UBE-LIF与后路病灶清除植骨融合内固定术治疗腰椎布氏杆菌性脊柱炎的临床疗效比较

目的对比UBE-LIF(unilateral biportal endoscopic technique with transforaminal lumbar interbody fusion)技术行病灶清除联合经皮椎弓根螺钉内固定术与经典后路病灶清除植骨融合内固定术治疗腰椎布氏杆菌性脊柱炎(LBS)的安全性及临床疗效。方法回顾性分析甘肃省中医院脊柱骨科2020年1月至2022年1月收治的32例LBS患者的临床资料,按术式分为UBE-LIF组(n=15)和开放组(n=17)。记录并分析两组的一般资料、手术相关指标及术后病理HE染色;根据术前、术后1周及术后1、3、6个月和1年的红细胞沉降率(ESR)和C反应蛋白(CRP)变化,腰痛疼痛视觉模拟评分(VAS)、日本骨科协会评分(JOA)、Oswestry功能障碍指数(ODI)评估患者临床恢复情况;影像学方法测量术前及末次随访时腰椎前凸角(LL)和椎间隙高度(DH),并采用Suk分级标准评估椎间植骨融合情况。结果两组患者均顺利完成手术,且均未发生严重术后并发症。两组患者的性别、年龄、手术节段、手术时间、术前ESR和CRP水平、术前VAS、JOA评分及ODI指数、术前LL和DH等资料比较差异均无统计学意义(P>0.05);UBE-LIF组术中出血量、术后引流量、术后下床时间、术后住院时间明显少于开放组(P<0.001);术中取病变组织行病理学检查,均符合布氏杆菌病改变。两组患者均获随访,随访时间12~18个月,平均14.8个月。两组患者的术后各时间点VAS、JOA评分和ODI指数均较术前明显改善(P<0.05);其中两组在术后1周差异较为明显:UBE-LIF组VAS评分低于开放组(P<0.01),两组CRP均较术前升高且UBE-LIF组升高水平明显低于开放组(P<0.001),两组ESR较术前无明显差异(P>0.05);术后其余各时间点两组间VAS、JOA评分和ODI指数、CRP及ESR比较差异无统计学意义(P>0.05)。末次随访时影像学检查示,UBE-LIF组椎间植骨总体融合率为93.3%,开放组为94.1%,差异无统计学意义(χ^(2)=0.246,P=0.884);两组LL和DH均较术前显著改善(P<0.01),两组手术前后差值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论两种术式治疗LBS均安全有效;与后路病灶清除植骨融合内固定术相比,UBE-LIF技术联合经皮椎弓根螺钉内固定术具有术中视野清晰、出血量少、术后早期恢复更快、术后住院时间更短等优势,是一种可行的微创治疗LBS的手术方式。

高表达UBE2S通过增加癌细胞干性促进肝癌的进程机制

目的探究UBE2S在肝癌微环境不同细胞类型的特异性表达及对肝癌细胞干性的影响。方法使用TCGA数据库分析肝癌中UBE2S转录水平及其启动子甲基化水平差异,使用CPTAC数据库分析UBE2S蛋白水平差异。使用TISCH单细胞测序数据挖掘UBE2S在不同细胞类型中的表达,并分析细胞通讯的强度以及细胞群各自的关键转录因子。免疫组化验证UBE2S在肝癌组织中的表达;多色免疫荧光检测UBE2S在肝癌细胞以及T细胞的表达情况。利用shRNA敲低肝癌细胞HCC-LM3中的UBE2S,分为shCtrl(对照组)、shUBE2S-1(敲低组1)、shUBE2S-2(敲低组2)3个组,利用克隆形成实验、悬浮成球实验检测UBE2S敲低对HCC-LM3干性影响。结果UBE2S在TCGA数据库中非配对肿瘤组织中高表达(P<0.001),配对肿瘤组织中也高表达(P<0.001),随着肿瘤分级增高,转录水平逐渐增高(P<0.001);在CPTAC数据库中肝癌组织UBE2S蛋白水平表达也增高(P<0.001);肝癌中UBE2S启动子甲基化水平降低(P<0.001);TP53突变组UBE2S转录水平更高(P<0.001)。单细胞测序结果显示,UBE2S在T细胞等细胞群高表达;内皮与上皮及成纤维细胞之间的细胞交互强度较高,SMAD1等转录因子可能是Tprolif细胞关键转录因子。与正常组织相比,UBE2S在肝癌组织高表达;且在肝癌细胞和T细胞中均有较高表达。克隆形成实验显示:与shCtrl组相比,敲低UBE2S能减少肝癌细胞克隆形成数目(shUBE2S-1,P<0.05、P<0.01;shUBE2S-2,P<0.01、P<0.05);悬浮成球实验显示:与shCtrl组相比,敲低UBE2S能减少肝癌细胞肿瘤球形成数目(shUBE2S-1,P<0.05、P<0.01;shUBE2S-2,P<0.01、P<0.01)。结论UBE2S在肝癌组织T细胞中高表达,与预后不良相关,且其能促进肝癌细胞干细胞特性。

UBE2L6在卵巢癌中的表达及其预后价值

目的探讨UBE2L6基因在卵巢癌组织中的表达,并分析其与患者预后的关系。方法收集2014年7月至2022年2月在山西白求恩医院住院治疗的150例卵巢癌患者及因子宫腺肌症进行全子宫+双侧附件切除的患者25例,采用免疫组化SP法检测卵巢组织中UBE2L6蛋白的表达情况,比较UBE2L6蛋白在卵巢癌组织与正常卵巢组织中的表达差异;并分析UBE2L6蛋白表达与卵巢癌患者临床病理特征之间的关系;通过χ2检验、COX风险回归分析筛选影响卵巢癌患者无进展生存期的独立危险因素,并采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。基于基因表达在线数据库分析UBE2L6表达与卵巢癌临床病理指标相关性,通过Kaplan-Meier数据库检索UBE2L6表达与卵巢癌预后的相关性;利用京都基因与基因组百科全书富集分析预测基因功能;通过肿瘤免疫估计资源(TIMER)数据库分析UBE2L6在卵巢癌高表达与局部免疫浸润的相关性。结果与正常卵巢组织相比,UBE2L6在卵巢癌中高表达(P<0.05),与患者不良预后相关;COX风险回归模型分析显示,UBE2L6高表达是卵巢癌无进展生存期的独立危险因素(P<0.05)。基因富集分析显示UBE2L6可能通过炎症通路影响卵巢癌的发生发展及预后;TIMER数据库表明UBE2L6表达水平与B细胞(P=9.87×10^(-11))、CD8+T细胞(P=9.64×10^(-13))、中性粒细胞(P=2.13×10-22)、树突状细胞(P=6.50×10-15)及CD4^(+)T细胞(P=3.51×10^(-4))呈正相关,与肿瘤纯度呈负相关(P=7×10-8)。结论UBE2L6可能通过影响免疫细胞进而导致不良预后,其可能是卵巢癌治疗的潜在靶点。

NEDD8结合酶UBE2F调控肺腺癌转移的分子机制研究

目的:探究NEDD8结合酶UBE2F对肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)转移的影响。方法:利用TIMER2.0、UALCAN、HPA等数据库分析UBE2F在肺腺癌中的表达情况;利用Kaplan-MeierPlotter数据库分析UBE2F表达与肺腺癌生存率的关系;运用CRISPR/Cas9技术构建UBE2F敲除的肺腺癌细胞系,并构建UBE2F敲除的裸鼠肺腺癌转移瘤模型,验证UBE2F敲除对肺腺癌转移的影响;通过细胞划痕实验以及Transwell迁移和侵袭实验检测UBE2F敲除对肺腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响;Westernblot法和RealtimePCR法检测下调UBE2F表达对上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)转录因子Snail表达的影响。结果:多个数据库分析表明,UBE2F在肺腺癌中高表达,且高表达患者比低表达患者具有更好的预后;体内实验表明,与对照组相比,UBE2F敲除后裸鼠肺表面转移的小结节数目显著增多(P<0.05);细胞划痕实验以及Transwell实验表明,UBE2F敲除增强肺腺癌细胞的迁移和侵袭能力,差异具有统计学意义(P<0.05);Westernblot和Re-altimePCR结果显示,UBE2F敲除升高EMT转录因子Snail蛋白水平和mRNA水平。结论:敲除UBE2F诱导Snail积聚,进而导致肺腺癌细胞的侵袭和转移。

基于公共数据库挖掘UBE2A在肝细胞癌中的表达与调控及其临床意义

目的:探讨泛素结合酶2A(Ubiquitin binding enzyme 2A,UBE2A)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达与调控因子、预后及其与免疫细胞浸润的关系。方法:通过Timer2.0数据库初步分析UBE2A在不同肿瘤中肿瘤和正常组织的表达差异;进一步使用GEPIA数据库分析肝细胞癌中UBE2A的表达情况及其与预后的关系。在GEO数据库中筛选肝细胞癌数据集(GSE108724)中差异表达miRNA,并利用mirDIP工具构建gene-miRNA调控网络。使用UALCAN数据库探索UBE2A与临床病理特征的关系。Timer数据库分析出肝细胞癌中UBE2A与免疫细胞浸润的关系。结果:肝细胞癌组织中UBE2A基因表达高于正常组织(P<0.05),UBE2A高表达患者预后较差(P=0.045)。hsa-miR-106b-5p、hsa-miR-375、hsa-miR-93-5p在肝细胞癌中参与UBE2A的调控。UBE2A的表达与年龄、性别、淋巴结转移无关(P>0.05),与肿瘤分期相关(P<0.05)。UBE2A的表达与肝细胞癌中B细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞的浸润水平呈正相关。结论:UBE2A有望成为肝细胞癌诊断的新型标志物和治疗的潜在分子靶点。

高表达UBE2B在食管癌中的临床意义及其与免疫浸润相关性

目的:研究泛素结合酶E2B(UBE2B)在食管癌中的临床意义及其与免疫浸润相关性。方法:通过UALCAN在线工具分析UBE2B在食管癌中的表达;PrognoScan、GEPIA、Kaplan-Meier Plotter三种工具进行UBE2B表达量与食管癌患者生存率相关性分析;TCGA数据库、GEO数据库、CCLE数据库分析UBE2B对食管癌放化疗的影响;TIMER结合GEPIA进行UBE2B与食管癌肿瘤免疫细胞浸润相关性分析。结果:UBE2B在食管癌中高表达,而且与食管癌患者的病理参数、生存率显著相关;高表达UBE2B与食管癌铂类放化疗反应显著相关;高表达UBE2B与食管癌中性粒细胞及淋巴细胞浸润正相关。结论:高表达UBE2B影响食管癌患者的预后、放化疗反应及肿瘤免疫浸润。

UBE2C基因在肾透明细胞癌中的临床预后价值及分子机制探究

目的 探讨泛素结合酶E2C(UBE2C)在肾透明细胞癌(KIRC)中的表达模式、临床预后价值以及调节KIRC的分子机制。方法 通过肿瘤基因组图谱数据库(TCGA)和人类蛋白质表达图谱数据库(HPA)分析UBE2C基因在KIRC组织和正常组织中的表达差异。结合KIRC患者的临床信息,利用单因素及多因素Cox回归模型分析UBE2C基因在KIRC患者中的预后价值。通过基因富集分析(GSEA)了解UBE2C基因调控KIRC的分子机制。计算KIRC患者中的浸润免疫细胞含量,并评估UBE2C基因表达水平与免疫细胞浸润含量的相关性。结果 KIRC组织中的UBE2C基因和蛋白表达水平均高于正常肾组织(P<0.05)。KIRC组织中UBE2C表达与肿瘤位置、组织学分级、病理分期及TNM分期有关(P<0.05)。单因素及多因素Cox回归分析结果显示,UBE2C可作为预测KIRC患者总生存期(OS)的独立预后因素(P<0.05)。GSEA结果表明,UBE2C可能参与调节细胞因子-细胞因子受体相互作用、细胞周期检查点、ECM糖蛋白等多条信号通路。UBE2C基因表达水平与KIRC肿瘤微环境中Treg细胞、T细胞、Th17细胞、B细胞、CD8+T细胞和巨噬细胞浸润等显著相关。UBE2C同免疫检查点分子PDCD1(PD1)、CTLA4、CD27、LAG3等表达水平也显著相关。结论 UBE2C可作为KIRC患者的一个风险预后因子,同时UBE2C可能作为KIRC治疗的潜在靶点。

磁共振SWI序列联合血清CXCL5、UBE2C在脑胶质瘤术前分级中的诊断价值

目的探究磁共振磁敏感加权成像(SWI)序列联合血清CXC趋化因子配体5(CXCL5)、泛素耦联酶2C(UBE2C)在脑胶质瘤术前分级中的诊断价值。方法选取2021年5月至2022年4月在我院诊治的120例脑胶质瘤患者,根据世卫组织中枢神经系统肿瘤分级标准分为低级别组50例(Ⅰ~Ⅱ级),高级别组70例(Ⅲ~Ⅳ级)。所有患者术前均行磁共振SWI序列检查进行肿瘤磁敏感信号强度(ITSS)评分,并利用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清CXCL5、UBE2C水平;受试者工作特征(ROC)曲线分析磁共振SWI序列联合血清CXCL5、UBE2C水平对脑胶质瘤术前分级的诊断价值。结果与低级别组相比,高级别组脑胶质瘤患者血清CXCL5、UBE2C水平均显著升高(P<0.05);与低级别组相比,高级别组脑胶质瘤患者ITSS评分明显升高(P<0.05);血清CXCL5、UBE2C、ITSS评分诊断脑胶质瘤术前分级的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.656、0.791、0.761;磁共振SWI序列联合血清CXCL5、UBE2C检测诊断脑胶质瘤术前分级的AUC为0.892,均优于其各自单独诊断(Z联合检测-CXCL5=4.108,P<0.001;Z联合检测-UBE2C=2.020,P=0.022;Z联合检测-ITSS评分=2.385,P=0.009)。结论脑胶质瘤患者术前血清CXCL5、UBE2C水平升高,对脑胶质瘤术前分级具有一定诊断价值,联合磁共振SWI序列可明显提高诊断脑胶质瘤术前分级的价值。

半滑舌鳎Cs-UBE2D4基因的克隆、表达模式及启动子活性

泛素-蛋白酶体系统作为重要的蛋白质修饰途径,参与多个生物学过程,其中泛素结合酶E2作为关键酶可以决定泛素化对靶蛋白的影响。为了探究泛素结合酶E2在半滑舌鳎雌性性腺发育中的作用,本研究克隆了半滑舌鳎Cs-UBE2D4基因的开放阅读框ORF,检测了该基因在不同组织和不同发育阶段性腺中的表达模式;构建了其启动子报告基因载体(pGL3-Cs-UBE2D4)并进行了启动子活性分析。Cs-UBE2D4开放阅读框为360 bp,编码119个氨基酸,含有保守的泛素结合酶E2结构域。荧光定量PCR结果显示,Cs-UBE2D4在雌鱼的各组织中广泛表达,其中在卵巢和肝脏中表达量较高,而在雄鱼中几乎检测不到表达;在卵巢各发育阶段中,该基因的表达量从90日龄开始上调,6月龄达到峰值,之后开始下调,在1.5龄时表达量最低,在3龄时表达量有所回升,其中6月龄表达量为90日龄表达量的1.97倍。双荧光素酶活性检测结果显示,Cs-UBE2D4启动子具有较强的转录活性。本实验将为进一步开展Cs-UBE2D4基因对半滑舌鳎卵巢发育和性别调控相关机制的研究提供理论依据。

UBE2S在消化系统肿瘤中的研究进展

泛素结合酶2S (UBE2S)作为泛素结合酶(E2)家族成员之一,是一种细胞周期调控的泛素结合酶,在消化系统肿瘤中特异性表达,且表达水平明显高于癌旁组织,同时UBE2S高表达患者预后较差。研究表明UBE2S在口腔鳞癌、食管癌、胃癌、肝细胞癌、胆囊癌和胰腺癌等消化系统肿瘤中发挥促癌的作用,因此UBE2S可能成为消化系统肿瘤早期诊断及预后预测的标志物。本文就UBE2S的结构和功能及其与消化系统肿瘤的研究进展作一综述,为诊治消化系统肿瘤提供理论依据。

UBE与PEID治疗腰椎间盘突出症的临床疗效

探讨对腰椎间盘突出症疾病采取UBE(单边双通道内镜)与PEID(经皮内镜椎板间入路椎间盘切除术)进行治疗的价值。方法 所选择的对象是患有腰椎间盘突出症的70例患者,来院进行治疗的时间最早和最晚分别为2021.04月和2023.01月,采用双盲法对纳入的患者实施平均分组处理,其中对照组使用UBE治疗,而观察组则使用PEID治疗,分析不同的手术方案所得出结果。结果 经过比较2组的相关指标,在手术用时、术后住院用时、术前术后疼痛感以及功能障碍相关指标上,对照组和观察组都没有差异存在(P>0.05);但是和对照组在术中透视次数进行比较,发现观察组较高(P<0.05)。结论 使用UBE以及PEID治疗后二者所取得的疗效基本相同,都能够使得患者的疼痛感下降,功能障碍得到改善,并且在治疗所花费的时间上也没有差异,因此对于治疗方案的选择,可以结合患者的实际情况来使用,使得患者的治疗需求得到满足。

小鼠泛素结合酶UBE2W的抗体制备及组织表达谱分析

泛素结合酶(E2)是蛋白泛素化修饰所需的第二个连接酶,在泛素转移和底物特异性识别过程中发挥着重要作用。UBE2W是一种新发现的E2酶,其果蝇属同源蛋白可能在光转导或视网膜变性过程中发挥作用,鼠和人同源蛋白功能未见报道。生物信息学分析UBE2W鼠源氨基酸序列,发现UBE2W具有典型的UBC结构域并在多种物种高度保守。通过构建UBE2W原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化了GST-UBE2W融合蛋白。以此纯化蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备抗UBE2W多抗血清,并利用制备的UBE2W抗原柱亲和纯化UBE2W多抗。为了检测纯化抗体特异性,在真核细胞中瞬时表达了myc-UBE2W融合蛋白,分别用myc单抗和UBE2W多抗进行Western blotting分析,结果表明获得了特异性的UBE2W抗体。利用此特异性抗体在小鼠脑、心脏、肾脏、肝脏、肺、肌肉、脾脏和睾丸等组织中均检测到了UBE2W的表达,且在小鼠睾丸中成年期表达最高。

基于生物信息学途径评估UBE2家族及UBE2T基因在肺腺癌中的表达及临床意义

【目的】探究泛素结合酶E2家族和泛素结合酶E2T(UBE2T)在肺腺癌中的表达情况及其与临床病理特征之间的关系。【方法】利用linkedomics平台进行UBE2C、UBE2M、UBE2S、UBE2T、UBE2V2 mRNA表达水平与肺腺癌临床特征之间的关系分析,对总生存时间(OS;Cox回归检验)、总分期(Kruskal-Wallis H检验)、T分期(Kruskal-Wallis H检验)、N分期(Kruskal-Wallis H检验)及M分期(Wilcox秩和检验)进行差异比较。运用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库获取UBE2T基因在肺腺癌组织和癌旁组织中的表达信息,将结果进行两独立样本t检验。利用GSEA软件进行KEGG通路及富集分析。【结果】UBE2C、UBE2M、UBE2S、UBE2T、UBE2V2 mRNA表达量与肺腺癌的临床病理特征存在相关关系。其中,UBE2T高表达者其OS较短,TNM分期较晚者UBE2T呈高表达,差异均具有统计学意义(P<0.05)。UBE2T mRNA表达量在肺腺癌中明显升高(P<0.01)。基因富集结果显示高表达的UBE2T与细胞周期(FDR=0),剪接体(FDR=0),DNA修复(FDR=0)及糖代谢等36个信号通路密切相关(FDR<0.05)。UBE2家族的UBE2C、UBE2M、UBE2S、UBE2T、UBE2V2 mRNA均与肺腺癌的临床病理特征存在相关关系,其中UBE2T的表达水平与临床分期及预后的关系最为密切,且与肿瘤细胞糖酵解通路密切相关。【结论】UBE2家族与肺腺癌临床病理特征相关。UBE2T mRNA有望成为肺腺癌新的生物标志物。

UBE2T调控三阴性乳腺癌增殖、迁移和侵袭等生物学行为的实验研究

目的探讨UBE2T对三阴性乳腺癌恶性生物学行为的影响并探讨可能作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测三阴性乳腺癌组织和正常乳腺组织中UBE2T mRNA表达水平。采用GEPIA和Kaplan Meier-plotter在线分析乳腺癌组织和正常乳腺组织中UBE2T表达差异以及UBE2T表达与乳腺癌预后的关系。采用UBE2T shRNA质粒和PCMV-UBE2T质粒转染MDA-MB-231细胞来下调和上调UBE2T表达,采用Western blotting检测验证转染效率。采用CCK-8法、流式细胞术和Transwell小室检测不同UBE2T表达对MDA-MB-231细胞增殖、周期变化、迁移和侵袭的影响。采用Western blotting检测AKT和ERK信号通路蛋白表达。结果三阴性乳腺癌和正常乳腺组织中UBE2T mRNA表达量分别为6.82±1.77和2.12±1.40(P<0.01)。GEPIA和Kaplan Meier-plotter在线分析结果显示乳腺癌中UBE2T高表达,且高表达者OS、RFS较低表达者差,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,上调UBE2T表达后细胞增殖率升高,下调UBE2T表达后细胞增殖率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,PCMV-UBE2T组G1期细胞比率增加,S期细胞比率降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验结果显示,sh-UBE2T组迁移和侵袭细胞数分别为266±19、227±14,低于对照组的528±38、406±21,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示,PCMV-UBE2T组p-AKT和p-ERK1/2表达水平分别为1.69±0.14、2.10±0.15,高于对照组(P<0.05)。sh-UBE2T组p-AKT和p-ERK1/2表达水平分别为0.59±0.07、0.35±0.07,低于对照组(P<0.05)。结论UBE2T在乳腺癌组织中高表达,通过ERK和AKT信号途径影响乳腺癌细胞恶性生物学行为。

UBE2B基因与男性不育的研究进展

男性不育是困扰全球的一个世界性难题,大约15%的不育病例与精子发生相关的基因变异有关。哺乳动物UBE2B基因与酵母菌Rad6基因同源。UBE2B属于泛素蛋白酶体系统,其在哺乳动物的精子发生过程中发挥着重要作用。小鼠实验表明UBE2B基因敲除小鼠精原细胞减数分裂受抑制,精子活力下降,畸形精子数目增多,表现为雄性不育。越来越多的研究证实男性UBE2B基因突变及单核苷酸多态性均可导致男性不育。本文综述了UBE2B基因与男性不育的关系,为临床男性不育的诊断、治疗提供理论依据。

pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒在Chang Liver细胞中的表达和鉴定

目的构建pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒并建立人正常肝细胞Chang Liver的稳定表达株。方法采用RT-PCR法从HepG2细胞中克隆得到UBE2C cDNA全长序列,将它与pMD18-T载体连接。双酶切和测序鉴定后,再将UBE2C片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)。构建好的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将其转入Chang Liver细胞株中,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株,再用Western blot法检测转染后UBE2C的蛋白表达水平。结果pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的基因UBE2C的序列完全正确,真核表达质粒成功构建。Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组UBE2C的蛋白表达水平高于转pcDNA3.1(-)组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建UBE2C基因的真核表达质粒并建立其稳定表达的Chang Liver细胞株,为下一步研究奠定基础。

冠心病猝死心肌中泛素活化酶UBE1、端粒酶的表达及意义

目的探讨泛素活化酶UBE1、端粒酶在冠心病猝死心肌中的表达及意义。方法收集冠心病心源性猝死心肌28例、冠心病非心源性猝死心肌10例,10例正常心肌作为对照,应用免疫组化(EnVision二步法)技术及Image-Pro Plus 6.0图像分析软件检测各组UBE1、端粒酶表达的累积光密度(IOD)。结果 Image-Pro Plus 6.0图像分析软件显示UBE1在冠心病心源性猝死组、冠心病非心源性猝死组及正常对照组中累积光密度(IOD)的中位数(四分位数间距)依次为1182.77(952.82-1567.32)、892.69(603.38-1146.79)及833.52(752.74-873.54),端粒酶在以上三组中IOD的中位数(四分位数间距)依次为12 544.9(11 128.29-13 502.25)、6 368.07(3 648.35-12 485.16)及8 658.08(8 058.23-10 066.13)。UBE1、端粒酶在冠心病心源性猝死组中的累积光密度(IOD)显著高于冠心病非心源性猝死组及正常对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 UBE1和端粒酶在冠心病心源性猝死心肌中呈过表达,UBE1和端粒酶有望成为心肌早期损伤的标志物。

羧基末端结合蛋白CtBP2与泛素结合酶UBE2Ⅰ的相互作用

目的筛选并确定人羧基末端结合蛋白CtBP2的相互作用蛋白。方法用酵母双杂交技术,以人CtBP2为诱饵蛋白筛选人肝cDNA文库,获得与之相互作用的候选蛋白,采用酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验确认相互作用的特异性,最后利用荧光蛋白融合表达技术和荧光显微镜观察确认CtBP2与其相互作用蛋白的亚细胞共定位情况。结果酵母双杂交筛选获得了41个与Bd-CtBP2相互作用的阳性克隆,编码10个不同的蛋白,其中有4个克隆编码泛素结合酶UBE2Ⅰ的不同片段。从人肝cDNA文库中扩增获得UBE2Ⅰ的全长编码序列,酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验证实CtBP2与UBE2Ⅰ能够特异性结合。亚细胞定位研究表明GFP-CtBP2弥散分布于细胞核,DsRed-UBE2Ⅰ不均匀分布于细胞核,有部分点状聚集。两者共转染时能够呈点状共定位于细胞核。结论人CtBP2能够在细胞核内与UBE2Ⅰ特异性相互作用,是UBE2Ⅰ的靶蛋白。

天使综合征致病基因UBE3a在大鼠神经元细胞中的克隆和表达检测

目的:调取并构建含有人UBE3a基因全长cDNA的真核表达载体pEGFP-UBE3a,采用磷酸钙转染方法将构建的重组质粒在神经元细胞中表达并观察EGFP-UBE3a蛋白的亚细胞定位。方法:采用PCR技术从人胎脑组织cDNA文库中扩增UBE3a基因的ORF片段并进行酶切构建pEGFP-UBE3a的真核表达重组质粒。用磷酸钙转染方法将重组质粒转染入体外培养的神经元细胞,分别在体外培养8天和14天时通过倒置荧光显微镜观察重组蛋白的表达和定位情况。结果:PCR扩增获得人胎脑组织cDNA文库中UBE3a cDNA全长2559 bp,构建真核表达重组质粒pEGFP-UBE3a成功,经DNA测序与Gen-Bank中的人UBE3a cDNA序列一致。经倒置荧光显微镜观察重组质粒的表达情况,结果显示转染重组质粒的细胞中有高水平的EGFP-UBE3a蛋白表达,且UBE3a在早期神经元的细胞质和细胞核中广泛表达,并弥散在轴突和树突,而在成熟神经元细胞核中的表达明显富集。结论:本实验成功构建了pEGFP-UBE3a真核表达质粒,EGFP-UBE3a蛋白在体外培养的神经元细胞中能够有效表达,且随着神经元的成熟逐步向核内富集,为进一步研究UBE3a基因在天使综合征发生发展中的作用奠定了基础。

泛素交联酶UBE2D3在调节人乳腺癌MCF-7细胞放射敏感性中的作用

目的研究泛素交联酶UBE2D3(ubiquitin-conjugating enzyme E2D3)在端粒酶介导的放射敏感性调节机制中的作用。方法针对UBE2D3基因序列,设计3条干扰序列,通过筛选选取1条干扰效率最优的序列并合成pshRNA-UBE2D3;在MCF-7细胞中,转染过表达质粒p EGFP-UBE2D3以及干扰质粒pshRNA-UBE2D3,Western blot检测UBE2D3对h TERT蛋白表达的影响;通过转染p EGFP-h TERT,Western blot法检测h TERT蛋白表达对UBE2D3的影响;通过转染pshRNA-UBE2D3抑制UBE2D3的表达,PCR-ELISA法检测端粒酶活性,MTT法检测MCF-7细胞周期的变化,CCK-8法检测MCF-7细胞增殖情况,克隆形成法检测MCF-7细胞放射敏感性的变化。结果成功筛选出一条针对UBE2D3的最优干扰序列,干扰UBE2D3能显著降低MCF-7细胞的放射敏感性;UBE2D3能参与h TERT调控放射敏感性的调节,抑制UBE2D3的表达可能通过上调h TERT和Cyclin D1的表达、增加h TERT的活性、加速G1期向S期转变以及提高MCF-7细胞的增殖从而降低MCF-7细胞的放射敏感性。然而,过表达UBE2D3未能检测到h TERT的表达差异。结论抑制UBE2D3可能通过上调h TERT以及Cyclin D1的表达参与h TERT调节的放射敏感性的过程。