基于Cre-loxP重组酶系统构建肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性敲除SENP1基因小鼠

背景:前期在体外成功构建了SENP1基因沉默的人肺泡上皮细胞系,在细胞水平上研究了SENP1在高氧性肺损伤中的作用。目的:基于Cre-loxP重组酶系统构建肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性敲除SENP1基因小鼠模型。方法:将SENP1^(flox/-)小鼠自交得到SENP1^(flox/flox)和SENP1^(flox/-)小鼠;将Sftpc-Cre^(+/+)小鼠与野生型小鼠交配获得更多的Sftpc-Cre^(+/-)小鼠。将Sftpc-Cre^(+/+)或子代Sftpc-Cre^(+/-)小鼠与SENP1^(flox/-)或子代SENP1^(flox/flox)小鼠进行杂交,获得SENP1^(flox/-)Sftpc-Cre^(+/-)双杂合小鼠。将SENP1^(flox/-)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠与SENP1^(flox/flox)小鼠杂交,获得SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠。剪鼠尾提取基因组DNA,行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳确定小鼠基因型。取SENP1^(flox/flox)和SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠肺组织行免疫荧光双标实验及Western blot以验证SENP1敲除效果;取SENP1^(flox/flox)和SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠心、肝、肺、肾组织行苏木精-伊红染色以观察两组小鼠各脏器的组织形态。结果与结论:琼脂糖凝胶电泳正确筛选出SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠。免疫荧光双标实验显示,与SENP1^(flox/flox)小鼠相比,SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠肺组织中SENP1的平均荧光强度降低(P<0.01),且SENP1和Sftpc未见明显共定位(P<0.01)。Western blot结果显示,与SENP1^(flox/flox)小鼠相比,SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠肺组织中SENP1蛋白表达降低(P<0.001)。苏木精-伊红染色结果显示SENP1^(flox/flox)和SENP1^(flox/flox)Sftpc-Cre^(+/-)小鼠的心、肝、肺和肾脏组织形态无明显改变。该研究利用Cre-loxP重组酶系统成功构建了肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性敲除SENP1基因小鼠,为后续研究SENP1基因在以肺泡Ⅱ型上皮细胞为主要损伤细胞的肺疾病如支气管肺发育不良、特发性肺纤维化中的作用提供了良好的工具。

具有Leslie-Gower和Holling-TypeⅡ型非自治食饵-捕食时标动力学系统的周期解

利用重合度理论研究了一类在时标上具有Leslie-Gower和Holling-Ⅱ型非自治食饵-捕食动力学系统,得到了其存在周期解的充分条件.

具Holling-type Ⅱ型功能反应的随机时滞捕食系统的研究

研究了具Holling-typeⅡ型功能反应的随机时滞捕食系统.通过构造合适的Lyapunov函数,利用伊藤公式讨论了该类随机系统的动力学行为.首先,证明了对任何给定的正初始条件,该随机系统都存在唯一的全局正解.其次,分析了解的随机最终有界性,保证了随机系统的有效性.最后,给出了解的渐近矩估计.得出结论:即使很小的随机扰动也能够保证种群的有界性.解的这些性质为生物资源管理提供了一定的理论依据.

肾衰Ⅱ号方对慢性肾功能衰竭大鼠肾组织AngⅡ及nNOS蛋白表达的影响

目的观察肾衰Ⅱ号方对5/6(ablation/infarction,A/I)肾切除慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠残余肾组织纤维化及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和神经型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响,并初步探讨其作用机制。方法选取57只SD雄性大鼠按5/6(A/I)肾衰模型法制备大鼠模型。造模后随机分为模型组、肾衰Ⅱ号方组(中药组,肾衰Ⅱ号方浓煎液2mL灌胃)和西药组(氯沙坦钾合福辛普利钠混悬液,2mL灌胃),每组15只,另选取15只大鼠作为正常组,正常组和模型组予等量纯净水灌胃,各组均每天干预1次,连续干预60天。检测各组大鼠SCr、BUN、内生肌酐清除率(creatinine clearance rate,CCr),采用Western blot法测定大鼠残余肾皮质、髓质AngⅡ和nNOS蛋白表达,观察肾组织病理形态。结果与正常组比较,模型组SCr、BUN升高,CCr降低(P<0.01),提示造模成功。与本组干预前比较,中药组及西药组SCr、BUN水平下降,CCr水平升高(P<0.01)。与模型组比较,中药组及西药组SCr、BUN水平及髓质AngⅡ表达均降低(P<0.01,P<0.05),CCr水平及皮质、髓质nNOS表达明显升高(P<0.01,P<0.05)。肾组织病理显示,中药组病理变化明显减轻,优于模型组。结论肾衰Ⅱ号方可以改善5/6肾切除CRF大鼠的肾功能,减轻肾间质纤维化,其作用机制可能与调节肾内失衡的AngⅡ和nNOS信号转导途径有关。

血管紧张素Ⅱ-2型受体在心脏保护方面的研究进展

血管紧张素Ⅱ的大部分心血管效应(如收缩血管、升血压、刺激醛固酮分泌、促进心肌和血管细胞增殖等)是由血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1)介导,但是越来越多的实验结果显示:血管紧张素Ⅱ-2型受体(AT2)具有拮抗AT1的功能,起着对抗细胞生长和心肌肥厚及促细胞分化、凋亡,扩张血管,降低血压等作用,并认为其可能是一种潜在的心脏、血管保护性受体。现就近年来对AT在心脏保护方面的研究进展作一综述。

一类具有Holling Ⅱ型功能性反应的捕食者-食饵系统全局周期解的存在性

利用重合度理论中的延拓定理讨论了一类具有Ｈｏｌｌｉｎｇ Ⅱ型功能性反应的捕食者－食饵系统（即Ｒｏｓｅｎｚｗｅｉｇ－ＭａｃＡｒｔｈｕｒ模型）全局周期解的存竹性，得到了保证调期解存在的充分条件，推广了某些已知的相关结果．

一类具Holling Ⅱ型功能性反应的捕食者-食饵系统非平凡周期解的存在性

本文利用Mawhin重合度理论中的延拓定理研究了具Holling Ⅱ型功能性反应的捕食者-食饵系统非平凡周期解的存在性,得到了更为一般的结果。

高灵敏度Ⅱ类超晶格长波红外探测系统研究

以Ⅱ类超晶格320×256长波红外探测器为核心部件,开发了一套高灵敏度长波红外探测系统.介绍了Ⅱ类超晶格红外探测器的技术指标及系统的主要结构和工作方式.为充分发挥该红外探测器的灵敏度,设计了高灵敏度信息获取系统,并介绍了该信息获取系统的软硬件设计.该信息获取系统采用了自适应信号调理技术,以降低信息获取噪声,提升探测系统的灵敏度和动态范围.最后对整套长波红外探测系统开展了信息获取噪声测试、系统性能测试及外场成像实验.实验结果表明:长波红外探测系统的信息获取噪声低至0. 065 m V,系统的噪声等效温差(NETD)达到19. 6 m K,黑体探测率为7. 72×1010,外场成像质量良好,图像细节清晰,对比度高.该长波红外探测系统有利于推动Ⅱ类超晶格红外探测器在高灵敏度长波红外遥感探测中的应用.

Ⅱ型糖尿病与腰椎间盘退变的相关性

目的 ：探讨Ⅱ型糖尿病（DM）与腰椎间盘退变的相关性。方法 ：选择2013年因腰腿痛至我院脊柱外科门诊就诊并满足入选标准的390例50~60岁患者,详细记录患者DM病史,其中非DM患者123例（非DM组）、血糖控制较好患者140例（A组）,血糖控制较差DM患者127例（B组）;A组中DM≤10年68例（A1组）,DM〉10年72例（A2组）;B组中DM≤10年60例（B1组）,DM〉10年67例（B2组）。用Pfirrmann评分系统对各组患者各节段腰椎间盘退变程度进行评分,用SPSS 19.0统计分析DM与腰椎间盘退变程度的相关性。结果：各组资料均服从正态分布（P〉0.05）。各组间一般资料无显著性差异（P〉0.05）。在L1/2~L5/S1每节段上,A1组Pfirrmann评分与非DM组无显著性差异（P〉0.05）;A2、B1及B2组的Pfirrmann评分显著高于非DM组（P〈0.05）。A2、B2组Pfirrmann评分显著较A1、B1组高（P〈0.05）;B1、B2组Pfirrmann评分均较A1、A2组高（P〈0.05）。在A、B组中,L1/2~L5/S1每一节段上腰椎间盘退变程度与DM病程呈显著性正相关（P〈0.05）。结论 ：DM〉10年及血糖控制不良是腰椎间盘退变的危险因素,腰椎间盘退变程度与DM病程呈正相关。

逐步增加Ⅱ型截尾下n中取m串连续κ失效系统的可靠性评估

在逐步增加Ⅱ型截尾样本下,研究不可修n中取m串连续κ失效系统(简记为κ(m)/n系统)的可靠性评估问题.利用Bayes方法与极大似然估计法,得到了部件失效率、系统可靠度及平均寿命等可靠性指标的经验Bayes估计.最后利用随机模拟例子说明了本文方法的正确性和可行性.

非自治具有Ⅱ类功能反应的竞争捕食系统的周期解

用迭合度理论研究n个食饵种群m个捕食者种群的非自治具有Ⅱ类功能反应的竞争捕食周期系统,给出了用系数函数在一个周期内的平均值判断系统存在周期解的充分性条件．

嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统F和E基因序列测定

目的克隆并测定嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统部分编码基因GspF和Gsp E的完整基因序列。方法分别根据已获得的嗜麦芽寡养单胞菌D2株部分序列,以及GenBank收录的K279a和R551株的序列依次设计3组引物,移步法PCR扩增GspF和E基因,产物纯化后连接pMD18T载体,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定后进行测序分析,将获得各PCR片段进行拼接,最终获得GspF和E基因的完整编码基因,并在GenBank中进行对比分析。结果 PCR先后扩增获得的3段序列,测序并拼接后发现其含有两个完整开放读码框架,分别为长1200 bp的GspF基因(GenBank收录号为GU377212.1)和长1434 bp的GspE基因(GenBank收录号为HM151387)。在GenBank中BLAST分析发现,D2株与嗜麦芽寡养单胞菌R551-3菌株的GspF基因及氨基酸序列同源性分别为93%和98%;GspE基因及氨基酸序列同源性与同菌种菌分别为92%和99%。结论成功克隆出嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统基因簇中的GspF和GspE完整编码序列;嗜麦芽寡养单胞菌GspF和GspE种内高度保守,而其他细菌差异显著,提示其Ⅱ型分泌机制可能与其他革兰阴性菌有一定差异。

一类具HollingⅡ类功能反应的三维顺环捕食系统的研究

本文研究一类具有ＨｏｌｌｉｎｇⅡ类功能反应的三维顺环捕食系统，得到了其持续生存的充分条件，和当其是周期系统时，系统存在平稳振荡的判据．

慢性阻断血管紧张素Ⅱ1型受体不能完全防止模拟失重大鼠血管的适应性结构变化

我们以前的工作提示,在模拟失重所引起的血管区域特异性适应变化中,局部肾素-血管紧张素系统(local renin- angiotensin system,L-RAS)可能发挥关键调控作用。本文以losartan慢性阻断血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype1 receptor,AT_1R),观察模拟失重是否仍能引起血管的这种适应性改变,并检测大血管管壁L-RAS主要成分的表达是否也发生相应变化。以尾部悬吊大鼠模型模拟失重的生理影响。制作基底动脉、胫前动脉、颈总动脉和腹主动脉的HE染色切片,在光学显微镜下进行形态观测:用免疫组织化学技术测量颈总动脉和腹主动脉壁的血管紧张素原(angiotensinogen,AGT)及AT_1R的表达变化。结果表明:4周模拟失重引起大鼠基底动脉中膜和颈总动脉管壁各平滑肌肌层肥厚,而胫前动脉和腹主动脉则发生萎缩性改变;给予losartan 4周引起上述4种血管皆发生萎缩性变化;阻断AT_1R,模拟失重仍然能引起基底动脉、颈总动脉发生相对肥厚性改变和腹主动脉萎缩加重。4周模拟失重还引起颈总动脉壁中AGT和AT_1R表达上调,而腹主动脉壁及血管周围组织中AGT和AT_1R表达下调:给予losartan 4周仅引起腹主动脉壁中AGT和ATP_1R表达减少;阻断AT_1R,模拟失重使腹主动脉壁AT_1R表达进一步减少。结果提示,4周模拟失重引起人鼠脑、颈部与后身大、中动脉血管的形态结构改变和L-RAS主要成分表达发生上调或下调,血管L-RAS在其中可能发挥关键性调控作用:但在慢性阻断AT_1R的条件下,其它调控机制仍可能在脑血管适应性调节中发挥一定作用。

具Holling Ⅱ类功能反应及捕获的三种群L-V系统多周期解的存在性

运用比较定理及重合度理论,研究一类具有HollingⅡ类功能反应及捕获的三种群L-V系统多个周期解的存在性.结果表明,在适当的条件下,该系统至少存在8个不同的正周期解.并通过具体实例证明了所得结论的有效性.

具有Holling Ⅱ类功能反应且周期系数的非自治捕食扩散系统的持久与全局渐近稳定性

研究了一类具有扩散系数和 Holling 类功能反应的一捕两食三种群非自治捕食系统 ,得到了系统持久生存和周期系统存在唯一全局渐近稳定的周期解的条件 .

具有时滞和Holling-Ⅱ功能反应的捕食系统的持久性和渐近周期解（英文）

本文研究具有时滞和Holling-II功能反应的捕食系统.运用微分不等式理论,得到系统具有持久性的充分条件.通过构造适当的李雅普偌夫函数,我们得到系统具有唯一的全局渐近稳定的周期解.最后给出简单结论.

Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白D在杆状病毒表达系统中的表达、纯化及免疫效果评价

目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)糖蛋白D(gD2)进行表达,纯化后评价其免疫效果,以探索HSV-2重组亚单位疫苗的研制。方法:提取HSV-2DNA作为模板,用聚合酶链式反应(PCR)扩增gD2基因,克隆至pFastBac HTA载体中,利用载体中的His基因标记gD2,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达His-gD2融合蛋白,表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot检验,用镍柱进行纯化,免疫小鼠评价其免疫原性。结果:HSV-2gD2在昆虫细胞Sf9中得到特异性表达,纯化后的重组蛋白诱导小鼠体内产生高水平的IgG抗体及中和抗体。结论:gD2基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中获得表达,表达产物表现出良好的免疫原性及中和活性,为发展HSV-2亚单位疫苗奠定了基础。

一类具有脉冲作用和Holling Ⅱ型功能性反应的非自治捕食者-食饵系统正周期解的存在性

通过应用迭合度理论的连续定理,给出了一类具有脉冲作用和Holling Ⅱ型功能性反应的非自治捕食者-食饵系统正周期解的存在性的充分条件.

具Ⅱ类功能反应及捕获的两斑块扩散捕食系统多个周期解的存在性

运用重合度理论中的延拓定理,研究了一类具有Ⅱ类功能反应及捕获的两斑块扩散捕食系统的多个周期解的存在性.得到了该系统至少存在8个不同正周期解的充分性条件,并举例说明所得结论的有效性.