酪氨酸为底物的过氧化物酶催化荧光反应

G.G.Guilbault等人曾对过氧化物酶催化H_2O_2氧化高香草酸(HVA)的反应进行过较详尽的研究。利用这个反应可以对有关的氧化还原酶、辅酶、有机底物、无机离子和微量H_2O_2进行分析检测。但是,以高香草酸为底物,价格昂贵,作为通用检测方法不够经济。Guilbault认为酪氨酸有类似的反应,且价格便宜,但未进行详细研究。我们在此基础上。

高香草酸-H_2O_2-HRP荧光酶联免疫分析测定HRP的研究

提出了高香草酸－H2O2－HRP荧光酶联免疫分析测定HRP的新方法。该法基于HRP催化H2O2氧化高香草酸生成能产生荧光的物质，该物质在Ex＝317nm激发光作用下产生荧光，通过测定在Em＝421nm处的荧光强度，间接测定HRP的含量。在所选定的实验条件下，对HRP测定线性范围为1．0×10（-10）～1．0×10（-8）g／mL，检测限为1．0×10（-10）g／mL。

HRP和AP呈现束缚-浸水应激大鼠NTS儿茶酚胺能神经元Fos表达的效果比较

用辣根过氧化物酶(HRP)单酶先后标记Fos和酪氨酸羟化酶(TH),用二氨基联苯胺(DAB)增强剂和DAB分别呈色;以及同时用碱性磷酸酶(AP)和HRP双酶分别标记TH和Fos,再分别用5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐(BCIP)和氯化硝基四氮唑蓝(NBT)对TH和DAB对Fos呈色,比较免疫双标时两种不同酶标记显色方法对研究大鼠孤束核(NTS)内儿茶酚胺能神经元在束缚-浸水应激中作用效果的影响.两种显色方法的免疫阳性神经元都清晰易辩,结果应激组NTS内Fos,TH及Fos/TH双标阳性神经元数目均显著增加.但HRP单酶双底物显色系统耗时长、非特异性着色强,在抗体种属来源不同时可优先考虑使用HRP/AP双酶双底物显色.

硒的酶催化荧光猝灭效应研究及其在土壤分析中的应用

在氨性缓冲介质中,痕量硒（Ⅳ） 能阻抑辣根过氧化物酶（HRP）催化H2O2氧化L-酪氨酸（L-Tyr）产生荧光的反应。对该体系的荧光猝灭效应进行了探讨,并应用于土壤中痕量硒的测定。在pH 10.0的NH3·H2O-NH4Cl缓冲溶液中,控制L-Tyr、H2O2和HRP的浓度分别为7.50×10-5 mol/L、1.00×10^-4 mol/L和5.00×10^-7 mol/L,在室温下反应20min后,于激发波长为314nm,发射波长为404nm处测定体系的荧光强度猝灭值（ΔF）。结果表明,硒（Ⅳ） 在质量浓度为0.1-10.0μg/mL范围内与ΔF呈线性关系,线性回归方程为ΔF=83.123ρSe（Ⅳ） （μg/mL）＋0.068 5,相关系数r=0.999 5。方法中硒（Ⅳ） 检出限为0.03μg/mL。将体系应用于测定富硒土壤样品中痕量硒（Ⅳ） ,测定值与原子吸收光谱法（AAS）相符,相对标准偏差（RSD,n=6）为1.6%-3.2%,加标回收率为98%-103%。