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抗转化生长因子β1的U1 snRNA嵌合型核酶体外剪切作用
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作者 刘芳 邹萍 +1 位作者 吴耀辉 张敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1609-1612,共4页
目的:研究抗转化生长因子β1U1snRNA嵌合型锤头状核酶的细胞外切割活性。方法:通过计算机设计针对TGFβ1的锤头状核酶,然后把合成的核酶片段克隆入含有U1 snRNA启动子/增强子和终止子的U1snRNA核酶载体中。通过RT-PCR扩增获得TGFβ1的... 目的:研究抗转化生长因子β1U1snRNA嵌合型锤头状核酶的细胞外切割活性。方法:通过计算机设计针对TGFβ1的锤头状核酶,然后把合成的核酶片段克隆入含有U1 snRNA启动子/增强子和终止子的U1snRNA核酶载体中。通过RT-PCR扩增获得TGFβ1的部分基因片段,将其克隆入T载体中T7启动子的下游,体外转录获得核酶和靶RNA,转录过程中掺入同位素,通过变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化回收。[32P]标记的核酶与靶RNA在不同条件下进行切割反应,变性PAGE电泳,放射自显影,分析反应结果。结果:活性的U1 snRNA嵌合型核酶(U1Rz803)在生理温度下具有良好特异的切割活性;而点突变型核酶U1Rz803m没有切割活性,因此这些结果显示U1Rz803设计是正确的。结论:本研究中制备的U1Rz803具有良好的特异催化切割活性。U1 snRNA嵌合型核酶U1Rz803有望在胞内抑制TGFβ1的表达,为研究转化生长因子(TGF)β1在造血调控中的作用机制提供有效工具。 展开更多
关键词 转化生长因子Β rna 催化 u1小核rna嵌合酶
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B型血友病分子治疗策略的研究进展
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作者 陈龙 杨金龙 +3 位作者 马金 沈滟 高蒙 沈国民 《生物技术》 CAS 2024年第5期657-664,共8页
B型血友病是维生素K依赖蛋白凝血因子Ⅸ(FIX)缺乏导致的一种伴X染色体隐性出血性疾病,其主要由基因突变导致。近年来,随着B型血友病致病突变的机制被逐渐阐明,针对不同致病机制的分子治疗策略也逐渐被关注。该文首先对FIX的分子结构、... B型血友病是维生素K依赖蛋白凝血因子Ⅸ(FIX)缺乏导致的一种伴X染色体隐性出血性疾病,其主要由基因突变导致。近年来,随着B型血友病致病突变的机制被逐渐阐明,针对不同致病机制的分子治疗策略也逐渐被关注。该文首先对FIX的分子结构、生物学功能及其在B型血友病的突变类型及数目进行阐述,然后对基于不同基因表达层面设计的针对不同致病机制的分子治疗策略进行综述,这将为B型血友病临床治疗药物的研发提供了新思路,同时,也对B型血友病患者的精准治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 B型血友病 凝血因子Ⅸ 基因治疗 u1小核rna 核糖体通读 维生素K 伴侣样化合物 双特异性抗体
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抗TGFβ1核酶以及嵌合型核酶的细胞外和肝星状细胞内活性鉴定 被引量:2
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作者 宋宇虎 刘芳 +5 位作者 田德安 薛秀兰 刘南植 吴小力 林菊生 金由辛 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2005年第4期365-372,共8页
大量研究表明转化生长因子β1参与细胞的多种生理和病理过程.为了研究TGFβ1在这些过程中的详细发病机制,设计了针对TGFβ1的非嵌合型锤头状核酶和U1小核RNA嵌合型核酶.鉴定非嵌合型锤头状核酶和U1小核RNA嵌合型核酶的胞外以及活化型肝... 大量研究表明转化生长因子β1参与细胞的多种生理和病理过程.为了研究TGFβ1在这些过程中的详细发病机制,设计了针对TGFβ1的非嵌合型锤头状核酶和U1小核RNA嵌合型核酶.鉴定非嵌合型锤头状核酶和U1小核RNA嵌合型核酶的胞外以及活化型肝星状细胞内的活性.核酶的胞外切割反应结果证实,非嵌合型核酶的胞外活性优于U1小核RNA嵌合型核酶.进一步研究发现,U1小核RNA嵌合型核酶在转染的肝星状细胞内可以高效下调TGFβ1的表达,且其胞内活性明显强于非嵌合型核酶.这些结果表明,抗TGFβ1的U1小核RNA嵌合型核酶不仅为TGFβ1在细胞的生理和病理过程中具体作用机制的研究提供一种有效的工具,而且有望为TGFβ1相关性疾病的治疗提供一个有效手段. 展开更多
关键词 核酶 u1小核rna 转化生长因子β1 肝星状细胞 锤头状核酶 TGFΒ 活性鉴定 细胞内 嵌合 细胞外
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