食管癌细胞抗失巢凋亡基因UBCH7的发现与鉴定

失巢凋亡(Anoikis)是细胞失去与细胞外基质(Extra-cellular matrix,ECM)粘附时发生的特殊形式的凋亡,是机体维持组织稳态的关键机制之一。抗失巢凋亡能力的获得是肿瘤细胞发生远处转移的前提条件之一。为了鉴定与食管癌细胞抗失巢凋亡相关的基因,文章首先构建食管癌细胞系的逆转录病毒文库,感染对失巢凋亡敏感的NIH3T3细胞,利用感染病毒cDNA文库的混合细胞系进行软琼脂集落形成实验,挑取在悬浮条件下仍可生长成为较大集落的细胞单克隆(潜在具有抗失巢凋亡能力的细胞),通过逆转录病毒载体特异的引物PCR扩增失巢凋亡抗性克隆基因组中的插入cDNA片段,以此获得食管癌细胞系cDNA文库中潜在的具有失巢凋亡抗性的基因。经测序发现其中一个失巢凋亡克隆中整合的cDNA片段包括人UBCH7/UBE2L3基因全长的编码序列(开放阅读框)。利用携带pMSCV-UBCH7的逆转录病毒感染NIH3T3细胞进行验证,结果显示细胞失巢凋亡抗性增强,并且在具有高转移潜能的食管癌细胞系MLuC1中降调UBCH7表达可减弱其失巢凋亡抗性。这些结果表明,UBCH7/UBE2L3是一个与食管癌失巢凋亡抗性相关的基因。

乳腺浸润性导管癌组织98例UbcH7表达临床意义

目的泛素交联酶L3(ubiquitin conjugating enzyme L3,UbcH7)参与了p53结合蛋白1(p53binding protein,53BP1)的蛋白酶体降解途径,且在多种恶性肿瘤中存在过表达,然而其与乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)的研究尚不多见。本研究旨在探讨UbcH7在IDC中的表达水平及临床意义。方法收集中国医科大学附属第一医院乳腺外科2012-01-01-2013-06-01手术切除的乳腺IDC组织及癌旁组织标本,采用免疫组化、实时荧光定量聚合酶链反应法(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测UbcH7在IDC及癌旁组织中的表达情况,统计分析UbcH7表达与IDC患者临床病理特征及预后的关系。结果 98例乳腺IDC组织中UbcH7阳性高表达率为62.2%(61/98),高于癌旁组织的7.14%(7/98),差异有统计学意义,χ~2=32.832,P=0.000 1;UbcH7高表达与淋巴结转移(χ~2=15.675,P=0.000 1)和TNM分期(χ~2=9.188,P=0.002 6)有关联,而与患者年龄(χ~2=0.296,P=0.618 2)、组织学分级(χ~2=0.382,P=0.826 0)、肿瘤最大直径(χ~2=0.549,P=0.5309)、雌激素受体(χ~2=1.812,P=0.253 8)、孕激素受体(χ~2=0.539,P=0.526 7)、人表皮生长因子受体2(χ~2=0.078,P=0.832 4)及患者月经状态(χ~2=1.843,P=0.212 9)无关联;UbcH7高表达与低表达患者5年生存率分别为73.8%和91.9%,差异有统计学意义,χ~2=5.052,P=0.024 6。结论 UbcH7在乳腺IDC组织中表达上调,且UbcH7过表达可能参与IDC的发生、发展过程,并与侵袭转移及不良预后有关联。