脑脊液14-3-3蛋白检测对隐球菌性脑膜炎的意义

目的评价脑脊液酪氨酸3-加单氧酶/色氨酸5-加单氧酶激活蛋白(14-3-3蛋白)含量的变化与隐球菌性脑膜炎(CM)患者病情及预后之间的联系。方法从16例隐球菌性脑膜炎患者和18例对照组中获取脑脊液标本,进行脑脊液细胞学检测,并用ELISA法检测脑脊液中14-3-3蛋白含量。结果隐球菌性脑膜炎患者脑脊液中14-3-3蛋白含量较对照组增高,P<0.05。在隐球菌性脑膜炎患者中,有7例患者经过抗真菌治疗症状好转,脑脊液中的隐球菌被清除,但14-3-3蛋白并没有随着治疗的好转及隐球菌的清除有显著下降。结论隐球菌性脑膜炎患者脑脊液中14-3-3蛋白含量较对照组明显增高,且不会在短期内随着治疗的进行和临床症状的改善而显著下降。

血清YWHAΗ与类风湿关节炎患者部分炎症因子、骨代谢指标及并发骨质疏松的关系

目的探讨血清酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白eta(YWHAΗ)水平与类风湿关节炎(RA)患者部分炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)]、骨代谢指标[Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(β-CTX)、骨碱性磷酸酶(B-ALP)、Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PⅠNP)、骨密度]及并发骨质疏松的关系。方法选取2020年7月至2021年6月于该院治疗的120例RA患者作为RA组,根据28个关节疾病活动度(DAS28)评分将RA患者分为低度组(2.6~3.2分,39例)、中度组(3.3~5.1分,46例)和高度组(>5.1分,35例),根据RA患者是否发生骨质疏松将其分为骨质疏松组(49例)和无骨质疏松组(71例)。另选取57例健康志愿者作为对照组。检测纳入研究者血清YWHAΗ、炎症因子(IL-6、CRP)、骨代谢标志物(β-CTX、B-ALP、PⅠNP和骨密度)。比较RA组和对照组、不同疾病活动度RA患者及骨质疏松组和无骨质疏松组的上述指标。比较骨质疏松组和无骨质疏松组的临床资料,选取差异有统计学意义的临床资料及血清YWHAΗ作为因变量,采用Logistic逐步回归分析RA患者发生骨质疏松的危险因素。采用Pearson相关分析血清YWHAΗ与各项检测指标的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析YWHAΗ诊断RA并发骨质疏松的价值。结果RA组血清YWHAΗ、IL-6、CRP、β-CTX水平均高于对照组(P<0.05),B-ALP、PⅠNP水平、骨密度低于对照组(P<0.05)。重度组血清YWHAΗ、IL-6、CRP、β-CTX水平高于中度和低度组(P<0.05),B-ALP、PⅠNP、骨密度低于中度和低度组(P<0.05)。RA患者血清YWHAΗ水平与IL-6、CRP、β-CTX水平呈正相关(r=0.584、0.506、0.265,P<0.05),与B-ALP、PⅠNP、骨密度呈负相关(r=-0.595、-0.473、-0.657,P<0.05)。RA病程长、无钙剂摄入、高YWHAΗ是RA患者发生骨质疏松的危险因素(P<0.05)。YWHAΗ诊断RA并发骨质疏松的曲线下面积为0.806(95%CI:0.719~0.892),灵敏度为77.55%,特异度为83.10%。结论RA患者血清YWHAΗ水平增高,且与血清炎症因子水平增高、骨代谢紊乱及骨质疏松的发生有关。

miRNA-185-5p通过靶向YWHAZ对人非小细胞肺癌细胞A549恶性生物学行为的影响

目的探讨微RNA(miRNA)-185-5p通过调控酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(YWHAZ)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549增殖、侵袭凋亡和上皮间质转化的影响。方法获取GSE152702数据集,识别在NSCLC患者和健康者血液中差异性表达的miRNA,收集2018年7月至2019年9月在浙江大学附属第二医院确诊为NSCLC患者的癌组织及癌旁组织,使用RT-qPCR法检测miRNA-185-5p在NSCLC癌组织和细胞系中的表达情况。采用脂质体转染法,分别将miRNA-NC、miRNA-185-5p模拟物、miRNA-185-5p抑制剂和miRNA-185-5p模拟物+pcDNA3.0-YWHAZ转染至人NSCLC细胞A549中,Transwell实验检测各组A549细胞的侵袭能力,CCK-8实验检测各组A549细胞的增殖能力,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)检测各组A549细胞的凋亡率,Western blot实验检测各组细胞中YWHAZ和上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达情况。检索StarBase、Targetscan和Human protein Atlas数据库,韦恩图绘制与miRNA-185-5p含潜在互补结合位点及与NSCLC患者预后不良有关的基因。检索GEPIA数据库识别YWHAZ表达与肺鳞癌、肺腺癌患者预后的关系。生物学信息技术预测和双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-185-5p和YWHAZ之间的关系。结果GSE152702数据集显示miRNA-185-5p在NSCLC患者中明显下调,miRNA-185-5p在NSCLC癌组织中的表达水平低于癌旁组织(P<0.01)。miRNA-185-5p在NSCLC细胞株中的表达水平低于正常人肺上皮细胞株(P<0.05),与miRNA-NC组比较,miRNA-185-5p模拟物组miRNA-185-5p表达水平明显升高(P<0.05),YWHAZ表达水平明显降低(P<0.01),miRNA-185-5p抑制剂组中miRNA-185-5p表达水平明显降低(P<0.05),YWHAZ表达水平明显升高(P<0.01)。过表达miRNA-185-5p能明显抑制A549细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,并促进细胞凋亡(P<0.05)。GEPIA数据库显示,YWHAZ在肺鳞癌和肺腺癌患者中明显上调,且与患者预后不良有关。YWHAZ可与miRNA-185-5p靶向结合,过表达YWHAZ可部分逆转miRNA-185-5p模拟物对A549细胞增殖,侵袭和上皮间质转化的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用。结论miRNA-185-5p在NSCLC癌组织及细胞中明显下调,过表达miRNA-185-5p能明显抑制A549细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的能力,并促进细胞凋亡,其机制可能与调控YWHAZ的表达有关。

汉黄芩素调控Ywhaz蛋白抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移

目的:探讨汉黄芩素对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭能力的影响,并研究汉黄芩素对酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)蛋白水平的影响。方法:体外培养HCT116和HT29细胞系,设空白组、汉黄芩素不同浓度组(浓度分别为5,10,20,40μmol·L-1)作用不同时间后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测汉黄芩素对结肠癌细胞增殖的影响,并用Annexin V-FITC/PI双标后流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡率;穿透小室(Transwell)小室法检测处理24 h后细胞侵袭和迁移力的变化;实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)检测不同浓度汉黄芩素作用24 h后Ywhaz mRNA的水平,并运用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测该蛋白及其磷酸化水平。结果:与空白组比较,汉黄芩素可明显抑制结肠癌细胞系的增殖,具有浓度和时间依赖性,并促进结肠癌细胞系的凋亡率,其中20和40μmol·L-1的汉黄芩素抑制细胞增殖作用显著(P<0.01),且不同浓度的汉黄芩素(10,20,40μmol·L-1)作用于结肠癌细胞后,明显降低肿瘤细胞的穿膜数(P<0.05,P<0.01),汉黄芩素可下调Ywhaz mRNA水平和蛋白水平的表达,并降低Ywhaz的磷酸化水平(P<0.05,P<0.01)。结论:汉黄芩素可显著抑制HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与下调Ywhaz的蛋白水平及其蛋白的磷酸化水平有关。