泛素结合酶UBE2G2基因调控胞内布鲁氏菌存活的作用

为了探讨泛素结合酶UBE2G2在胞内布鲁氏菌繁殖中的作用,通过分别构建过表达载体和设计合成小干扰RNA(siRNA)对UBE2G2基因进行过表达和沉默;利用MTT比色法检测UBE2G2基因沉默或过表达对细胞活性的影响;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测布鲁氏菌M5-90感染对UBE2G2基因表达的影响;用布鲁氏菌M5-90感染过表达和沉默UBE2G2基因的细胞,利用qRT-PCR检测细胞中CHOP基因表达的变化,利用菌落计数法检测胞内细菌数量的变化,利用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、白介素18(IL-18)和γ-干扰素(IFN-γ)水平的变化。结果显示,获得UBE2G2基因的过表达作用的载体pLVX-puro-UBE2G2;筛选出UBE2G2基因的干扰效果最佳片段为UBE2G2-83-siRNA;UBE2G2基因沉默或过表达对细胞活性没有影响;M5-90感染可提高细胞中UBE2G2基因的表达;M5-90感染过表达UBE2G2基因的细胞,可提高细胞中LDH水平和胞内细菌数量并可抑制CHOP的表达、IL-18和IFN-γ的水平;M5-90感染沉默UBE2G2基因的细胞,可提高细胞CHOP的表达、IL-18和IFN-γ的水平并可抑制LDH水平和胞内细菌数量。结果表明,泛素结合酶UBE2G2可调控胞内布鲁氏菌存活。