喘气道炎症密切相关,本文就microRNA-155与哮喘关系作一综述。

miR-155对变应性鼻炎患者ILC2转录因子GATA3调控作用的研究进展

Ⅱ型固有免疫细胞(ILC2)受刺激后可产生Th2型细胞因子,促进变应性鼻炎(AR)迟发相反应。miR-155在免疫系统的发育、免疫细胞的成熟分化以及维持免疫功能中都发挥至关重要的作用。GATA结合蛋白3(GATA3)是能够促进ILC2发育成熟的转录因子,而在肿瘤研究中,GATA3是miR-155的靶基因。该文对参与AR鼻黏膜中的ILC2转录因子GATA3及可干扰其表达的miR-155作一综述。

Ⅱ型固有淋巴细胞在变应性鼻炎发病机制中的作用

变应性鼻炎是常见的呼吸道过敏性炎症疾病。Th2细胞的激活被认为是其中最重要的机制,天然免疫和适应性免疫均参与其中。天然免疫细胞是一类重要的机体内稳态调节因子,Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2s)是天然免疫细胞中Th2细胞的"镜相细胞",分泌多种Th2因子,参与多种过敏性炎症病理过程。本文将就ILC2s在变应性鼻炎中作用的研究进展做一综述。

Ⅱ型固有淋巴细胞在慢性阻塞性肺疾病中的研究进展

Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2s)是固有淋巴细胞家族中新发现的成员之一。ILC2s在转录因子维甲酸相关孤核受体α和GATA结合因3调控下由骨样淋巴祖细胞发育而来,主要分布于皮肤、肺脏、肠道等黏膜组织。ILC2s可被IL-25、IL-33和胸腺基质淋巴细胞生成素刺激产生IL-5和IL-13等Th2型细胞因子,在抗寄生虫感染、病毒感染、组织修复和呼吸道炎症中发挥重要的功能。本文综述ILC2s的生物学特征和功能,并特别关注了ILC2s在慢性阻塞性肺疾病中的作用。

Ⅱ型固有淋巴细胞在支气管哮喘中的研究现状

Ⅱ型固有淋巴细胞是固有淋巴细胞家族中最近发现的一个新成员。这些细胞起源于骨髓淋巴祖细胞，受转录调节器和Gata3控制，产生IL-5、IL-9和IL-13是其成熟的标志。它们是蠕虫感染固有免疫应答的关键部分，且与支气管哮喘的发病机制有关。该文就Ⅱ型固有淋巴细胞在哮喘发病机制及在哮喘治疗中的研究现状作一综述。

银屑病患者骨髓CD34^+细胞体外定向分化的T细胞活性研究

目的研究有家族发病倾向的银屑病患者骨髓CD34+细胞体外定向发育的T细胞活性。方法免疫磁珠法分离家族史阳性银屑病患者及正常对照骨髓CD34+细胞,在骨髓基质细胞条件培养液构建的微环境下,在胸腺基质细胞的支持下,使其在体外向T细胞定向分化,免疫磁珠法收集CD3+T细胞,流式细胞仪检测CD4+CD8-细胞及CD4-CD8+细胞比例。分别采用MTT法及ELISA法检测自然增殖组及链球菌超抗原刺激后T细胞增殖活性及分泌细胞因子水平。结果①经骨髓CD34+细胞定向分化并扩增的CD3+T细胞中可检测到CD4+CD8-、CD4-CD8+T细胞,且银屑病患者组与正常对照组CD4+CD8-及CD4-CD8+T细胞比例无显著差异。②银屑病患者骨髓CD34+细胞定向分化的T细胞自然增殖组及链球菌超抗原刺激组增殖活性均显著高于正常人对照组。③银屑病患者T细胞自然增殖组培养上清白介素4、白介素8及干扰素γ与正常对照组差异无统计学意义,链球菌超抗原刺激后白介素4表达水平无显著改变,而白介素8及干扰素γ水平却显著高于正常人。结论有家族发病倾向的银屑病患者外周血T细胞活性异常可能与骨髓造血细胞相关。

γ干扰素体外诱导骨髓间充质干细胞的IDO表达及其免疫调节作用

目的探讨γ干扰素（IFN-γ）体外诱导作用成人骨髓间充质干细胞（MSCs）的吲哚胺2，3-过氧化酶（IDO）的表达及IDO对异基因T淋巴细胞增殖的影响。方法从人骨髓中分离、培养MSCs，观察传代3次以上的细胞形态，应用流式细胞术检测其表面标志，以鉴定其纯度。分别用浓度为0、20、50、100、200U／ml的IFN-γ诱导作用MSCs后，以逆转录聚合酶链反应检测IDOmRNA的表达，蛋白印迹法检测IDO蛋白的表达，反相高效液相色谱法检测色氨酸的特异代谢产物犬尿氨酸的特异代谢率，以此判断IDO的活性。以丝裂霉素C灭活的外周血单个核细胞为刺激细胞，异基因T淋巴细胞为反应细胞，与经200U／ml IFN-γ作用的MSCs组成混合淋巴细胞培养体系，MSCs与反应细胞的比例分别为1：5、1：10、1：50及1：100，部分混合淋巴细胞培养体系中加入IDO的特异性抑制剂1-甲基色氨酸（1-MT），检测T淋巴细胞增殖率及培养体系中IDO活性。结果MSCs培养传代3代以后的纯度达到95％。在无IFN-γ作用时，MSCs没有IDO mRNA表达，经不同浓度的IFN-γ诱导后，均可检测到IDOmRNA表达，且表达强度呈IFN-γ剂量依赖性；IDO蛋白的表达与IDOmRNA一致；随着IFN-γ浓度的增加，MSCs培养上清液中的色氨酸浓度降低，而犬尿氨酸浓度升高。在无MSCs的混合淋巴细胞培养体系中，T淋巴细胞的增殖率为（80．2±5．7）％，当MSCs与反应细胞之比为1：5、1：10、1：50及1：100时，T淋巴细胞的增殖率分别为（28．1±3．2）％、（38．6±4．0）％、（57．2±2．5）％和（84．1±4．6）％，若在相同的混合淋巴细胞培养体系中加入1-MT，则MSCs对T淋巴细胞增殖的抑制作用基本消失；培养体系中IDO的活性与MSCs的数量成正比。结论γ干扰素在体外能诱导MSCs的IDO表达，其表达水平与γ干扰素呈剂量依赖性；IDO能抑制T淋巴细胞增殖。