独角莲超临界萃取物的GC-MS分析及体外抑瘤活性

为了寻找独角莲抗肿瘤的活性物质基础和合理开发利用独角莲,本研究采用超临界CO2萃取方法提取独角莲块茎粉,通过气相色谱—质谱技术对提取物进行成分鉴定。并采用噻氮唑蓝比色法(MTT)测试萃取物的体外抑瘤活性。结果:从独角莲的超临界CO2萃取物中检出37种物质,含量最丰富的4种化合物为:β-谷甾醇(-βS itos-terol),占40.22%;菜油甾醇(Campesterol),占18.45%;棕榈酸(n-Hexadecanoic acid),占9.52%;亚油酸(9,12-Oc-tadecadienoic acid(Z,Z)-),占8.15%。MTT实验证明萃取物对结肠癌HCT-8、卵巢癌HO-8910、胃癌SGC-7901、肝癌SMMC-7721均有显著的抑制作用,其中肝癌SMMC-7721细胞对萃取物最为敏感。独角莲块茎超临界CO2萃取物有显著抑瘤活性,针对该萃取物的进一步分离分析对其活性物质基础的寻找具有重要意义。

独角莲醇提液对H22肝癌荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平的影响

目的探讨独角莲醇提液对H22肝癌荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平的影响。方法建立体内H22肝癌荷瘤小鼠的模型,采用灌胃法给予其100 mg·kg-1·d-1独角莲醇提液,以生理盐水灌胃和5-FU腹腔注射作为对照,连续10 d,停药后第2天摘取小鼠眼球取血后断髓处死,取出胸腺、脾脏称重,计算小鼠的胸腺重量指数、脾脏重量指数,采用ELISA法检测小鼠血清中细胞因子白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果与生理盐水灌胃的H22肝癌荷瘤小鼠比较,5-FU腹腔注射和独角莲醇提液灌胃处理的H22荷瘤鼠血清中细胞因子IL-2、TNF-α水平明显升高;但胸腺重量指数、脾脏重量指数显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论独角莲醇提液可提高H22荷瘤鼠的血清IL-2和TNF-α水平。

独角莲对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖抑制作用机理的研究

临床上独角莲对包括肝癌在内的多种肿瘤有一定的治疗作用。为揭示其抑癌机理,我们用独角莲根茎水提物(the aqueous extract from dried powdered rhizomes of Typhonium gigante-um Engl.,AEoTGE)作用肝癌细胞株SMMC-7721,研究独角莲对SMMC-7721细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响。噻唑氮蓝(MTT)比色实验和流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测定表明:AEoTGE能较强抑制SMMC-7721细胞的生长,SMMC-7721细胞被阻滞在S期,并诱导细胞凋亡。提示独角莲是一种在肝癌治疗上有前景的中草药。

独角莲中酪氨酸酶活性抑制成分的提取工艺研究

利用独角莲水提物对酪氨酸酶抑制活性的测试,研究独角莲水提物的提取工艺.通过L9(34)正交试验法研究了料液质量比、提取时间、提取温度和提取次数对独角莲水提物抑制酪氨酸酶活性的影响.结果表明:独角莲水提物的最佳提取工艺为料液质量比1∶15,提取时间3 h,提取温度80℃,提取次数1次,在此条件下测定独角莲水提物对酪氨酸酶的抑制率,最高为46.93%.

mRNA差异显示法比较独角莲作用肝癌细胞SMMC-7721前后的基因表达

目的 :研究独角莲根茎水提取物 (AEoTGE)作用肝癌细胞SMMC 772 1后引起的细胞基因表达变化。方法 :利用mRNA差异显示技术 ,以人肝癌细胞系SMMC 772 1细胞为研究对象 ,筛选AEoTGE作用后表达改变的基因片段。结果 :经测序和鉴定 ,发现 1个基因在加入AEoTGE后表达上升 ,1个基因表达下降。结论 :mRNA差异显示可以用于中草药对细胞的作用机制研究。

禹白附提取物抑制人胃癌细胞增殖转移的实验研究

目的:观察禹白附提取物对人胃癌细胞GC9811细胞增殖、迁移的影响,探讨其可能的作用机制。方法:采用植物化学技术对禹白附进行提取分离,再采用四甲基偶氮唑蓝比色法(tetramethyl azo thiazole blue colorimetric method,MTT)检测不同浓度禹白附提取物作用不同时间对GC9811细胞增殖的抑制作用;细胞划痕实验和Transwell小室法检测禹白附提取物对细胞迁移能力的影响;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(real-time quantitative polymerase chain reaction method,RT-qPCR)细胞基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、E-钙黏蛋白(ECadherin)的表达水平。结果:MTT比色分析法检测结果表明,禹白附提取物对GC9811细胞的生长有明显抑制作用且浓度和作用时间呈正相关;细胞划痕实验和Transwell小室法结果显示,随禹白附提取物浓度的增加,GC9811细胞迁移能力下降;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法结果表明,与禹白附提取物15 g/L组比较,禹白附提取物30 g/L组的MMP-2、MMP-9表达值均明显降低,而E-Cadherin表达明显上调。结论:禹白附提取物能够抑制胃癌细胞的增殖和转移,其机制可能与其抑制MMP-9和MMP-2上调E-Cadherin的表达有关。因此,禹白附提取物具有很强的抗肿瘤作用,为进一步寻找高效低毒的抗肿瘤先导化合物奠定了基础,值得进行深入研究。

独角莲醇提物对胰腺癌细胞恶性生物学行为及上皮间质转化的影响

目的探讨独角莲醇提物对胰腺癌细胞恶性生物学行为及上皮间质转化(EMT)的影响。方法体外培养人胰腺癌细胞PANC-1,取传3代、对数生长期、生长状态良好的PANC-1细胞,随机分为Control组及独角莲醇提物500、600、700、800、900μg/mL组,独角莲醇提物500、600、700、800、900μg/mL组分别予相应浓度的独角莲醇提物干预,Control组不予独角莲醇提物干预。干预24、48 h,采用CCK-8法检测细胞活力;干预48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin表达。结果与Control组比较,独角莲醇提物500μg/mL组培养24、48 h细胞活力均显著升高,而独角莲醇提物600、700、800、900μg/mL组培养24、48 h细胞活力均显著降低(P均<0.05)。随着浓度增加和培养时间延长,独角莲醇提物各浓度组细胞活力显著下降,呈现浓度和时间依赖性(P均<0.05)。独角莲醇提物500μg/mL组无论是培养24 h还是培养48 h细胞活力均显著升高,在后续研究中剔除。此外,由于培养48 h独角莲醇提物各浓度组细胞活力降低更显著,故选择培养48 h进行后续研究。与Control组比较,独角莲醇提物600、700、800、900μg/mL组划痕愈合率逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调、Bax表达上调,EMT相关蛋白E-cadherin表达上调、N-cadherin表达下调(P均<0.05)。结论一定浓度的独角莲醇提物不仅能抑制人胰腺癌细胞增殖和迁移并促进其凋亡,还能抑制其EMT。