血管内皮功能调节酶pCDH-Myc-UBR5分子克隆的构建

目的构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒,并探究泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5(UBR5)在调控血管生成方面的生物学功能。方法以人乳腺癌细胞(MCF7)的互补DNA(cDNA)为模板,将UBR5基因编码区序列分为前后两段,经聚合酶链式反应(PCR)扩增。两段扩增序列插入到真核表达载体pCDH-Myc中,通过菌液PCR及DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒瞬时转染至人胚胎肾细胞(HEK293T)中,通过蛋白质印迹法检测Myc-UBR5蛋白的表达。为了验证UBR5蛋白的功能,通过免疫共沉淀实验检测UBR5与先天性角化不良1(DKC1)蛋白的相互作用。结果成功构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒。经菌液PCR及DNA测序证实UBR5扩增序列成功插入到pCDH-Myc载体中,并在HEK293T中表达。免疫共沉淀实验发现UBR5与DKC1存在相互作用。结论通过分子克隆技术可成功构建pCDH-Myc-UBR5质粒并在细胞中正确表达。UBR5与血管生成调控蛋白DKC1存在相互作用。

UBR5基因在恶性肿瘤生物学中的研究进展

UBR5基因是近年来备受关注的肿瘤相关基因,到目前为止已发现其在细胞周期调控,细胞凋亡调控,抑癌基因调控,侵袭转移调控等多个方面影响肿瘤的生物学行为。同时也发现,UBR5与多种癌症患者的化疗敏感性以及预后相关。TCGA数据库显示UBR5在许多癌症类型中都有异常表达并与肿瘤的生物学行为相关,但其具体的作用机制仍未完全阐明。随着对UBR5基因研究的进一步深入,对其在癌症中的调控机制的认识会逐渐清晰,这将在肿瘤的分子诊断、靶向治疗以及评价患者预后等方面提供更多信息。笔者在总结国内外最新研究的基础上对UBR5的基因结构及其生理功能,肿瘤的调控及其在肿瘤中的预测价值等方面展开综述。