UCN-01增加鼻咽癌细胞株放射敏感性的研究

背景与目的:应用药物提高肿瘤组织的放射敏感性,是改善放疗疗效的主要研究方向之一。本研究通过观察已知p53基因突变的鼻咽癌CNE-1细胞照射后G2期阻滞的情况,以及药物7-hydroxystaurosporine(UCN-01)是否能够去除此G2期阻滞并增加放射敏感性,探讨UCN-01增加放射敏感性的机制。方法:用细胞培养和流式细胞仪(FCM)技术分析X线照射对CNE-1细胞周期(特别是G2期阻滞)的影响,观察UCN-01对放射引起的G2期阻滞的影响。应用细胞克隆形成实验观察UCN-01去除G2期阻滞对放射敏感性的影响。结果:照射明显导致CNE-1细胞G2期阻滞,未照射组(对照组)及照射2Gy、4Gy和6Gy组的细胞G2期比例分别为18.4%、43.6%、77.4%和86.4%,G2期阻滞的程度与照射剂量正相关。UCN-01能够去除放射引起的CNE-1细胞G2期阻滞,50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L和400nmol/LUCN-01组细胞的G2比例由对照组的63.5%分别降至28.5%、25.0%、16.1%和13.7%,UCN-01去除G2期阻滞的程度与药物浓度正相关。UCN-01能明显降低放射后CNE-1细胞的克隆形成率,100nmol/L和200nmol/LUCN-01组的放射增敏比分别为2.60和3.09。结论:UCN-01对CNE-1细胞有放射增敏作用,其机制可能与UCN-01去除放射引起的G2期阻滞有关。

UCN-01去除放射后肿瘤细胞G_2期阻滞及其相关机制

背景与目的:辐射对肿瘤细胞的影响常表现为细胞周期的改变。本研究观察X线照射后肿瘤细胞G2期阻滞及药物UCN鄄01去除此阻滞的情况,并进一步研究其相关机制。方法:选用已知p53突变的人鼻咽癌CNE鄄1细胞系和人肺腺癌973细胞系进行研究,并以p53功能正常的人纤维母细胞瘤HT鄄1080细胞系作为对照。采用细胞培养和流式细胞仪技术分析X线照射对以上细胞系的细胞周期的影响,并观察UCN鄄01对放射后细胞G2期阻滞的影响;应用蛋白印迹法(Westernblot)测定在UCN鄄01去除CNE鄄1细胞G2期阻滞的过程中,细胞内磷酸化CDC2鄄Tyr15含量的相应变化。结果:X线照射明显导致CNE鄄1细胞和973细胞G2阻滞,照射2Gy后两组的G2期细胞比例分别由18.4%和14.8%上升至43.6%和42.8%,两组细胞的G1期阻滞不显著,衡量G1期阻滞的指标“S期消耗率”均较低,分别为14.8%和-1.2%,明显低于p53功能正常的HT鄄1080细胞(57.0%)。UCN鄄01能够去除放射后CNE鄄1细胞和973细胞G2阻滞,两组的G2期细胞比例分别从单纯照射组的63.5%和35.4%降至16.1%和16.3%。CNE鄄1细胞照射后随着细胞G2期阻滞增加,磷酸化CDC2鄄Tyr15的含量相应增加,而UCN鄄01能够降低照射后细胞内磷酸化CDC2鄄Tyr15的含量,并与该药去除细胞G2期阻滞的过程相一致。

UCN-01提高肺腺癌细胞放射敏感性的实验观察

目的 观察p53基因突变的人肺腺癌细胞系 973照射后G2 期阻滞以及药物 7 Hydroxys taurosporine(UCN 0 1 )是否能去除此阻滞并增加放射敏感性 ,探讨UCN 0 1增加放射敏感性的机制。方法 用细胞培养和流式细胞仪技术分析X射线照射对 973细胞周期 (特别是G2 期阻滞 )的影响 ,观察UCN 0 1对放射引起的G2 期阻滞的影响。应用细胞克隆形成实验观察UCN 0 1对放射敏感性的影响。结果 照射明显导致 973细胞G2 期阻滞 ,未照射组 (对照组 )及 2、4和 6Gy组的G2 期比例分别为 1 4 .8%、42 .8%、55 .9%和 60 .5 % ,G2 期阻滞的程度与照射剂量呈正相关。UCN 0 1能够去除放射引起的973细胞G2 期阻滞 ,50、1 0 0、2 0 0和 40 0nmol/LUCN 0 1组G2 期比例由对照组的 35 .4%分别降至 2 3 .5 %、1 9.6 %、1 6 .3 %和 1 2 .4% ,UCN 0 1去除G2 期阻滞的程度与药物浓度呈正相关。UCN 0 1能明显降低放射后 973细胞的存活分数 ,2 0 0和 40 0nmol/LUCN 0 1组的放射增敏比分别为 1 .1 3和 1 .31。结论 UCN 0 1对 973细胞有放射增敏作用 ,机制可能与UCN 0 1去除放射引起的G2 期阻滞有关。

奥沙利铂与7-羟基星形孢菌素对结肠癌HCT116细胞的杀伤作用及其机制的研究

目的奥沙利铂与7-羟基星形孢菌素单独及联合应用，探讨诱导结肠癌细胞HCTl16死亡的作用机制。方法应用MTT法检测L-OHP、UCN-01单药及联用对HCTll6细胞的增殖抑制作用；应用流式细胞术、Western blot方法检测药物处理后的结肠癌细胞凋亡情况；应用HE染色法检测丝裂灾变的形态改变。结果低浓度L-OHP（6．25pμmol／L）与UCN-01（100nmol／L）联用对结肠癌HCTll6细胞的杀伤可产生协同作用，效果明显强于单独用药组；两药联用AnnexinV阳性细胞率与UCN-01单用无明显差别，但死亡细胞明显增加；两药联用HCTll6细胞的形态发生改变，巨核多核细胞较单独用药组增多约10％。结论 L-OHP与UCN-01联用对HCTll6细胞具有协同抑制作用，诱导HCTll6细胞发生凋亡和丝裂灾变。

奥沙利铂和7-羟基星形孢菌素联合用药对HCT116细胞的抑杀作用

目的:观察奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)与7-羟基星形孢菌素(7-hydroxystaurosporine,UCN-01)单独及联合应用对结肠癌细胞HCT116的增殖抑制作用,探讨其诱导细胞死亡的作用机制。方法:应用MTT法检测L-OHP,UCN-01单药及联用对HCT116细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞术、Western blot方法检测药物处理的结肠癌细胞凋亡;应用HE染色法检测丝裂灾变的形态改变。结果:低浓度L-OHP(6.25μmol·L-1)与UCN-01(100 nmol·L-1)联用对结肠癌HCT116细胞的杀伤可产生协同作用,效果明显强于单独用药组;两药联用Annexin V阳性细胞率与UCN-01单用无明显差别,但死亡细胞明显增加;两药联用HCT116细胞的形态发生改变,巨核多核细胞较单独用药组增多约10%。结论:L-OHP与UCN-01联用对HCT116细胞的增殖具有协同抑制作用,诱导细胞发生凋亡和丝裂灾变。