N端规则泛素E3连接酶UBR2真核表达载体的构建及验证

目的 构建N-端规则泛素E3连接酶UBR2过表达载体,并检测它在HepG2细胞中的过表达效率.方法 通过提取HepG2细胞总RNA, RT-PCR扩增UBR2基因片段,插入到pEGFP-N2载体中,构建真核表达载体pEGFP-N2-UBR2,并转染HepG2细胞,转染后利用荧光显微镜,Western印迹检测UBR2的表达情况.结果 经双酶切和测序鉴定真核表达质粒pEGFP-N2-UBR2构建正确;转染后24 h,利用荧光显微镜观察,在转染pEGFP-N2-UBR2的HepG2细胞中观察到绿色荧光蛋白,在蛋白水平可以检测到UBR2蛋白过表达.结论 成功构建pEGFP-N2-UBR2过表达载体,并在HepG2细胞中验证其过表达效率.为今后研究其在细胞生长和增殖过程中的作用奠定基础.

戊型肝炎病毒与UBR2相互作用的初步研究

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus, HEV)是一种经肠道传播、严重危害人类健康的病毒性肝炎病原体。HEV不仅可以在肝脏中复制,还可以在肝外组织复制并导致组织损伤,如HEV可在男性生殖系统中复制并导致睾丸损伤,但其发病机制尚不明确。UBR2在生殖系统高表达,是男性减数分裂和精子形成的关键,但其与HEV的相互作用尚不清楚。本文以探究HEV与UBR2之间的相互作用关系为目的,通过构建真核表达载体、转染细胞,利用Western blot技术验证UBR2能否成功过表达。同时,在细胞中加入HEV病毒,并利用Western blot技术探究HEV对UBR2的影响。另外,在HEV感染的新西兰大白兔睾丸组织中,利用免疫荧光共定位技术观察HEV与UBR2的相互作用关系。上述实验成功构建了pEGFP-UBR2质粒,并在A549细胞和Huh 7.5.1细胞中过表达,发现在A549细胞系中,HEV对UBR2有抑制作用;在感染HEV的睾丸组织中发现高表达的UBR2与HEV ORF2衣壳蛋白能够共定位,提示了两者可能存在相互作用。这为深入研究HEV与UBR2的相互作用,以及HEV导致生殖系统损伤的致病机制奠定了基础。