UC-MSCs腹腔移植对db^-/db^-小鼠血糖和体重的影响

目的明确脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对2型糖尿病(T2DM)db^-/db^-小鼠的临床疗效及安全有效的移植途径,旨在为临床应用提供实验与理论数据。方法db/m和db^-/db^-小鼠各10只,每种小鼠各分为2组,db/m对照组,db/m+UC-MSCs组,db^-/db^-模型组,db^-/db^-+UC-MSCs组,5只/组。对照组和模型组给予1mL生理盐水腹腔注射;db/m+UC-MSCs和db^-/db^-+UC-MSCs组腹腔注射UC-MSCs为1×10^7个细胞/只鼠,总液体量为1mL。每周固定时间记录餐后血糖与体重,计算各组小鼠生存率。结果与db-/db-模型组小鼠相比,腹腔途径移植UC-MSCs后,db^-/db^-小鼠的血糖水平明显下降,与非移植db^-/db^-小鼠比较差异有显著性,对db/m小鼠无影响;移植与非移植小鼠体重无明显变化。db^-/db^-+UC-MSCs组小鼠出现部分死亡,生存率为75%,其它组小鼠生存率均为100%。结论UC-MSCs腹腔移植途径可有效控制T2DM小鼠血糖变化,对体重变化无明显影响。可为临床治疗提供参考。

Transplantation of UC-MSCs on collagen scaffold activates follicles in dormant ovaries of POF patients with long history of infertility

Premature ovarian failure(POF) is a refractory disease for clinical treatment with the goal of restoring fertility. In this study,umbilical cord mesenchymal stem cells on a collagen scaffold(collagen/UC-MSCs) can activate primordial follicles in vitro via phosphorylation of FOXO3 a and FOXO1. Transplantation of collagen/UC-MSCs to the ovaries of POF patients rescued overall ovarian function, evidenced by elevated estradiol concentrations, improved follicular development, and increased number of antral follicles. Successful clinical pregnancy was achieved in women with POF after transplantation of collagen/UC-MSCs or UC-MSCs. In summary, collagen/UC-MSC transplantation may provide an effective treatment for POF.

UC-MSC联合利妥昔单抗及甲强龙对系统性红斑狼疮免疫炎性易栓状态的影响作用

目的初步探讨脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSC)联合利妥昔单抗(rituximab,美罗华)与甲强龙对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者免疫炎性易栓状态的干预作用。方法8例SLE患者经肾活检确诊为狼疮性肾炎。予SLE活动指数(SLEDAI积分)评价病情活动程度;流式细胞术(FCM)监测B细胞清除、T细胞亚群及炎症介质表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗心磷脂抗体(ACA)、狼疮抗凝物(LA)水平;以磁珠法检测血凝常规、血浆D二聚体(D-D)、抗凝血酶(AT)等。结果随访第1个月临床症状明显改善,CD19和CD20降至"0";至第3个月全组SLEDAI评分<4分,Th1(IFN-γ)、Th2(IL-4)及CD11b、CD25水平均接近正常;随访至1年上述指标维持在正常值内。结论利妥昔单抗联合UC-MSC所具有的靶向作用,能有效清除外周血致病性B细胞,恢复Th1/Th2免疫平衡状态,减少炎症因子释放,促进机体免疫重建,恢复凝血-抗凝系统平衡,从而改善机体免疫炎性易栓状态。

犬UC-MSC-Exo来源miRNA表达分析及其cfa-miR-34a/-143对血管内皮细胞增殖的影响

试验旨在分离鉴定犬脐带间充质干细胞分泌的外泌体(UC-MSC-Exo),并研究犬UC-MSC-Exo来源miRNA的表达情况及其对血管内皮细胞(VEC)增殖的影响。采用超高速离心法从犬脐带间充质干细胞培养上清中分离外泌体,采用Western blotting、透射电镜和纳米颗粒跟踪分析法(NTA)进行鉴定。通过对犬UC-MSC-Exo中的miRNA进行测序,筛选出2个目标miRNA(cfa-miR-34a和cfa-miR-143)并合成相应的mimic和inhibitor,转染犬VEC;采用荧光显微镜和实时荧光定量PCR法检测mimic和inhibitor转染情况及其转染效率;CCK-8法检测转染mimic和inhibitor对犬VEC增殖能力的影响,并对其靶基因进行预测。结果显示,犬UC-MSC-Exo表达特异性的外泌体表面蛋白CD9、CD63和CD81,粒径集中在100~200 nm,电镜检测成典型的杯状。免疫荧光结果表明,miRNA mimic和inhibitor均已转染进细胞内,并且聚集于细胞质中;实时荧光定量PCR结果表明,转染cfa-miR-34a mimic和cfa-miR-143 mimic后,细胞内cfa-miR-34a和cfa-miR-143表达量分别升高约400和78倍;而转染cfa-miR-34a inhibitor和cfa-miR-143 inhibitor后,细胞内cfa-miR-34a和cfa-miR-143表达量分别降低了77%和83%;CCK-8检测结果表明,cfa-miR-34a和cfa-miR-143在体外可极显著促进血管内皮细胞的增殖(P<0.01)。cfa-miR-34a靶基因预测结果发现,共有195个保守靶位点,与miRDB预测结果共有69个交集靶基因;cfa-miR-143则有448个保守靶基因,其与miRDB预测结果有128个交集靶基因。本试验成功分离得到犬UC-MSC-Exo,且证实目标miRNA cfa-miR-34a和cfa-miR-143在体外可极显著促进VEC增殖。

间充质干细胞与汗腺细胞融合实现汗腺再生的可行性研究

大面积烧伤患者创面愈合后大量汗腺细胞受损,体内热量难以顺利散发,严重影响患者工作及生活。如何实现大面积深度烧伤创面的汗腺重建,成为目前亟待解决一大难题。融合技术经过几十年的发展已经变得非常成熟,从理论上说利用细胞融合技术可以使任何2个动物细胞通过体细胞杂交而形成新的生物资源。本文就目前干细胞/汗腺细胞融合体实现汗腺再生的可行性进行综述。

LIF和bFGF对脐带间充质干细胞体外自我维持和更新的影响

目的:研究LIF联合bFGF对人脐带间充质干细胞hUC-MSC增殖、干性维持及衰老的影响。方法:实验分为4组:对照组加入完全培养基(含10%FBS的α-MEM)常规培养;LIF组,加入含10 ng/ml LIF的完全培养液;bFGF组,加入含10 ng/ml bFGF的完全培养液;联合组,加入含10 ng/ml LIF和10 ng/ml bFGF的完全培养液。采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)测定各组第4代hUC-MSC生长曲线;在倒置相差显微镜下观察各组hUC-MSC形态变化;β-半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老情况;RT-PCR检测表达情况。结果:4组细胞生长曲线均近似S形,细胞增殖速率表现为联合组>bFGF组>LIF组>对照组。对照组细胞较早出现衰老,增殖减慢;LIF组细胞早期形态维持较好,但增殖相对缓慢,后期大部分细胞衰老;bFGF组部分细胞呈衰老改变,但增殖较快;联合组细胞增殖迅速,能长期维持hUC-MSC形态特征,仅有少量衰老细胞。RT-PC R显示,LIF和bFGF均能上调PCNA、OCT4、NANOG,下调P16、P21、P53的表达,其联合作用效果更明显。结论LIF联合bFGF不仅可以促进hUC-MSC增殖,维持其干性而且能够延缓hUC-MSC的衰老。

马脐带不同部位间充质干细胞的分离培养及成软骨诱导分化

【目的】通过对比马雌性胎儿同一脐带3个不同部位分离的脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)的增殖率、表面标记分子、多潜能性基因表达和软骨分化潜能的差异性,明确更适合作为分离培养间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的马脐带部位。【方法】采用组织块分离法分离脐带靠近胎儿的部分(近端)、整段脐带的中心(中段)和靠近胎盘部分(远端)3个部分的MSCs,通过绘制细胞生长曲线对比UC-MSCs的增殖能力,通过实时荧光定量PCR检测多潜能性基因和表面标记分子的表达,经软骨诱导检测成软骨分化的潜能。【结果】近端、中段和远端分离得到的MSCs均贴壁生长,呈成纤维状;细胞倍增时间分别为35.4、25.5和34.9 h,且都表达多潜能性基因NANOG(NANOG homeobox)、八聚体结合转录因子(POU class 5 homeobox 1,POU5F1)和Y染色体性别决定区基因盒2(SRY-box transcription factor 2,SOX2),高表达5′-核苷酸外切酶(5′-nucleotidase ecto,CD73)、Thy-1细胞表面抗原(Thy-1 cell surface antigen,CD90)、内皮糖蛋白(endoglin,CD105)和造血祖细胞抗原(CD34 molecule,CD34),低表达单核细胞分化抗原CD14(CD14 molecule,CD14)、B-淋巴细胞表面抗原B4(CD19 molecule,CD19)、蛋白酪氨酸磷酸酶受体C型(protein tyrosine phosphatase receptor type C,CD45)和B细胞抗原受体复合物相关蛋白α链(CD79a molecule,CD79a)。多潜能性基因NANOG相对表达量在P1代中段细胞显著高于近端细胞(P<0.05),POU5F1相对表达量在P5代近端细胞显著高于中段细胞(P<0.05),且极显著高于远端细胞(P<0.01)。CD14、CD19、CD73和CD90的相对表达量在P5代近端细胞均显著或极显著高于中段和远端细胞(P<0.05;P<0.01);CD34、CD79a的相对表达量在P5代远端细胞均显著或极显著高于近端和中段细胞(P<0.05;P<0.01)。近端、中段和远端分离得到的UC-MSCs均可诱导分化为软骨细胞,在诱导分化第14天,近端细胞SOX9的相对表达量极显著高于远端细胞(P<0.01),诱导21 d时远端细胞SOX9的相对表达量极显著高于中段细胞(P<0.01);在诱导第7和14天,中段细胞蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)和Ⅱ型胶原蛋白1链(collagen typeⅡalpha 1 chain,COL2A1)相对表达量均极显著高于近端和远端细胞(P<0.01),第21天时显著高于近端和远端细胞(P<0.05)。【结论】马脐带的近端、中段和远端均可用于制备MSCs,都表达多潜能性基因和MSCs表面标记分子,且均可诱导分化为软骨细胞,中段MSCs增殖能力和软骨分化潜能优于近端和远端,更适合用于分离MSCs。

脐带间充质干细胞最佳制备条件的研究

间充质干细胞具有多向分化潜能、免疫调节、造血支持和促进干细胞植入等特点而备受关注。近年来,随着关于脐带间充质干细胞相关研究逐步深入,脐带间充质干细胞的优势逐渐显现出来,由于脐带间充质干细胞独有特性使其有望代替骨髓间充质干细胞成为更好的组织工程研究对象。本文从脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的分离、培养条件方面进行试验研究,得出结论 UC-MSCs制备期间,脐带采集后应尽快分离,以确保细胞生长状态良好,且P5代UC-MSCs细胞表型更加稳定,杂细胞少,建议推荐治疗使用。

脐带间充质干细胞免疫调节功能的研究进展

脐带间充质干细胞(UC-MSC)是由脐带血、脐静脉、脐动脉或华通胶分离培养出来的一类具有自我更新和多向分化潜能的干细胞,具有获取过程无创伤、低免疫源性等优势。UC-MSC的细胞表型并非一成不变,而会受到各种刺激因素的影响。UC-MSC对自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、B细胞和T细胞发挥免疫调节作用,其作用机制与核因子κB(NF-κB)和Toll样受体(TLR)信号通路有关。并且,UC-MSC在肿瘤、自身免疫性疾病、急性肾损伤和器官移植等疾病的免疫治疗中发挥重要作用。

用于治疗系统性红斑狼疮的脐带间充质干细胞的产品质量控制的研究

目的:分离培养符合用于治疗系统性红斑狼疮的产业化的脐带间充质干细胞(UC-MSC),并进行脐带间充质干细胞产品质量控制的研究。方法:从脐带中通过贴壁法获得间充质干细胞,传代培养后,采用无血清培养体系扩增培养UC-MSC。通过流式细胞术和诱导分化技术,检测其中干细胞含量、细胞总数、细胞活率,并取样进行细菌检测、内毒素检测、支原体检测,满足质量标准方能应用。选取BALB/c小鼠,进行pristane造模,将BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,对照组和模型组给予等量的生理盐水;治疗组给予UC-MSC (4 &#215;105 cells/ml),0.2 ml。进行抗双链DNA (ds-DNA)抗体、系统性红斑狼疮活动度评分(SLEDAI)和常规血液检查。通过裸鼠致瘤性实验、毒性试验等评估脐带间充质干细胞产品的安全性。结果:经过技术改造升级,无血清培养的UC-MSC贴壁生长,主要为典型的成纤维样细胞形态,可传15代以上,第5代MSCs高表达CD73、CD105、CD90、CD44;低表达CD34、CD45和HLA-DR;在不同的诱导条件下,脐带MSCs可被诱导分化为成骨细胞和软骨细胞。治疗组UC-MSC给药30天,抗ds-DNA抗体水平明显降低,与对照组相比差异有显著性意义,疾病活动度评分明显降低,蛋白尿、血肌酐、尿素氮等指标得到改善,与模型组比较差异均具有统计学意义(P 【0.05)。结论:本研究建立了工业化生产UC-MSC的质量管理体系,验证了UC-MSC治疗系统性红斑狼疮的安全性及有效性,为后续开展UC-MSC治疗系统性红斑狼疮的临床试验开展提供理论依据和技术支持。

脐带间充质干细胞在糖尿病治疗中的研究进展

糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病,胰岛β细胞功能衰竭和胰岛素抵抗是糖尿病的主要病因。然而,目前的治疗方法,如口服抗糖尿病药物及胰岛素注射,尚不能逆转胰岛β细胞功能衰竭,而胰腺移植又受到供体来源的限制。随着干细胞与再生医学的发展,脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)由于来源丰富、免疫原性低、无伦理问题等,成为治疗糖尿病的理想细胞类型。现就UC-MSCs在糖尿病治疗中的研究进展进行综述,为UC-MSCs移植治疗糖尿病的临床应用研究提供参考。