激素耐药型肾病综合征儿童与COL4A5基因突变的关系研究

目的探讨糖皮质激素(激素)耐药型肾病综合征(SRNS)儿童与Ⅳ型胶原A5(COL4A5)基因突变的关系。方法选取51例原发性肾病综合征(PNS)患儿,其中经足量激素治疗4周无效的患儿即SRNS 26例,经足量激素治疗4周有效的患儿即激素敏感型NS(SSNS)25例,并选择同期体检的27名健康儿童作对照,采集外周血提取DNA,并进行DNA测序。结果COL4A5基因突变仅在PNS患儿中检出而在对照组中未检出。51例PNS患儿中,检出COL4A5基因突变16例,其中散发突变和遗传突变各8例。SRNS患儿的COL4A5基因突变检出率为46%,高于SSNS患儿的16%(P<0.05)。SRNS患儿和SSNS患儿的突变来源比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论COL4A5基因突变和PNS的发生有关,且该突变可能与患儿激素耐药有关。

鳖甲煎改良方下调CTGF/Itgα5对肝星状细胞T6周期变化、细胞凋亡及Col1a1表达的影响

目的探讨鳖甲煎改良方(novel turtle shell decoction,NTSD)对肝星状细胞T6(hepatic stellate cell T6,HSCT6)的周期、凋亡、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)/整合素α5(integrin alpha 5,Itgα5)通路及1型胶原(Collagen type 1,Col1a1)表达的影响。方法以NTSD(含生药量为0.71 g/mL)处理的HSCT6为实验(NTSD)组,鳖甲煎丸(turtle shell pills,TSP,与NTSD相同剂量)处理的HSCT6作为阳性对照(TSP)组,未处理的HSCT6为正常对照组。采用流式仪(FCM)检测各组HSCT6细胞的周期、凋亡变化。定量PCR、Western blot及免疫荧光细胞化学技术分别检测各组HSCT6细胞的CTGF、Itgα5及Col1a1的mRNA及其蛋白的表达。结果 FCM检测结果显示,NTSD可将HSCT6阻滞于S细胞周期,并诱导其凋亡。定量PCR、Western blotting及免疫荧光细胞化学技术检测结果显示,NTSD可在mRNA与蛋白水平显著下调HSCT6的CTGF、Itgα5及Col1a1的表达,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 NTSD可通过下调CTGF/Itgα5将HSCT6阻滞于S细胞周期,诱导其凋亡,并影响其Col1a1的表达,以抑制其生长。

COL4A1基因Q1334H多态性与中国男性骨密度显著相关性研究

目的研究COL4A1基因多态性与中国农村男性骨密度关系。方法采用双能X线吸收仪对367名男性研究对象进行腰椎及股骨扫描,应用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测COL4A1基因Q1334H多态位点基因型,用广义线性模型分析此位点多态性与腰椎2￣4及股骨骨密度关系。结果在调整环境危险因素前后,均显示COL4A1基因H1334H基因型与股骨颈骨密度降低呈显著相关(P=0.0074)、但与腰椎2￣4的骨密度无显著相关性(P=0.351)。结论在中国农村男性人群中COL4A1基因Q1334H多态性与股骨颈骨密度相关。

COL4A1基因多态性与中国女性骨密度关系分析

目的 研究COL 4 A 1基因多态性与中国农村女性骨密度关系.方法 采用双能X线吸收仪对343名女性研究对象进行腰椎及股骨扫描,应用PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测COL4 A 1基因（谷酰氨酸Q 1334 H组氨酸）多态位点基因型,用广义线性模型分析此位点多态性与腰椎2～4及股骨骨密度关系.结果 在调整环境危险因素后,均未显示COL 4 A 1基因H 1334 H基因型与股骨颈、腰椎2～4骨密度相关（P=0.409、0.705）.结论 在中国农村女性人群中COL 4 A 1基因Q 1334 H多态性与股骨颈、腰椎2～4骨密度无显著相关性.

微小RNA-203对Ⅳ型胶原蛋白α4链基因的靶向调控及其在口腔黏膜下纤维化中的作用

目的 构建微小RNA-203（microRNA-203,miR-203）表达质粒和Ⅳ型胶原蛋白α4链（collagen typeⅣalpha 4,COL4A4） 3＇UTR荧光素酶报告基因,探究miR-203对COL4A4的靶向调控作用及其在口腔黏膜下纤维化（oral submucous fibrosis,OSF）中的作用.方法 通过生物信息学软件对miR-203可能调控的靶基因进行预测,结合其生物学功能,筛选出miR-203可能的靶基因COL4A4.收集2016年1至4月在中南大学湘雅口腔医院黏膜科就诊、具有典型病理特征、未经治疗、不伴其他口腔疾病的9例OSF患者颊黏膜组织（OSF组）及其配对的正常组织（对照组）,应用蛋白质印迹法检测两组标本中COL4A4的表达,实时定量聚合酶链反应法检测miR-203的相对表达量.通过生物信息学软件（http：//www.targetscan.org/）寻找COL4A4基因3UTR与miR-203之间的作用位点.将COL4A4基因3 UTR包括miR-203结合位点、上下游部分侧翼序列以及酶切位点在内共60 bp片段分别克隆入哺乳动物细胞miRNA表达报告载体（pMIR-REPORT Luciferase）荧光素酶报告基因载体,将其分别与β-半乳糖苷酶表达质粒及miR-203表达载体共转染293T细胞,24 h后检测报告基因活性.结果 COL4A4的相对表达水平OSF组（2.46±2.26）显著高于对照组（0.70±0.49）（P＜0.05）;miR-203的相对表达水平（2-△△CT） OSF组（2.57±2.09）显著低于对照组（154.07±191.11）（P＜0.01）.生物信息预测显示,COL4A4基因3＇UTR与miR-203之间有一物种间保守作用位点（位点1）,3个非保守作用位点（位点2,3,4）;miR-203能明显抑制位点1介导的报告基因活性,能部分抑制位点2与位点4介导的报告基因活性,而对位点3介导的报告基因活性无显著影响.结论 在OSF组织中,miR-203与COL4A4的蛋白表达呈负相关,miR-203靶向结合COL4A4基因3＇UTR,抑制COL4A4蛋白表达.

肿瘤坏死因子α与基质金属蛋白酶2及胶原在大鼠压疮皮肤组织中的表达及意义

目的观察TNF-α、基质金属蛋白酶2（MMP-2）及胶原在大鼠压疮局部皮肤组织中的表达，探讨压疮形成的可能机制。方法将40只SD雄性大鼠按随机数字表法分为正常对照组、受压3d组、受压5d组、受压7d组、受压9d组，每组8只。正常对照组大鼠不做任何处理；后4组大鼠应用缺血一再灌注磁片循环压迫的方式，在大鼠两侧后肢股薄肌处建立深部组织损伤模型（受压3d组）和压疮模型（另3组）。受压3d组大鼠仅受压3个循环；受压5d组、受压7d组、受压9d组大鼠在受压3个循环后，划破受压皮肤，后继续分别施压至5、7、9个循环。受压3d组大鼠于受压3d后（正常对照组大鼠于相同时间点），另3组大鼠分别于受压5、7、9d后，切取两侧后肢股薄肌中心部位处的皮肤组织。HE染色观察皮肤组织形态，Masson染色观察胶原纤维表达，免疫组织化学法检测Ⅳ型胶原、MMP-2表达，蛋白质印迹法检测TNF-α、磷酸化NF—κB表达。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果（1）正常对照组大鼠皮肤组织为复层鳞状上皮，皮肤结构清晰，无明显炎性细胞浸润；受压3d组大鼠上皮层次清晰，Fh较多，炎性细胞开始浸润；受压5d组、受压7d组、受压9d组大鼠随着受压时间延长，表皮增厚，Fb数量减少，炎性细胞浸润增强。（2）正常对照组大鼠皮肤组织中胶原纤维排列整齐，含量丰富。受压3d组大鼠皮肤组织中胶原纤维排列有序，表达量仍较高，与正常对照组大鼠相近（P〉0．05）。受压5d组、受压7d组大鼠皮肤组织中胶原纤维排列紊乱，表达量逐渐减少，均明显低于正常对照组（P值均小于0．01）；受压9d组大鼠皮肤组织中胶原纤维表达量较受压7d组少量增加，但仍明显低于正常对照组（P〈0．01）。（3）正常对照组、受压3d组、受压5d组、受压7d组、受压9d组大鼠皮肤组织中Ⅳ型胶原表达量分别为11．0±2．8、9．0±1．7、8．3±2．8、5．1±1．8、5．4±1．2。受压3d组大鼠皮肤组织中Ⅳ型胶原表达量与正常对照组相近（P〉0．05），受压5d组、受压7d组、受压9d组大鼠皮肤组织中Ⅳ型胶原表达量均较正常对照组明显降低（P〈0．05或P〈0．01）。受压3d组大鼠皮肤组织中MMP-2表达量与正常对照组相近（P〉0．05），受压5d组、受压7d组、受压9d组大鼠皮肤组织中MMP-2表达量均明显高于正常对照组（P〈0．05或P〈0．01）。（4）正常对照组大鼠皮肤组织中TNF—α表达量为O．48±0．11；受压3d组、受压5d组、受压7d组、受压9d组大鼠皮肤组织中TNF—α表达量分别为0．84±0．08、1．13±0．19、1．34±0．16、1．52±0．23，均明显高于正常对照组（P值均小于0．01）。受压3d组、受压9d组大鼠皮肤组织中磷酸化NF．KB表达量与正常对照组相近（P值均大于0．05），受压5d组、受压7d组大鼠皮肤组织中磷酸化NF—κB表达量明显高于正常对照组（P〈0．05或P〈0．01）。结论大鼠压疮局部皮肤组织中TNF-α表达增高介导的炎症反应引起MMP-2高表达和胶原减少可能是压疮形成的重要原因之一。

COL4A1在肝癌中的表达及其对肝癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的探讨血清Ⅳ型胶原蛋白基因α1(COL4A1)在肝癌组织中的表达,分析敲低COL4A1表达对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法采用Western blot法检测COL4A1在68例肝癌及配对癌旁组织的表达水平;运用siRNA技术敲低肝癌细胞COL4A1表达,采用CCK-8试验检测其对肝癌细胞增殖能力的影响,采用Transwell试验检测其对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果生物信息学分析提示COL4A1mRNA在肝癌中高表达(P<0.01);COL4A1在肝癌组织表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),敲低COL4A1表达明显降低肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论 COL4A1在肝癌组织中高表达,并促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。