UCH-L3通过影响RAD51调控牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化

本研究旨在探究泛素蛋白酶体系统中羧基末端水解酶L3(Ubiquitin C-Terminal Hydrolase L3,UCH-L3)通过影响RAD51调控牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的机制。使用已经建立的牛骨骼肌卫星细胞体外成肌分化模型,体外模拟骨骼肌的发育过程,采用免疫沉淀技术检测UCH-L3与RAD51是否相互作用,检测UCH-L3是否调控RAD51的泛素化水平,设计并合成RAD51的si-RNA,转染牛骨骼肌卫星细胞,筛选出有显著干扰效果的si-RNA,研究干扰RAD51后增殖和分化标志基因PAX7和MyHC表达水平变化,综合分析UCH-L3通过影响RAD51调控牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化的机制。结果表明:过表达UCH-L3后RAD51的蛋白水平显著升高,UCH-L3可以调控RAD51的表达水平。UCH-L3与RAD51存在体内相互作用,UCH-L3可以影响RAD51的蛋白稳定性,干扰UCH-L3表达可以缩短RAD51的半衰期,UCH-L3能够调控RAD51泛素化水平,干扰RAD51后,牛骨骼肌卫星细胞增殖标志因子PAX7的蛋白水平与对照组无差异,分化标志因子MyHC的蛋白水平显著低于对照组(P<0.05),干扰RAD51表达对细胞增殖没有明显影响,但可以抑制牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化。本研究结果表明,UCH-L3可以通过影响RAD51调控牛骨骼肌卫星细胞增殖与成肌分化进程。

UCH-L3和HIF-1α在乳腺良恶性病变中的表达和临床意义

目的:检测泛素羧基末端水解酶-3(Ubiquitin C-terminal hydrolases L3,UCH-L3)及低氧诱导因子-1ɑ(hypoxia-inducible factor 1ɑ,HIF-1ɑ)在乳腺癌组织、癌旁乳腺组织和良性病变组织中的表达,探讨二者与乳腺癌临床病理特征之间的关系。方法:采用免疫组织化学法检测99例乳腺癌组织、38例癌旁乳腺组织和29例良性病变组织UCH-L3及HIF-1ɑ蛋白表达。结果:(1)乳腺癌UCH-L3阳性表达率低于癌旁乳腺组织,表达强度弱于癌旁正常乳腺组织及良性病变组织(P<0.05);(2)Luminal分型中基底细胞样亚型低于Luminal A亚型(P<0.05);(3)乳腺癌UCH-L3表达强度与雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)呈正相关(P<0.05);(4)乳腺癌HIF-1α胞核阳性表达率高于癌旁乳腺组织及良性病变组织,Luminal分型以人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)过表达亚型和基底细胞样亚型表达率高于Luminal A和B亚型,表达强度与Ki-67表达比例和组织学分级呈正相关,与ER、PR蛋白表达呈负相关(P<0.05);(5)乳腺癌HIF-1α胞质阳性表达率高于癌旁乳腺组织,Luminal分型中的基底细胞样亚型低于Luminal A/B和HER2过表达亚型,表达强度与Ki-67和组织学分级呈负相关,与ER、PR和UCH-L3表达强度呈正相关(P<0.05)。结论:UCH-L3失表达和HIF-1α的过表达可能在乳腺癌变和演进过程中发挥作用;HIF-1α从细胞质进入胞核预示肿瘤的恶性演进;UCH-L3和HIF-1α对乳腺癌预后的评估具有一定的价值。提高UCH-L3的表达和阻止HIF-1α由细胞质向细胞核的迁移可为乳腺癌的防治,特别是基底样型乳腺癌提供实验室依据。

雷帕霉素诱导HL-60细胞自噬及UCH-L3的表达

目的:探讨雷帕霉素能否诱导人早幼粒细胞白血病细胞株(human promyelocytic leukemia cells,HL-60)发生自噬及在此过程中泛素羧基末端水解酶L3(ubiquitin C-terminal Hydrolase L3,UCHL3)的表达变化。方法:应用CCK-8法检测不同浓度雷帕霉素处理HL-60细胞后的生长抑制率。2μmol/L雷帕霉素作用HL-60细胞不同时间后,在荧光显微镜下观察HL-60细胞的形态变化;应用透射电镜观察自噬小体的发生情况,real-time PCR检测自噬标志性基因LC3-Ⅱ和UCHL-3的mRNA表达变化,Western blot检测UCH-L3的蛋白表达变化。结果:不同浓度雷帕霉素对HL-60细胞增殖均有抑制作用,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。在荧光显微镜下,对照组细胞内荧光强度低,雷帕霉素组细胞荧光强度随着处理时间延长也相应增强。2μmol/L雷帕霉素处理细胞12和24 h后,在透射电镜下可见对照组内自噬小体数量少,而在处理组细胞内自噬小体数量增多,且形态典型特异;与对照组相比LC3-Ⅱ mRNA表达量增加,而UCH-L3的mRNA和蛋白表达量均下降(P<0.05)。结论:雷帕霉素能诱导HL-60细胞发生自噬性死亡。UCH-L3可能在调控白血病细胞自噬性死亡中发挥作用。

干扰UCH-L3对牛骨骼肌卫星细胞增殖与分化的影响

实验旨在探究泛素蛋白酶体中羧基末端水解酶L3(UCH-L3)对牛骨骼肌卫星细胞增殖和分化的影响。使用已经建立的牛骨骼肌卫星细胞体外成肌分化模型,体外模仿骨骼肌的发育过程,设计并合成UCH-L3的si-RNA,转染牛骨骼肌卫星细胞,筛选出有显著干扰效果的si-RNA。用EdU染色检测干扰UCH-L3对细胞增殖的影响。用免疫荧光的方法检测干扰UCH-L3表达后对肌管形成的影响,并采用Western blot技术检测分化后分化标志基因MyHC表达水平的变化,综合分析干扰UCH-L3对牛肌卫星细胞成肌分化的影响。结果表明:干扰UCH-L3后肌卫星细胞EdU染色阳性率与对照组无明显差异;干扰UCH-L3后分化形成肌管的数量少于对照组,肌管融合指数显著低于对照组,分化标志因子MyHC的蛋白水平显著低于对照组。本研究结果表明,干扰UCH-L3的表达能够抑制牛骨骼肌卫星细胞的成肌分化过程。

UCH-L3在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的了解泛素羧基末端水解酶3(UCH-L3)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达,分析UCH-L3与EOC患者的临床病理特征及预后的关系。方法通过免疫组化染色方法检测不同卵巢组织中UCH-L3的表达,包括正常卵巢组织20例(正常卵巢组)、上皮性卵巢肿瘤组织26例(良性卵巢肿瘤组)、交界性上皮性卵巢肿瘤组织22例(交界性卵巢肿瘤组)、EOC组织61例(EOC组),分析UCH-L3的表达与EOC患者临床特征及预后的关系。结果 UCH-L3在EOC组卵巢组织中的表达高于良性卵巢肿瘤组和正常卵巢组(P均<0.05)。UCH-L3在EOC中的FIGO晚期组、分化程度高级别组、有腹腔内转移组中的表达高于FIGO早期组(P=0.006)、分化程度低级别组(P=0.001)和无腹腔内转移组(P=0.032)。UCH-L3在EOC患者肿瘤组织高、低表达组间的生存时间差异无统计学意义。结论 UCH-L3在EOC发生发展中可能有一定作用,但与患者的预后无关。

泛素羧基末端水解酶L3及其与疾病和肿瘤的相关性

去泛素化酶(deubiquitinating enzymes,DUBs)在调节细胞内稳态、细胞分化和凋亡等过程中,均扮演着重要角色。泛素羧基末端水解酶L3(ubiquitin C-terminal hydrolases L3,UCH-L3)是去泛素化酶家族中,半胱氨酸蛋白酶类的一种,可以催化靶蛋白短肽链上附着的多余的完整泛素分子的脱落,从而实现对靶蛋白的调控以及泛素分子的循环再利用。目前对该水解酶的研究还不充分,但其在多种疾病以及肿瘤中的高表达情况,说明在疾病、肿瘤发生发展中起着重要的作用。本文将针对该水解酶及其与疾病和肿瘤的相关性作一综述。

泛素蛋白酶体碳末端水解酶L3

泛素蛋白酶体碳末端水解酶L3(Ubiquitin C-terminal hydrolases L3,UCH-L3)是泛素蛋白酶体中碳末端水解酶的一种,可以将泛素分子从底物上水解下来,使得泛素蛋白酶体在细胞内再循环利用。目前对UCH-L3的研究还不充分,近年来发现它在多种疾病中都呈现高表达,可能与多种疾病的发生和发展有一定的联系。

泛素蛋白酶体途径和泛素羧基末端水解酶-3及其参与调节生物进程的研究进展

泛素化是一种翻译后的编辑,泛素标记需要被降解的蛋白并被激活,使其被泛素蛋白酶体系统(UPS)识别并降解。去泛素化酶(Deubiquitinases,DUBs)可以逆转泛素蛋白酶体途径,并参与肿瘤的形成与演进。泛素羧基末端水解酶3(UCH-L3)是去泛素化酶家族中在泛素和泛素底物蛋白中发挥重要作用的蛋白水解酶,其参与肿瘤的侵袭、转移及凋亡调节等生物学活性的机制的研究目前尚不充分。本文对UPS和UCH-L3及其参与的生物学行为做如下阐述。