rGM-CSF对U937细胞系膜MHC分子及CD86分子表达的作用

本实验研究了人重组ＧＭＣＳＦ对Ｕ９３７人单核细胞样细胞系ＨＬＡ和ＣＤ８６分子表达的调节作用。将Ｕ９３７细胞在ｒＧＭＣＳＦ１０μｇ／Ｌ培养１ｄ，ＨＬＡＤＲ分子的表达率为８３％，对照组为９１％；培养２ｄ，表达率为５１％，对照组为７８％；培养５ｄ，表达率为５３％，对照组为８１％。Ｕ９３７细胞在ｒＧＭＣＳＦ１０μｇ／Ｌ浓度下培养１ｄ，ＣＤ８６分子表达率为２％，对照组为１．６％；培养３ｄ，表达率为３．９１％，对照组为１％；培养５ｄ，表达率为５３２％，对照组为０．５８％。而ＭＨＣⅠ类分子表达率在１０μｇ／Ｌ浓度下培养５ｄ时，实验组和对照组均为１００％。以上结果显示，ｒＧＭＣＳＦ对Ｕ９３７细胞具有下调ＭＨＣⅡ类分子表达和上调ＣＤ８６分子表达的作用。ＭＨＣⅡ类分子和ＣＤ８６分子是Ｔ细胞重要的活化信号分子，因此可以说明，ｒＧＭＣＳＦ对Ｔ细胞参与的免疫应答具有重要的调节意义。

稳定表达马属动物SAMHD1蛋白的U937细胞系的建立及其抗病毒活性初步研究

为研究马属动物SAMHD1的抗病毒活性,本研究构建了稳定表达马SAMHD1(eqSAMHD1)、驴SAMHD1(doSAMHD1)的U937细胞系。利用pLPCX慢病毒表达载体构建重组质粒pLPCX-doSAMHD1-HA和pLPCX-eqSAMHD1-HA。将重组质粒和假病毒包装重组质粒(pCgp和pVSV-G)共转染于293T细胞中,制备表达SAMHD1的假病毒,将其感染人急性单核细胞白血病细胞系U937,利用嘌呤霉素筛选,建立了稳定表达doSAMHD1和eqSAMHD1的U937细胞系。经western blot鉴定,该细胞系能够稳定表达doSAMHD1和eqSAMHD1蛋白。将人类免疫缺陷病毒(HIV)和马传染性贫血病毒(EIAV)的假病毒感染该细胞系,结果显示表达eqSAMHD1和doSAMHD1的细胞系均能够显著抑制HIV假病毒复制,限制倍数分别为17~19倍和14~18倍;两种细胞系也能够抑制EIAV假病毒复制,限制倍数分别为3~4倍和2~3倍。该细胞系的建立为进一步评价和研究马属动物SAMHD1的抗病毒机制奠定了基础。

甲氨蝶呤对单核细胞样细胞系U937的生长影响及其促凋亡作用

一般认为急性髓细胞白血病 (AML)是对甲氨蝶呤 (MTX)原发耐药的恶性肿瘤。AML细胞除急性单核细胞白血病 (AML M5)细胞与MTX孵育时 ,由于不能象急性淋巴细胞白血病 (ALL)细胞一样形成足够量的长链聚谷氨酸盐甲氨蝶呤 (MTXPG) ,而被认为对MTX不敏感。为了开发对AML M5新的治疗 ,本实验采用了具有单核细胞特征的U937细胞系进行研究。细胞分别通过不同浓度 (1nmol/L - 10 0 μmol/L)MTX孵育 2 4小时或 4 8小时后 ,通过XTT法评估细胞生长抑制情况。 2 4小时的半数抑制浓度 (IC50 )为 0 .0 4 μmol/L ;4 8小时的IC50 为 0 .0 37μmol/L ,90 %细胞抑制浓度 (IC90 )为 0 .39μmol/L。为了解MTX细胞毒作用的发生机制 ,进一步分析了细胞的死亡过程。采用了系列实验 ,包括台盼蓝拒染法、流式细胞术、显微镜 (瑞氏染色法 )及DNA片段分析进行研究。结果在MTX作用后短时间内 (4或 6小时 )无明显的细胞凋亡特征出现。随 5nmol/L- 10 μmol/LMTX作用 8小时后 ,亚G1(凋亡 )峰的比率从 0 .1μmol/L的 3 2 %增加到 5 0 μmol/L的 18 2 %,S期的比率从 0 0 1μmol/L的 4 1 2 %到 10 μmol/L的 19 1%。可见到DNA片段电泳后细胞凋亡的特征性改变。MTX所引发U937细胞的生长阻滞和凋亡特征 ,提示它可用于AML

稳定表达反义ATM/PI3K细胞系U937-ASPI3K的建立

为进一步研究DNA损伤杀灭肿瘤细胞的机制 ,为增强肿瘤治疗疗效提供一种有价值的细胞模型 ,构建了高效表达ATM基因编码羧基端 10 0kD功能片段的反义cDNA ,通过转染和筛选建立稳定表达反义ATM PI3KcDNA的细胞系U937 ASPI3K。结果显示 ,构建的ATM PI3KcDNA经测序证明反向定位于表达载体 pZeoSV2 (+ )中。经转染和筛选得到稳定表达 pZeoSV(+ ) ATM PI3K的细胞系U937 ASPI3K和对照细胞系U937 pZeoSV (- ) ,前者ATM蛋白表达极度受抑制 ,后者以及淋巴瘤细胞系U937ATM蛋白的高表达未受影响。本实验为阐明细胞周期关卡 (checkpoint)在DNA损伤信号传导通路中的作用机制 。

和厚朴酚对人白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响

【目的】探讨和厚朴酚(HNK)对白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响。【方法】将U937细胞和正常外周血单核细胞分别与HNK共培养,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡形态,用噻唑蓝比色法(MTT)检测HNK对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测凋亡;罗丹明123检测线粒体膜电位;Caspase3/7活性检测试剂盒检测Caspase3/7活性;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Caspase-3、Caspase-7mRNA水平变化。【结果】HNK对U937的体外增殖有显著抑制作用,48h半数抑制浓度(IC50)为11.8μg/mL,而对正常外周血单核细胞的IC50为40.3μg/mL,AnnexinV/PI双标染色显示,细胞凋亡与和厚朴酚呈浓度和时间依赖相关。HNK明显降低U937细胞线粒体膜电位,增加Caspase3/7活性及mRNA表达水平,但对正常外周血单核细胞的增殖抑制和凋亡作用不明显。【结论】HNK可能通过激活caspase-3/7抑制U937细胞增殖、诱导U937细胞凋亡。

EKI-785对U937细胞系的生长调节作用

目的探讨erbB家族受体在急性单核细胞白血病细胞系U937中的表达及其对细胞生长的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测erbB家族成员在U937细胞中的表达情况,Western blot检测erbB2在蛋白水平的表达。以erbB受体抑制剂EKI-785处理细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验并绘制细胞生长曲线,观察细胞的生长变化情况；应用Annexin V/PI双染和流式细胞仪计数,观察细胞是否发生凋亡；Western blot检测细胞增殖生长信号的变化。结果在U937细胞中,除了erbB1外,其他erbB受体均有表达,且erbB2有蛋白水平的表达。经过1、2、4和8μmoL/L EKI-785处理48h后,U937细胞的生长受到不同程度的抑制,抑制率分别为(10．49±3．69)%、(13．79±2．13)%、(31．42±3．90)%和(44．05±1．56)%,并呈现出比较明显的浓度依赖关系。EKI-785诱导U937细胞发生了早期凋亡,4μmol/L EKI-785处理U937细胞48和72h,Annexin- V^+/PI^-标记的早期凋亡细胞所占的比例分别为相应对照组的2．03倍和6．64倍。经4μmol/L EKI- 785作用24、48、72h后,磷酸化的MEK和Akt蛋白水平随着时间延长不断下降,72h时磷酸化的MEK和Akt几乎消失。结论erbB家族受体很可能在某些类型的白血病发生中发挥重要作用,有望成为这些白血病的新治疗靶点,EKI-785具有治疗白血病的应用前景。

人髓性白血病细胞系U937定向克隆cDNA表达文库的构建及其意义

本研究的目的是构建髓性白血病U937细胞系表达型cDNA文库 ,为肿瘤抗原的筛选奠定工作基础。提取U937细胞总RNA ,分离mRNA ,反转录合成双链cDNA ,消平cDNA末端 ,连接EcoRⅠ适配子 ,磷酸化EcoRⅠ适配子 5′端 ;XhoⅠ酶切后 ,丙烯葡聚糖凝胶 S4 0 0柱除去小于 4 0 0bpcDNA片段 ,与λZAP表达载体连接 ,包装蛋白包装后建成cDNA文库 ;取出 1μl倍比稀释感染大肠杆菌XL1 Blue MRF′ ,测定文库大小、重组率 ;随机挑取 10个噬斑 ,在ExAssist辅助性噬菌体的作用下 ,释放出PBK CMV噬菌粒 ;感染大肠杆菌XLOLR ,铺于卡那霉素抗性的LB平板 ;挑取克隆 ,37℃震摇过夜 ;抽提质粒 ,经EcoRI和XhoI酶切后 ,初步确定片段的大小及多样性。结果 :构建成含 2 .87× 10 6重组子的U937细胞cDNA文库 ,重组子平均插入外源片段长约 1.7kb。结论 :所建文库合格 ,适合用于筛选目的cDNA克隆。

汉防己甲素对人单核细胞样细胞系U937的影响

本文报导中药汉防己甲素（ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ，Ｔｅｔ）对人单核细胞样细胞系Ｕ９３７的形态、细胞化学特性以及增殖分化的影响。经浓度为５×１０－３ｍｇ／ｍｌ的Ｔｅｔ作用５天后，Ｕ９３７细胞的形态、细胞化学特性接近于单核／巨噬细胞。３Ｈ－ＴｄＲ掺入证明Ｔｅｔ对Ｕ９３７细胞的ＤＮＡ合成有抑制作用。银染核仁组织者区（Ａｇ－ＮＯＲ）显示细胞核内Ａｇ－ＮＯＲ计数亦明显下降。

U937泡沫细胞模型的建立

为建立一个新的人单核细胞来源的泡沫细胞模型，将Ｕ９３７细胞与８０ｍｇ／Ｌ氧化型低密度脂蛋白孵育４８ｈ，应用高效液相色谱检测发现细胞内胆固醇和胆固醇酯增加，胆固醇酯含量大于总胆固醇含量的５０％；应用光镜和透射电镜观察发现细胞胞浆内出现大量的红染颗粒或脂质空泡。提示Ｕ９３７细胞与８０ｍｇ／Ｌ氧化型低密度脂蛋白孵育４８ｈ后，成功建立了人类单核细胞源性泡沫细胞。

和厚朴酚抑制白血病U937细胞侵袭及血管新生作用

目的探讨和厚朴酚(HNK)对人白血病U937细胞侵袭及血管新生作用的影响及其可能的分子机制。方法应用不同浓度的HNK处理U937细胞不同时间,用MTT法检测HNK对细胞增殖抑制作用;基质黏附试验检测HNK对U937细胞黏附功能的影响;TranswellTM小室检测HNK对U937细胞侵袭抑制作用。实时定量PCR(qRT-PCR)检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA水平变化。ELISA检测HNK处理U937细胞后上清VEGF蛋白表达水平。结果 HNK对U937的体外增殖有显著抑制作用,呈剂量和时间依赖性。低浓度HNK能够抑制U937细胞的黏附及侵袭能力。不同浓度HNK处理U937细胞24 h后,细胞VEGF、VEGFR1及MMP-9表达水平呈剂量依赖性下调。结论 HNK可能通过抑制VEGF、VEGFR1及MMP-9表达,抑制U937细胞侵袭及血管新生功能。

青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡的研究

目的:研究青蒿琥酯体外诱导U937细胞凋亡及其过程中细胞内游离钙的变化。方法:采用光镜、透射电镜技术、DNA片段化电泳、流式细胞术对青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡进行了观察,并应用激光共聚焦显微镜技术检测凋亡过程中细胞内游离钙浓度的变化。结果:6.250mg/L的青蒿琥酯可诱导U937细胞凋亡,作用于细胞后30min,Ca2+浓度即明显升高,1h达高峰,48h仍维持在较高水平。结论:青蒿琥酯可诱导U937细胞凋亡,细胞胞质内Ca2+是青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡信号传导过程中重要的信号分子。

构建shRNA慢病毒载体抑制U937细胞株VEGFR-1基因的表达

目的构建针对血管内皮生长因子受体1(vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR-1)基因的siRNA前体表达载体,鉴定其对U937细胞株VEGFR-1基因干扰效率。方法体外设计并合成针对VEGFR-1基因的慢病毒shRNA干扰载体,通过PCR及测序证实载体构建成功。将慢病毒颗粒以最适滴度转染人单核白血病细胞株U937,应用Real-Time PCR、Western印迹法检测抑制效率。结果构建的慢病毒载体的序列通过PCR、测序等鉴定,与设计序列相同。Real-Time PCR检测显示U937细胞干扰组VEGFR-1 mRNA表达率下降75.98%,Western印迹法显示U937细胞干扰组VEGFR-1蛋白表达量较空白载体对照组明显减少。结论构建的shRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制U937细胞株VEGFR-1基因的表达。

应用U937细胞泡沫化模型检测人血高密度脂蛋白生物学功能

目的 准确检测人血高密度脂蛋白（HDL）的生物学功能。方法 采用U937细胞泡沫化模型，检测HDL逆向转运细胞内胆固醇（Ch）的生理功能。用 Brad Ford方法检测蛋白质（Pro）含量，Ch试剂盒检测细胞内 Ch含量，并比较不同剂量HDL转移出细胞内Ch的量。结果 在一定的HDL浓度范围内相关性好（r≥0．98），重复性高（CV=6．l％），回收率为91．8％－110．5％。结论 该方法能更直观地反映HDL转运胆固醇的功能。且具有使用人源细胞、操作简便和易于推广应用的特点。

人类bcl-2 cDNA在哺乳类细胞中的表达及反义bcl-2对U937细胞生物学行为的影响(摘要)

人类ｂｃｌ┐２ｃＤＮＡ在哺乳类细胞中的表达及反义ｂｃｌ┐２对Ｕ９３７细胞生物学行为的影响（摘要）何凤田１朱锡华１本文借助逆转录病毒载体将人类ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ转染于三种哺乳类细胞，建立了组成性稳定表达ｂｃｌ－２的细胞模型，观察了模型细胞生长特性及对某...

rhTNF-α,rhIL-1-α,PHA-LCM和顺式维甲酸对U_(937)细胞诱导分化的体外研究

观察了3种细胞因子和顺式维甲酸(c-RA)在体外对U_(937)细胞增殖与分化的影响。结果表明:rhTNF-α、PHA-LCM和c-RA均能抑制U_(937)细胞的增殖并诱导其向成熟细胞分化,作用方式呈剂量和时间依赖性,而且rhTNF-α和c-RA合用后作用增强。rhIL-1-α单独对U_(937)细胞的增殖与分化没有影响,但可增强c-RA的诱导分化作用。[~3H]-TdR掺入实验表明,rhTNF-α、PHA-LCM和c-RA通过抑制U_(937)细胞合成DNA而使其增殖停滞。结果揭示:合理联合应用分化诱导剂能互相增强作用,对进一步提高白血病细胞的诱导分化效应以及临床治疗有一定的参考价值。

L929细胞条件培养液减轻氧化应激引起的U937细胞DNA断裂损伤

目的揭示巨噬细胞集落刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）的抗动脉粥样硬化作用是否与其保护单核细胞免受过氧化损伤有关。材料与方法用富含Ｍ－ＣＳＦ的Ｌ９２９细胞条件培养液（Ｌ９２９－ＣＭ）作为Ｍ－ＣＳＦ来源，以凝胶电泳、ＤＮＡ断裂定量等方法观察了Ｍ－ＣＳＦ对叔丁基氢过氧化物（ｔｂＯＯＨ）诱导的Ｕ９３７细胞ＤＮＡ断裂损伤的影响。结果ｔｂＯＯＨ可以引起Ｕ９３７细胞的ＤＮＡ断裂损伤，且损伤随ｔｂＯＯＨ作用时间的延长而趋明显；而Ｌ９２９－ＣＭ可以减轻ｔｂＯＯＨ诱发的Ｕ９３７细胞ＤＮＡ断裂损伤。结论Ｍ－ＣＳＦ对单核细胞具有一定的保护作用，可减轻其氧化损伤。

二甲双胍抑制急性髓系白血病细胞增殖

目的探讨降糖药物二甲双胍对人急性髓系白血病细胞系U937细胞增殖的作用。方法将浓度梯度的二甲双胍(0、5、10、20、40、60 mmol·L^(-1))分别作用于U937细胞24、48 h,采用CCK-8试剂盒检测U937细胞活力,Annexin-V/PI assay试剂盒检测U937细胞凋亡率,JC-1检测U937细胞线粒体膜电位下降水平。同时基于细胞活力试验检测结果,将上述浓度梯度的二甲双胍分别作用于U937细胞48 h,采用Western blot检测Bcl-2蛋白表达水平。结果二甲双胍作用24 h对U937细胞增殖抑制作用较弱、无明显杀伤作用;作用48 h对U937细胞有抑制细胞生长、促进凋亡、降低线粒体膜电位作用,同时显著降低U937细胞Bcl-2蛋白水平。结论二甲双胍可杀伤人急性髓系白血病细胞系U937细胞。二甲双胍抗白血病作用可能与其下调线粒体膜电位、抑制Bcl-2蛋白表达有关。

内毒素对人巨噬细胞系U937生物学性状和生长因子分泌能力的影响

目的 探讨不同浓度的内毒素 /脂多糖 (LPS)对人巨噬细胞系U937生物学性状和生长因子分泌能力的影响。 方法 分别以 0 .0、0 .1、1.0、10 .0、5 0 .0、10 0 .0 μg/ml的LPS刺激体外培养的U937,作用 2 4h后运用四氮噻唑蓝 (MTT)法测定细胞增殖活力 ,应用流式细胞仪测定细胞凋亡率 ,并用酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清中转化生长因子 β1(TGF β1)和血管内皮生长因子(VEGF)浓度的变化。 结果 与LPS为 0 .0 μg/ml时比较 ,当其浓度为 0 .1～ 10 0 .0 μg/ml时可刺激U937细胞凋亡、促进其分泌TGF β1(P <0.0 5～ 0.0 1),其中低浓度 (0 .1～ 10 .0 μg/ml)的LPS可促进U937增殖 (P <0.0 5～ 0.0 1),但对VEGF的分泌无明显影响 (P >0.0 5);高浓度 (5 0 .0、10 0 .0μg/ml)的LPS对U937的增殖无促进作用 (P >0.0 5 ),但能提高VEGF的分泌能力 (P <0.0 1)。结论 LPS可激活U937并促使其分泌TGF β1,刺激浓度以 0 .1～ 10 .0 μg/ml为宜 ;LPS仅在较高浓度时能促进U937细胞分泌VEGF。

Tie2基因过表达对单核细胞功能的影响

目的:探讨过表达Tie2基因后单核细胞功能的变化及对内皮细胞增殖、迁移、小管形成的影响,初步研究TEMs(Tie2-expressing monocytes)促血管生成的机制。方法:建立过表达Tie2单核细胞系,荧光倒置显微镜下观察U937细胞的感染情况,RT-PCR、Western blot分别检测感染后U937细胞Tie2 mRNA和蛋白水平的表达情况;实时定量PCR检测感染后空载组NC-L.V-U937和实验组TEK-L.V-U937细胞mRNA水平表达的差异;ELISA检测NC-L.V-U937和TEK-L.V-U937细胞上清中细胞因子分泌的异同;增殖、迁移、小管形成实验分别观察TEK-L.V-U937细胞对内皮细胞增殖、迁移、小管形成的影响。结果:首次建立了转染Tie2基因的单核细胞系;RT-PCR及Western blot结果显示,与空载组NC-L.V-U937细胞相比,实验组TEK-L.V-U937细胞在mRNA和蛋白水平Tie2的表达显著增加,而NC-L.V-U937细胞几乎不表达Tie2;Real time-PCR结果显示,TEK-L.V-U937细胞IL-8的表达较空载组显著增加(P<0.01),IL-10的表达也有所上升(P>0.05);与空载组相比,TEK-L.V-U937细胞IL-8蛋白分泌明显增多(P<0.05),VEGFA蛋白分泌量也有上升的趋势(P>0.05),但两组细胞几乎都无EGF的分泌;TEK-L.V-U937的条件培养基刺激内皮细胞形成的小管数较多,IL-8中和抗体能抑制内皮小管的形成;NC-L.V-U937、TEK-L.V-U937饥饿培养上清对内皮细胞的迁移作用不明显(P>0.05);增殖的第3天,与空载组相比,TEK-L.VU937的条件培养基能显著地引起内皮细胞的增殖(P<0.05)。结论:过表达Tie2基因后显著地增加U937单核细胞系IL-8的表达,并进一步促进了内皮细胞的增殖与小管形成。

阿托伐他汀对oxLDL诱导泡沫细胞Lkn-1表达的影响

目的观察阿托伐他汀对ox-LDL诱导U937细胞形成泡沫细胞过程中Lkn-1表达的影响,探讨阿托伐他汀抗AS的作用机制。方法在由0.1μmol/L佛波脂(PMA)诱导分化人U937巨噬细胞中加入100 mg/Lox-LDL及不同浓度(0.1、1、10μmol/L)的阿托伐他汀共同孵育24 h,分别用酶联免疫吸附试验(ELISA)和RT-PCR方法检测培养细胞上清中Lkn-1的表达变化。结果 ox-LDL组较正常对照组Lkn-1的表达明显增加(P<0.05)。给药各组较ox-LDL组Lkn-1明显减少(P<0.05)。且随阿托伐他汀浓度的增加Lkn-1表达呈逐渐减少的趋势(P<0.05)。结论阿托伐他汀能抑制ox-LDL诱导U937细胞系形成泡沫细胞过程炎症因子Lkn-1的表达和分泌,可能为其抗动脉粥样硬化的重要机制之一。