云南乌骨绵羊乌质性状与TYR基因多态性的相关分析

乌骨乌肉是乌骨绵羊的主要乌质性状。测定了乌骨绵羊、兰坪本地羊和罗姆尼羊血液TYR活性并分析了乌骨绵羊与乌骨鸡组织器官黑色素结构,结果表明:乌骨绵羊TYR活性显著高于兰坪本地绵羊和罗姆尼羊(P<0.05);乌骨绵羊黑色素与乌骨鸡黑色素的IR光谱基本一致,黑色物质主要是真黑色素。克隆了绵羊TYR基因第一外显子长667 bp序列,并检测了乌骨绵羊和非乌骨绵羊TYR基因多态性。结果发现,检测的乌骨绵羊TYR基因第一外显子有两个变异位点,分别位于第64和154号编码氨基酸上,但都属于同义突变。通过对64号位置设计酶切位点检测TYR基因多态性,结果发现,该突变与乌质性状有关基因紧密连锁,TYR基因上可能存在乌质性状相关功能突变位点。另外,TYR基因多态性与毛色的表型相关极显著(P<0.01),该基因可能也是毛色功能基因。

不同羽色斑嘴野鸭毛囊中Tyr,Tyrp1及C-kit基因的表达及调控分析

斑嘴野鸭羽毛呈褐色,少数个体会呈现出黄白羽及白羽表型。Tyrosinase(Tyr)、Tyrosinase-related protein-1(Tyrp1)以及C-kit(The tyrosine kinase receptor)基因与黑色素合成密切相关,研究利用Real-time PCR对这3个基因在褐羽、黄白羽以及白羽3种表型斑嘴野鸭毛囊组织中进行表达分析;同时利用在线软件分别预测调控这3个基因的microRNA。结果发现,Tyr,Tyrp1在褐羽斑嘴野鸭中表达量最高,黄白羽中表达量显著下降(P<0.01),而在白羽中则完全不表达。C-kit在褐羽及黄白羽中表达量类似,而在白羽中表达则显著下降(P<0.01)。同时,预测到调控Tyr,Tyrp1和C-kit基因的microRNA数分别为9,25和18个。结果表明,毛囊组织中Tyr,Tyrp1以及C-kit基因的表达下调可能导致了斑嘴野鸭出现了黄白羽及白羽两种表型,这些候选microRNA可能参与了这3个基因的表达调控。

黑线仓鼠及其白化突变系TYR、TYRP1的基因表达水平比较分析

目的本研究旨在研究TYR、TYRP1基因在黑线仓鼠与白化突变系皮肤组织中的表达情况,探索其与白化毛色性状的产生是否具有相关性。方法以黑线仓鼠和白化突变系皮肤组织为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术,分别得到黑线仓鼠与白化突变系TYR和TYRP1基因的相对表达量。结果黑线仓鼠皮肤中的TYR和TYRP1基因的mRNA相对表达量分别是白化突变系皮肤组织中的2.5倍和5.3倍。结论表明黑线仓鼠皮肤中TYR、TYRP1的基因表达水平存在表达差异,白化突变系TYR、TYRP1基因发生表达下调,揭示出了TYR、TYRP1基因的表达量与白化突变系白化性状的产生有关。

旧院黑鸡TYR基因第四内含子中ALV的插入频率和类型研究

有研究表明TYR基因第四内含子中ALV的插入缺失与禽类的羽毛颜色有关,本研究旨在探讨旧院黑鸡TYR基因第四内含子中ALV的插入频率和类型,为进一步探讨其与旧院黑鸡羽毛颜色的相关性提供参考。采用双重PCR对ALV插入整合进行检测、测序,DNA测序序列通过相关分子生物学软件比对与分析,从而分析序列中的识别位点和突变位点。用引物Diag05-dw进行测序,可以看出在不含ALV插入整合频率的N片段中,只存在一个6 bp的识别位点5′-CAGTGT-3′;将不含ALV插入整合频率的N片段的测序结果与参考序列DQ118702.1进行比对,共发现有5个SNP,这5个SNP都位于第四内含子,重要的识别位点5′-CAGTGT-3′存在一个SNP位点5890 G/A。

CDK5对羊驼皮肤黑色素细胞TYR和MITF mRNA表达的调节

为了证实CDK5是否参与羊驼毛色的形成,本研究主要对CDK5在羊驼黑色素细胞中调节TYR和MITF的表达进行了研究。本研究首先采用免疫组织化学方法检测CDK5在羊驼皮肤黑色素细胞中的定位,再通过脂质体将CDK5转染于羊驼皮肤黑色素细胞,之后通过Western blot和qRT-PCR的方法检测转染后黑色素细胞中CDK5蛋白、TYR和MITF mRNA的表达。免疫组化结果显示CDK5位于黑色素细胞的胞质和细胞核内;West-ern blot结果显示转染组黑色素细胞中CDK5蛋白表达量明显高于对照组;qRT-PCR结果显示CDK5可下调MITF的表达,同时上调TYR的表达,转染组黑色素细胞中MITF和TYR mRNA的表达水平分别是对照组细胞的0.264 9和3.931 3倍。结果揭示CDK5可能通过调节黑色素细胞核中TYR和MITF mRNA的表达,从而参与调控羊驼毛色形成。

不同鸡品种TYR基因遗传变异分析

采用PCR-SSCP方法,对中国宁夏固原鸡、海南文昌鸡、西藏藏鸡和国外引进海赛克斯鸡TYR基因5′侧翼区及外显子13个位点(P1、P2、P3)的遗传变异进行研究。结果表明,P2位点无多态,P1位点在3个中国鸡品种中均出现3种基因型,分别为AA型、BB型和AB型;在引进的海赛克斯鸡中,只检测到BB型和AB型2种类型。4个鸡品种在该位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态;P3位点在中国3个鸡品种中均检测到3种基因型,分别为AA型、BB型和AB型,而海赛克斯鸡中只检测到AA和AB型,固原鸡和文昌鸡在该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态,藏鸡和海赛克斯鸡均处于极不平衡状态。进一步说明,中国地方鸡品种的TYR基因蕴藏丰富变异资源。经克隆测序分析,P1位点存在C→T的单碱基替换突变,P3位点存在G→A的单碱基替换突变,但未引起氨基酸突变。独立χ2分析显示,两位点基因型和等位基因分布在不同鸡品种之间存在显著或极显著差异(P<0.05和P<0.01),提示TYR基因的基因型和等位基因分布与鸡品种因素显著相关。本研究为以后对鸡TYR基因5′侧翼区及外显子1的进一步研究提供基础依据。

TYR基因外显子1的序列变异与家猪的起源研究

为了分析家猪与野猪的遗传多样性及起源,测定了来自12个中国地方家猪品种、3个欧洲引进猪品种以及8个中国野猪和2个越南野猪共36个个体的酪氨酸酶基因(TYR)外显子1的序列,共检出6个单核苷酸多态性位点(SNPs),且这6个位点的变异均为同义突变,根据这些变异可将酪氨酸酶基因DNA序列归结为4种单倍型。结合已发表的数据,构建了简约中介网络图。在网络图中,单倍型TYR*2主要为欧洲家猪与欧洲野猪和3条亚洲家猪染色体。大部分亚洲家猪和野猪共享单倍型TYR*1,表明这是1个亚洲类型的单倍型;同时也有部分欧洲家猪与野猪携带这一单倍型。而单倍型TYR*3和TYR*4为本研究检测到的稀有单倍型,这两种单倍型主要由中国家猪与亚洲野猪组成。这种网络图结构支持家猪的欧洲和亚洲独立起源学说,同时也表明,相当部分的欧洲家猪品种受到亚洲猪的基因渗透,而少量中国家猪和日本野猪也受到了欧洲猪的基因渗透。

TYR基因研究进展

TYR基因是酪氨酸酶相关蛋白家族(Tyrosinase-related Protein)成员之一,酪氨酸酶是黑色素合成过程中的限速酶,TYR表达量及活性的高低直接影响真黑素与褐黑素的表达,进而对动物毛色产生影响。为深入了解TYR基因结构功能、多态性及TYR基因表达量与毛皮动物毛色的相关性,本文在查阅大量文献基础上,对TYR基因结构与功能以及在临床医学、畜牧生产上的应用研究等方面进行综述。通过综述大量文献发现,TYR基因突变不仅与人类皮肤白化病有明显关系,对哺乳动物被毛白化现象也有明显关系,而且在深色被毛哺乳动物中的表达量普遍高于浅色被毛哺乳动物。

武定乌骨鸡TYR基因多态性与黑色素沉积的关联研究

【目的】研究武定乌骨品系鸡与非乌骨品系鸡酪氨酸酶(TYR)基因多态性及TYR表达差异与黑色素沉积的关系,探究武定鸡乌骨品系鸡乌肉性状形成的分子机理。【方法】以武定乌骨品系鸡和非乌骨品系鸡为研究对象,测定两品系300只300日龄鸡血浆中TYR活力、总黑色素含量以及血浆比色OD值,采用直接测序法分析武定鸡TYR基因外显子的多态位点(SNPs),并检测各组织中TYR基因表达差异。【结果】与武定非乌骨品系鸡相比,武定乌骨品系鸡血浆各指标均较高;在TYR外显子区域共发现2个SNP位点(C2744T和C2866T),符合哈代温伯格平衡,呈中度多态;TYR基因C2744T位点CC基因型的血浆TYR活力以及总黑色素均高于其他基因型,并呈现较低亮度值的差异;在基因表达量方面,武定乌骨品系鸡各组织的TYR基因表达量均极显著高于武定非乌骨品系鸡(P<0.01)。【结论】TYR基因C2744T位点的CC基因型可作为武定乌骨品系鸡选育的遗传标记,其他指标可作为辅助参照。

逍遥散有效部位对A375与HacaT细胞共培养模型TYR及其相关蛋白mRNA表达的影响

目的:探讨逍遥散有效部位对A375与HacaT细胞共培养模型黑素合成的影响及机理。方法:制备逍遥散AB-8大孔树脂柱层析富集物,将其作用于以1∶2的比例构建的A375细胞与HacaT细胞共培养模型,采用Hunt法检测黑素含量,RT-PCR法测定TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA的表达。结果:逍遥散大孔树脂柱层析40%乙醇洗脱部位对细胞共培养模型作用显著,与阴性对照组比较,逍遥散4、2 g/L组黑素量分别下调82.23%、93.01%;TYR、TRP-1、TRP-2 mRNA表达量分别下调29.11%、23.78%、20.05%和25.13%、15.02%、11.64%(P<0.01)。结论:逍遥散有效部位提取物可能通过下调TYR、TRP-1和TRP-2 mRNA的表达而降低人黑素瘤细胞的酪氨酸酶活性和黑素合成量。

MITFa及TYR基因在红色锦鲤体色发生不同阶段的表达分析

本研究描述了红色锦鲤从出膜到体色形成的过程,总结和归纳不同发育阶段体色变化异同点,筛选出6个体色变化较显著时期,分别为1、2、3、4、12、48日龄。利用荧光定量PCR分析MITFa及TYR基因在红色锦鲤6个体色变化时期的表达情况。结果显示,MITFa基因在1日龄时表达量最高,显著高于48日龄时(P<0.05),极显著高于其他4个时期(P<0.01)。48日龄时表达量次之,亦极显著高于2、3、4、12日龄4个时期(P<0.01)。2、3、4、12日龄4个时期MITFa基因表达量较低且不存在显著差异(P>0.05)。TYR基因在1日龄时表达量最高(P<0.01),4日龄时表达量显著高于12、48日龄(P<0.05),与2、3日龄不存在显著差异(P>0.05)。TYR基因表达量在2、3、12、48日龄4个时期差异不显著(P>0.05)。MITFa和TYR基因在红色锦鲤体色形成过程中,表达水平整体呈现降低的趋势,其中MITFa基因表达量表现为先降后升,TYR基因则先降后升再降。以上结果显示MITFa、TYR基因与锦鲤体色形成具有一定相关性,但MITFa和TYR基因在体色发生中的相互作用还有待进一步研究证实。

水貂TYR基因T138A位点多态性及其与毛色性状的关联分析

试验旨在检测水貂酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因T138A位点的多态性,并分析其与水貂毛色表型的相关性。提取5种被毛色型430只水貂血液基因组DNA,采用PCR-RFLP技术,对TYR基因T138A位点进行多态性检测,统计等位基因频率与基因型频率,通过卡方(χ2)独立性检验分析该位点多态性与水貂毛色性状的相关性。结果表明,T138A位点存在2个等位基因T和A,形成TT、TA和AA 3种基因型,AA基因型在吉林白水貂群体中为优势基因型(0.9069),而TT基因型为金州黑水貂、珍珠水貂、咖啡水貂和银蓝水貂群体的优势基因型,其中在金州黑水貂群体中基因型频率最高(1.0000)。关联分析表明,TYR基因T138A位点的多态性与毛色性状呈极显著相关(P<0.0001)。表明TYR基因T138A位点可能是影响水貂毛色的主控位点或与调控白色被毛表型主控位点连锁的分子标记。

慢性心理应激对小鼠血清中TYR,SOD和MDA的影响

目的通过对小鼠进行慢性心理应激实验,为进一步研究慢性心理应激对白癜风、白发等色素减退性疾病的影响及可能的机制提供参考。方法 24只C57BL/6雄性黑发鼠随机分为心理应激组(8只)、正常对照组(8只)、电击组(8只)。电击组小鼠接受电击;心理应激组小鼠旁观电击组鼠遭受电击过程,通过视觉、听觉、嗅觉等产生心理应激。每天应激持续30min,连续14d。结果心理应激组中血清酪氨酸酶(TYR)活性显著低于对照组(P<0.05),血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量显著高于对照组(P<0.05)。结论慢性心理应激可导致体内TYR活性降低,SOD活性、MDA含量增高,影响机体的色素合成功能,可能参与白癜风、白发等色素减退性疾病的发生过程,是导致该类疾病发生的可能作用机制。

过表达miR-193b对黑色素细胞中MITF和TYR表达的影响

旨在探讨miR-193b对黑色素生成关键基因MITF和TYR表达的影响,进而说明miR-193b对黑色素形成的影响。本研究通过细胞转染技术,在绵羊黑色素细胞中过表达miR-193b,检测黑色素细胞中黑色素含量的变化,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别对转染细胞中MITF和TYR mRNA和蛋白表达水平进行测定。结果显示:过表达miR-193b的黑色素细胞,黑色素含量明显减少;MITF mRNA和TYR mRNA表达均显著降低(P<0.01),分别降低0.233倍和0.198倍;MITF和TYR蛋白表达量也显著降低(P<0.01),分别降低0.232倍和0.321倍。本研究表明,过表达miR-193b使黑色素细胞中MITF和TYR表达量降低而间接影响黑色素生成。

鸭TYR基因序列的克隆与分析

根据鸡和鹌鹑的酪氨酸酶基因(TYR)保守序列设计1对引物,以半番鸭基因组为模板进行PCR扩增,将扩增出的序列进行克隆和测序,结果得到长为630 bp的序列。序列分析表明该基因片段包含外显子1部分序列,与鸡、鹌鹑和孔雀的TYR基因分别有93.5%、94.3%和93.4%的同源性,充分显示了TYR基因在进化上的保守性;对扩增序列进一步研究发现第133处存在G/A突变。该基因部分序列的克隆,为进一步开展研究TYR基因多态性与鸭羽色的相关性研究奠定基础。

眼皮肤白化病Ⅰ型基因突变研究在产前诊断中的应用及一种致病性TYR基因新突变

目的:对1名生育过眼皮肤白化病(OCA)先证者母亲再次怀孕的家庭进行酪氨酸酶(TYR)基因突变研究和产前基因诊断。方法:应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增TYR基因各外显子、外显子内含子交界区及启动子区,分别以异源双链分析法(HA)、变性高效液相层析(DHPLC)和DNA序列测定技术分析先证者及其父母的基因突变,明确突变的致病性后,检测胎儿TYR基因相应位点与基因型。结果:先证者的基因型为c.232_233insGGG/c.841G>T,其父母基因型分别为c.232_233insGGG和c.841G>T突变杂合子。E281X具有致病性。胎儿未获得父亲的c.232_233insGGG突变和母亲的c.841G>T突变。HA和DHPLC法所获得结果与测序结果完全一致。结论:确定了先证者基因型,并检测出一种新的致病性突变c.841G>T。胎儿未获得致病性基因突变,具有正常的基因型。

略阳乌鸡酪氨酸酶基因(TYR)遗传变异分析

试验通过PCR-SSCP技术检测略阳乌鸡酪氨酸酶基因(TYR)部分启动子区、全部外显子和部分内含子的遗传多样性,并对不同基因型进行了测序和比对分析。结果表明,略阳鸡群体在TYR位点具有较为丰富的遗传变异,在所检测的启动子区有2个单核苷酸多态(SNP)位点;外显子1有2个SNP位点,外显子2、3、4没有检测到变异位点,外显子5存在5个SNP位点;检测的部分内含子2中发现2个SNP位点。mRNA上的7个变异位点有3个发生在编码区,但都是同义突变,没有造成氨基酸变异。表明略阳乌鸡和普通鸡的酪氨酸酶没有氨基酸序列差异,TYR基因在鸡的遗传上是高度保守的。启动子区和内含子区的遗传变异是否与酪氨酸酶的转录剪接和表达量有关,进而影响乌鸡黑色素的沉积还有待进一步研究。

黑色素细胞中过量表达Pax6^(10Neu)基因对MITF和TYR的影响

【目的】MITF和β-catenin是黑色素生成通路中重要的调节基因,而Pax6通过调控MITF和β-catenin来调控黑色素细胞的黑色素生成,通过对只含有正常Pax6 paird domain的前102个氨基酸的Pax6^(10Neu)的研究,来探究Pax6^(10Neu)是否还有生物学功能,以及Pax6对其下游基因的作用机理。【方法】根据NCBI查找到的Pax6^(10Neu)基因序列设计PCR引物,克隆Pax6^(10Neu),收集所得基因片段送华大基因测序确认。后通过对Pax6^(10Neu)和慢病毒表达载体的序列分析来筛选合适的酶切位点,通过分析选取Sal I和Xba I作为酶切位点,设计含有Sal I和Xba I酶切位点的PCR引物,大量克隆Pax6^(10Neu)基因,从而通过胶回收得到含有Sal I和Xba I酶切位点的Pax6^(10Neu)基因。将含有酶切位点的目的片段与T载体相连,并送华大基因测序。将与T载体连接成功的质粒导入感受态细胞使其大量扩增,提取质粒,双酶切后,胶回收,得到大量含有Sal I和Xba I酶切位点的Pax6^(10Neu)基因片段,将其与含有小鼠tyrp2特异性启动子和绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒表达载体相连接,送华大基因测序确认。将连接好的慢病毒表达载体导入感受态细胞使其大量扩增,通过质粒中提试剂盒获得大量去内毒素的Pax6^(10Neu)慢病毒真核表达载体。将慢病毒真核表达载体通过细胞转染导入到培养的绵羊黑色素细胞中,使其过量表达。收集细胞,分别通过观察绿色荧光蛋白和使用RT-PCR来检测转染效率,使用RT-PCR和Western blot来检测MITF和TYR在m RNA和蛋白水平的变化,同时检测黑色素细胞中黑色素生成量的变化。【结果】与正常组相比,在m RNA水平,MITF显著升高3.2倍(P<0.05),TYR升高1.31倍,由此得出,Pax6^(10Neu)可以有效促进MITF m RNA的产生,对TYR m RNA产生的影响不是太显著;在蛋白质水平,MITF显著升高8.24倍(P<0.001),TYR显著升高2.09倍(P<0.001),由此得出,Pax6^(10Neu)可以显著提高MITF、TYR蛋白的产生;同时黑色素细胞产生黑色素的量显著升高1.22倍(P<0.05),由此得出Pax6^(10Neu)可以有效促进黑色素细胞黑色素的生成。【结论】只含有正常Pax6 paird domain前102个氨基酸的Pax6^(10Neu),仍然可以在黑色素细胞中与MITF相互作用,同时间接调控TYR的表达,从而使黑色素细胞黑色素的生成量发生改变。

胃幽门螺杆菌感染与TLR4基因G11367C、NADPH氧化酶基因His72Tyr多态性的交互作用和特发性成年骨质疏松症的关系

目的探讨胃幽门螺杆菌(H.Pylori)感染与TLR4基因G11367C、NADPH氧化酶基因His72Tyr多态性的交互作用和特发性成年骨质疏松症(IOIA)的关系。方法选择我院2011年5月至2015年7月收治的IOIA患者160例,以160例健康体检者作为对照组,两组在年龄、性别、民族、籍贯和生活习惯方面无显著性差异,以上述各组患者的外周血白细胞为样本,利用PCR-RFLP技术检测了TLR4基因G11367C和NADPH氧化酶基因His72Tyr多态性。采用^(14)C-尿素呼气试验法(^(14)C-UBT)检测受检者,H.Pylori与^(14)C结合的每分钟衰变数(DPM)以判断H.Pylori感染情况。每位研究对象进行问卷调查,采用非条件Logistic分析,估算G11367C、His72Tyr多态性和H.Pylori感染与LSCC发病风险的调整比值比(OR)及95%可信区间(95%CI),并分析G11367C、His72Tyr多态性与H.Pylori感染的交互作用。结果G11367C(GC)、His72Tyr(HT)和His72Tyr(TT)基因型频率分布在IOIA组分别为70.62%、35.00%和36.25%,在对照组分别为28.12%、13.12%和13.75%,两组之间有显著差异(P均<0.01)。G11367C(GC)基因型者患IOIA的风险均显著增加(OR=6.1442),His72Tyr(HT)和His72Tyr(TT)基因型者患IOIA的风险也显著增加(OR=6.7773,OR=6.4737)。基因突变的协同分析发现G11367C(GC)/His72Tyr(TT)基因型者频率在IOIA组和对照组的分布频率分别为25.63%和3.75%,经χ~2检验在两组之间有显著性差异(P<0.01)。G11367C(GC)/His72Tyr(TT)基因型者患IOIA的风险显著增加(OR=39.5731),G11367C(GC)和His72Tyr(TT)基因型在IOIA发生、发展存在正向的交互作用(γ_2=2.0887,γ_3=1.9856),另外G11367C(GC)和His72Tyr(HT)之间也存在正向交互作用(γ>1)。100≤DPM<500和DPM≥500的H.Pylori感染者频率分布在IOIA组分别为28.75%和40.63%,在对照组分别为15.63%和11.87%,上述H.Pylori感染状况频率在IOIA组与对照组之间均有显著差异(P均<0.01)。100≤DPM<500和DPM≥500的H.Pylori感染者患IOIA的风险性均明显增高(OR=4.4463;OR=8.0238),而DPM≥500的H.Pylori感染者患LSCC的风险性则又明显高于100≤DPM<500的H.Pylori感染者(P<0.01)。H.Pylori感染与G11367C(GC)、His72Tyr(HT)和His72Tyr(TT)基因型与均有正向交互作用(γ均大于1)。结论携带G11367C(GC)、His72Tyr(HT)和His72Tyr(TT)基因型的个体属IOIA高危险人群,这些基因型和H.Pylori感染的交互作用促进了IOIA的发生、发展,应当采取根除H.Pylor或调控基因表达的措施以达到有效预防IOIA的目的。

不同代次羊驼皮肤黑素细胞TYR基因表达变化的研究

为了探讨TYR基因在体外培养的羊驼皮肤黑素细胞不同代次间表达变化差异,根据Gen Bank中已发现的序列(EU293064)设计引物和探针,以羊驼皮肤黑素细胞的RNA为模板,采用QRT-PCR Taq Man探针法研究羊驼酪氨酸酶基因在不同代次间羊驼皮肤黑素细胞中m RNA表达量.结果表明,经过内参基因校正后,第10代羊驼黑素细胞中TYR基因的相对表达量是第3代细胞相对表达量的25倍(P<0.01),第10代细胞与第5代细胞表达差异不明显(P>0.05)。表明TYR基因表达量的差异与羊驼皮肤黑素细胞传代可能存在一定的相关性。