基于UCP2-SIRT3通路探讨瑞舒伐他汀联合丹参川芎嗪注射液对脑缺血/再灌注的影响

探讨瑞舒伐他汀(RS)联合丹参川芎嗪注射液(DS)基于线粒体解耦联蛋白(UCP)2-沉默调节蛋白(SIRT)3通路对脑缺血/再灌注的影响。方法培养人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,构建氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型。采用低浓度(2.5μmol/L)、高浓度(40.0μmol/L)的RS处理OGD/R细胞,再分别添加100μmol/L的DS。将si-NC、si-UCP2转染至OGD/R细胞中,再用高浓度的RS和DS处理。噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10水平;实时荧光定量(qRT)-PCR和Western印迹检测细胞中UCP2 mRNA和蛋白表达;共聚焦法观察分子表达和定位;qRT-PCR检测细胞中PGC1、Drp1、Opa1 mRNA表达。结果与Control组相比,OGD/R组细胞存活率显著降低,炎性因子水平显著升高(P<0.05);与OGD/R组相比,RS联合DS显著升高细胞存活率,显著降低炎性因子水平(P<0.05)。与Control组相比,OGD/R组UCP2、SIRT3免疫荧光明显减弱(P<0.05);与OGD/R组相比,RS联合DS可以增强UCP2、SIRT3免疫荧光(P<0.05)。抑制UCP2表达前,RS联合DS显著降低细胞PGC1 mRNA表达水平,显著升高Drp1、Opa1 mRNA表达水平(P<0.05);但是抑制UCP2表达后,RS联合DS显著升高细胞PGC1 mRNA表达水平,显著降低Drp1、Opa1 mRNA表达水平(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀联合DS通过调控UCP2-SIRT3通路减轻脑缺血/再灌注造成的损伤。

瑞舒伐他汀通过UCP2-SIRT3信号调控脑I/R对神经元的损伤

目的:研究瑞舒伐他汀对脑缺血-再灌注损伤的保护作用及作用机制。方法:(1)建立脑梗死及OGD/R细胞模型,检测不同浓度瑞舒伐他汀对细胞增殖及细胞凋亡的影响;(2)用不同浓度瑞舒伐他汀处理OGD/R细胞模型,观察瑞舒伐他汀对细胞形态和细胞中UCP2/SIRT3表达和定位的影响;(3)构建UCP2沉默的细胞系,观察细胞线粒体形态和细胞中TOMM20及SIRT3分子表达与定位,研究瑞舒伐他汀在OGD/R细胞模型中发挥保护作用的通道和机制;(4)检测线粒体膜电位,PCR检测线粒体生成基因PGC1、Drp1和Opa1表达,研究瑞舒伐他汀对线粒体的保护作用。结果:(1)不同浓度瑞舒伐他汀均可以明显减低OGD/R细胞凋亡,提高细胞存活率;(2)瑞舒伐他汀通过影响细胞UCP2和SIRT3表达,进而发挥细胞保护作用,使细胞免受OGD/R损伤;(3)瑞舒伐他汀通过调控UCP2影响TOMM20表达,增加线粒体跨膜转运和能量代谢,增强线粒体功能,提高细胞存活;(4)瑞舒伐他汀阻止OGD/R细胞膜电位下降,保护线粒体,改善细胞状态,减少细胞凋亡。结论:瑞舒伐他汀通过调控UCP2/SIRT通路来抑制OGD/R细胞线粒体损伤,从而发挥神经元保护作用。

瑞舒伐他汀通过调控UCP2-SIRT3通路减轻脑缺血/再灌注对神经元线粒体的损伤

目的探讨瑞舒伐他汀(rosuvastatin,RS)通过UCP2-SIRT3信号通路在脑缺血/再灌注(CIR)神经元线粒体损伤中的作用及其机制。方法建立SH-SY5Y细胞的脑梗死再灌注模型(OGD/R),给予不同浓度RS(40和2.5μmol·L^-1)分别处理,观察两组中细胞增殖和凋亡的变化及UCP2和SIRT3分子的表达;构建UCP2沉默细胞系,研究不同浓度RS对UCP2沉默前后细胞形态和线粒体膜电位的影响、以及SIRT3分子、线粒体外膜异位酶20(TOMM20)和线粒体合成相关蛋白(Drp1、Opa1和PGC1)的表达变化。结果RS能提高OGD/R细胞的存活率、抑制细胞凋亡、改变细胞形态、稳定细胞线粒体膜电位;增加OGD/R细胞中UCP2、SIRT3分子和TOMM20蛋白表达,并诱导Drp1和Opa1 mRNA的表达,抑制PGC1 mRNA的表达;沉默UCP2后能明显降低OGD/R细胞的存活率及TOMM20蛋白的表达,降低Drp1和Opa1 mRNA的表达,使PGC1 mRNA的表达增加。结论RS通过调控UCP2-SIRT3通路减轻CIR对神经元线粒体的损伤,发挥神经细胞保护作用。

UCP2/SIRT3信号通路与氧化应激在疾病中的作用

氧化应激是指在内外环境发生变化时,机体内氧化系统与抗氧化系统间的动态平衡被破坏,导致活性氧(ROS)过量产生的病理状态〔1〕。氧化应激是多种疾病发生发展过程中的重要病理环节,多种信号通路参与介导氧化应激的病理机制,细胞能通过协调各种信号通路,消散氧化应激反应的不利影响,以维持自身的稳定状态。因此,在疾病的研究过程中,应当具备整体思路,深入了解有关信号通路在病程进展中的作用,为药物的针对性治疗提供理论基础,本文对VCP2/SIRT3信号通路与氧化应激在疾病中的作用进行综述。

银杏叶提取物通过UCP2/SIRT3通路改善大鼠脑缺血-再灌注损伤

目的:研究银杏叶提取物(EGb761)能否通过线粒体解偶联蛋白2(UCP2)/去乙酰化酶3(SIRT3)通路改善大鼠脑缺血再灌注(CIRI)损伤。方法:雄性SD大鼠分成以下四组:假手术组(sham)、脑缺血再灌注(CIRI)损伤组(CIRI)、银杏叶提取物组(EGb761)和UCP2抑制剂组(EGb761+Genipin)。对EGb761组和EGb761+Genipin组每天尾静脉注射10 mg/kg EGb761注射液,sham组和CIRI组给予尾静脉注射等剂量生理盐水,连续7 d;在第5~7 d,同时对EGb761+Genipin组每天灌胃50 mg/kg Genipin生理盐水溶液。末次给药次日,通过大脑左侧中动脉闭塞法(MCAO)构建大鼠脑CIRI模型。记录各组大鼠Longa神经功能评分和体重变化,取鼠脑制成石蜡切片,通过HE和尼氏染色并观察脑皮质损伤区病理变化;通过免疫组织化学技术检测脑皮质损伤区UCP2、SIRT3及天冬氨酸蛋白半胱氨酸酶3(caspase-3)的表达;收集动脉血,测定血清中总超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)浓度。结果:与sham组比较,CIRI组大鼠神经功能评分上升(P<0.01),再灌注后体重减轻(P<0.01),脑组织病理损伤加重,UCP2、SIRT3表达减少,caspase-3表达增加(P<0.01),血清SOD活力下降,MDA浓度上升(P<0.01);与CIRI组比较,EGb761组大鼠神经功能评分下降(P<0.01),再灌注后体重增加(P<0.01),脑组织病理损伤减轻,UCP2、SIRT3表达增加,caspase-3表达减少(P<0.01),血清SOD活力增高,MDA浓度下降(P<0.01);与EGb761组比较,EGb761+Genipin组大鼠神经功能评分增加(P<0.05),再灌注后体重减轻(P<0.05),脑组织病理损伤较严重,UCP2、SIRT3表达减少,caspase-3表达增加(P<0.05),血清SOD活力下降,MDA浓度上升(P<0.01)。结论:EGb761可通过调控UCP2/SIRT3通路改善大鼠脑CIRI损伤。

铁对肥胖大鼠解偶联蛋白(UCP2和UCP3)基因表达的影响

为了探讨铁对肥胖大鼠白色脂肪组织中UCP2及骨骼肌中UCP3基因表达的影响 ,应用RT PCR方法测定UCP2、UCP3mRNA表达水平。结果表明 :(1)适量补铁可改善机体甲状腺激素水平 ;(2 ) 5、10、2 0倍铁的高能饲料组肥胖大鼠的脂体比正常铁高能饲料组显著下降 (P <0 0 5 ) ;(3)缺铁使肥胖大鼠UCP2、UC P3mRNA表达水平明显降低 ;(4)补铁可使肥胖大鼠骨骼肌中UCP3mRNA表达水平增强 ,以 5倍 [(2 5 5 1mg (kg·d·BW) ]剂量铁组的UCP3mRNA表达水平最强 ,约是基础饲料组大鼠的 2倍 ;而对高能饲料诱导的白色脂肪组织中的UCP2基因表达增强无影响。结论认为适量补铁能改善机体甲状腺激素水平 ,促进肥胖大鼠骨骼肌中UCP3mRNA表达 。

安格斯牛UCP2和UCP3基因组织表达规律研究

为了研究UCP2基因和UCP3基因在安格斯牛不同组织中的表达规律,运用实时荧光定量PCR技术检测UCP2和UCP3基因在安格斯牛心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠、背最长肌和皮下脂9种组织中的相对表达情况。结果表明:UCP2和UCP3在所检测的组织中均有表达,且UCP2在肺脏中的相对表达量最高,极显著高于其他组织(P<0.01),其次为脾脏和肾脏,其表达量极显著高于除肺脏外的其他组织(P<0.01),其余组织的表达量虽有差异,差异不显著(P>0.05);UCP3基因在皮下脂中的表达量极显著高于其他各组织(P<0.01),其次为肾脏和肺脏,背最长肌的相对表达量极显著高于大肠、小肠、心脏、肝脏和脾脏组织(P<0.01),其余各组织的相对表达量较低。通过对UCP2和UCP3基因在安格斯牛不同组织中的表达情况进行分析,揭示这两个基因在安格斯牛不同组织中的表达差异,为进一步拓展UCP2和UCP3基因在不同组织中的功能研究提供理论支持,在某种程度上为安格斯牛的育种提供一些基础资料。

六味地黄丸对甲状腺素所致甲亢大鼠脂肪组织UCP2、骨骼肌UCP3mRNA表达的影响

目的:探讨六味地黄丸对甲状腺素所致甲亢大鼠脂肪组织UCP2、骨骼肌UCP3mRNA表达的影响。方法:雄性SD大鼠48只,随机分为空白组、甲状腺素甲亢模型组、甲状腺素+低剂量六味地黄丸组和甲状腺素+高剂量六味地黄丸组,每组12只。利用RT-PCR测定各组大鼠脂肪组织UCP2与骨骼肌UCP3mRNA表达,并检测各组大鼠血清T3、T4,红细胞Na+-K+-ATP酶活力,肝脏MDA含量和SOD活力。结果:与甲状腺素甲亢模型组相比,甲状腺素+高剂量六味地黄丸组大鼠脂肪组织UCP2和骨骼肌UCP3mRNA表达水平显著下调(P<0.05),红细胞Na+-K+-ATP酶活力降低(P<0.05),血清T3、T4以及肝组织MDA含量显著降低(P<0.01),肝脏SOD活力显著增加(P<0.01);甲状腺素+低剂量六味地黄丸组甲亢大鼠脂肪组织UCP2表达水平下调,但差异无统计学意义(P>0.05),骨骼肌UCP3mRNA表达水平显著下调(P<0.05),血清T(3P<0.05)、T4以及肝组织MDA含量显著降低(P<0.01),红细胞Na+-K+-ATP酶活力降低,但差异无统计学意义(P>0.05),肝脏SOD活力显著增加(P<0.01)。结论:六味地黄丸可以下调甲状腺素所致甲亢大鼠脂肪组织UCP2和骨骼肌UCP3mRNA表达。

肥胖大鼠白色脂肪组织中PPAR_γ、UCP2基因与血清1_α,25-(OH)_2-D_3的相关性研究

目的:探讨高脂饮食诱导下肥胖大鼠白色脂肪组织(whiteadiposetissue,WAT)中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomeproliferator-activatedreceptor-γ,PPARγ)、解偶联蛋白2(uncouplingprotein2,UCP2)基因与血清1α,25-(OH)2-D3的相关性。方法:①36只SD大鼠,标准饲料平衡1周后,随机分成2组,肥胖组和标准对照组,分组后分别用高脂饲料和标准饲料继续饲养6周;②采用ELISA方法测定血清1α,25-(OH)2-D3;③RT-PCR技术分析WAT中PPARγ和UCP2基因mRNA的表达水平。结果:①肥胖组大鼠的体重增值高于标准对照组(P<0.05),提示肥胖模型制备成功。②肥胖大鼠血清1α,25-(OH)2-D3低于标准对照组(P<0.05)。③WAT中PPARγ和UCP2mRNA表达均高于标准对照组(P<0.05)。结论:肥胖大鼠WAT中PPARγ诱导UCP2高表达,1α,25-(OH)2-D3与UCP2mRNA表达趋势相反。

miR-132-3p靶向UCP2调节绵羊前体脂肪细胞分化的研究

旨在研究miR-132-3p对绵羊前体脂肪细胞中UCP2基因的表达调控机制。本研究以绵羊皮下脂肪细胞为研究对象,检测miR-132-3p与UCP2在绵羊前体脂肪细胞中的作用机制;利用生物信息学软件预测miR-132-3p与UCP2的结合位点,并通过双荧光素酶报告试验验证miR-132-3p与UCP2的靶标关系;在绵羊前体脂肪细胞中过表达miR-132-3p,用RT-qPCR、Western blotting技术检测过表达后UCP2mRNA和蛋白的表达水平;最后,采用RT-qPCR检测绵羊前体脂肪细胞分化过程中UCP2和miR-132-3p的表达。结果表明,miR-132-3p在UCP2 3′-UTR上存在结合位点,并显著下调UCP2 3′-UTR重组双荧光质粒的相对荧光活性(P<0.05);过表达miR-132-3p显著下调UCP2mRNA的表达(P<0.05),且明显降低UCP2蛋白的表达量;绵羊前体脂肪细胞分化中期miR-132-3p与UCP2的表达存在负相关关系。综上表明,miR-132-3p通过特异性结合UCP2 3′-UTR抑制UCP2在mRNA和蛋白水平的表达,在一定程度上促进绵羊前体脂肪细胞的分化。

延边黄牛UCP2、UCP3基因多态性及其与生长性状的关联分析

试验旨在探究延边黄牛解耦联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)和解耦联蛋白3(uncoupling protein 3,UCP3)基因多态性及其与生长性状的相关性。以120头24月龄的延边黄牛为试验对象,提取血液基因组DNA后构建混池,运用DNA测序法对UCP2、UCP3基因进行测序分析,应用高分辨率熔解曲线分型技术对延边黄牛UCP2、UCP3基因进行分型检测,并结合生长性状数据进行关联分析。结果显示,在24月龄延边黄牛群体中,UCP2基因53412568 bp处存在C>G突变(g.53412568 C>G),产生2个等位基因:C和G,形成3种基因型:CG(0.358)、GG(0.125)和CC(0.516);UCP3基因53443536 bp处存在C>T突变(g.53443536 C>T),产生2个等位基因:C和T,形成3种基因型:CT(0.383)、CC(0.450)和TT(0.167)。关联分析显示,UCP2基因g.53412568 C>G位点CC基因型体重、腰角宽均显著高于GG基因型,CG基因型个体背高显著高于GG基因型(P<0.05);UCP3基因g.53443536 C>T位点CC基因型胸围显著高于TT基因型(P<0.05)。以上结果表明,UCP2和UCP3基因在延边黄牛生长发育过程中起到一定作用,可为延边黄牛现代分子育种后续研究提供参考。

UCP3基因调控C2C12细胞增殖的研究

[目的]本文旨在探究UCP3基因对C2C12成肌细胞增殖的调控作用。[方法]构建慢病毒包被的UCP3基因过表达和干扰载体,转染C2C12细胞,分别促进和抑制UCP3基因的表达;通过CCK-8和EDU染色试验检测C2C12细胞的增殖效果,采用qRT-PCR技术检测细胞增殖和凋亡的相关基因表达量的变化,利用Western Blot方法检测细胞增殖关键蛋白PCNA的变化。[结果]CCK-8和EDU染色试验结果发现,与过表达对照组(OE-NC)相比,UCP3基因过表达组(OE-UCP3)细胞的增殖速度极显著降低(P<0.01),细胞增殖相关基因PCNA和Ki67的mRNA表达量极显著降低(P<0.01),细胞凋亡相关基因Bax和caspase3的表达量极显著升高(P<0.01);细胞增殖关键蛋白PCNA的含量也极显著降低(P<0.01)。与干扰对照组(Sh-NC)相比,UCP3基因干扰组(Sh-UCP3)细胞的增殖速度显著增加(P<0.05),细胞增殖相关基因PCNA和Ki67的mRNA表达量极显著增加(P<0.01),细胞凋亡相关基因Bax和caspase3的表达量显著降低(P<0.05),细胞增殖关键蛋白PCNA的含量也显著升高(P<0.05)。[结论]UCP3基因可能通过抑制细胞增殖基因PCNA和Ki67的表达,促进细胞凋亡基因Bax和caspase3的表达而抑制C2C12细胞的增殖。该结果为骨骼肌中UCP3的功能研究提供基础数据。

牛UCP3和MYH1基因启动子在C2C12和3T3-L1细胞中的启动活性分析

为阐明牛解偶联蛋白3(uncoupling protein 3,UCP3)和肌球蛋白重链1(myosin heavy chain 1,MYH1)基因启动子的核心区及其在小鼠C2C12和3T3-L1两种细胞株中的启动活性,本研究利用PCR、双荧光素酶和脂质体转染等方法进行关岭牛UCP3和MYH1基因启动子的扩增、重组载体构建和启动子活性分析。结果显示,试验成功构建了pGL3-Basic-UCP3-pro和pGL3-Basic-MYH1-pro重组真核表达载体,分别转染至小鼠C2C12和3T3-L1细胞后发现,UCP3、MYH1基因启动子的核心区分别为UCP3-P6(-385^+3 bp)和MYH1-P5(-255^+15 bp)区域;pGL3-Basic-MYH1-P2~pGL3-Basic-MYH1-P5在C2C12细胞中启动子活性均高于3T3-L1细胞,表明MYH1基因启动子活性在成肌细胞C2C12中较高。本研究阐明了UCP3和MYH1基因启动子的核心区及其启动子活性,为进一步研究UCP3和MYH1基因的转录调控机理提供了科学依据。

欧拉型藏羊UCP2和UCP3基因多态性及其与生长性状的关联分析

【目的】探索欧拉型藏羊解偶联蛋白2(UCP2)和解偶联蛋白3(UCP3)基因的多态性及其与生长性状的关联性,为运用分子标记辅助育种方法提高欧拉型藏羊的生长性状提供理论依据。【方法】以239头成年欧拉型藏羊为试验对象,采用PCR产物直接测序技术检测UCP2和UCP3基因的遗传多态性,并将其与体质量、体高、体斜长和胸围生长性状进行关联性分析。【结果】在欧拉型藏羊UCP2基因上筛选出2个SNPs位点,分别为g.52130414 C>T和g.52130584 G>A,其中g.52130414 C>T位点产生TT、CT和CC 3种基因型,g.52130584 G>A位点产生AA、AG和GG 3种基因型;在UCP3基因上筛选出1个SNP位点g.52157335 C>T,产生CC、CT和TT 3种基因型。基因多态性分析表明,3个SNPs位点均为错义突变位点,属于中度多态,且均符合Hard-Weinberg平衡适应性检验(P>0.05)。关联分析结果显示,UCP2基因g.52130414 C>T位点TT基因型欧拉型藏羊体质量显著高于CT基因型(P<0.05);g.52130584 G>A位点AA基因型欧拉型藏羊体质量和体斜长均极显著高于AG和GG基因型(P<0.01),AA和GG基因型欧拉型藏羊胸围均显著高于AG基因型(P<0.05);UCP3基因g.52157335 C>T位点CC基因型欧拉型藏羊体质量显著高于CT基因型(P<0.05),TT基因型欧拉型藏羊胸围显著高于CT基因型(P<0.05)。3个多态位点基因型组合分析发现,5个发生频率较高的双倍型中,D5型欧拉型藏羊体质量极显著高于D1、D2、D3型(P<0.01),体高显著高于D3型(P<0.05),体斜长显著高于D1、D3、D4型(P<0.05)且极显著高于D2型(P<0.01)。【结论】UCP2和UCP3基因多态性与欧拉型藏羊的部分生长性状显著相关,UCP2和UCP3基因可作为欧拉型藏羊生长性状选育的候选基因。D5双倍型为优势基因型,可在选育工作中优先考虑。

盘羊与欧拉羊杂交后代UCP2、UCP3基因CDS区克隆与生物信息学分析

研究旨在通过对盘羊与欧拉羊杂交后代UCP2、UCP3基因CDS区克隆并进行生物信息学分析,了解其生物学特性和结构。结果表明,杂交后代羊UCP2基因CDS区长931 bp,共有7个开放阅读框,编码309个氨基酸;UCP3基因CDS区长937 bp,共有5个开放阅读框,编码244个氨基酸。杂交后代羊与绵羊的亲缘关系最为相近,与马和西伯利亚雪橇犬的亲缘关系最远。杂交后代羊UCP2理论等电点9.64,不稳定指数36.27,半衰期30 h,总平均亲水性0.109,为稳定蛋白且表现疏水性;杂交后代羊UCP3理论等电点9.25,不稳定指数44.80,半衰期30 h,总平均亲水性-0.034,为不稳定蛋白且表现亲水性。UCP2、UCP3均属于非分泌蛋白且无信号肽。UCP2、UCP3都不具有跨膜螺旋结构;UCP2存在26处磷酸化修饰位点,UCP3存在23处磷酸化修饰位点。UCP2、UCP3蛋白二级结构组成均以α-螺旋为主。同时,通过亚细胞定位发现UCP2、UCP3蛋白均主要存在于细胞质内。研究结果对今后探索UCP2、UCP3生理功能可提供一定的科学基础和依据。

Association of UCP3,APN,and TNF-α Gene Polymorphisms with Type 2 Diabetes in a Population of Northern Chinese Han Patients

We observed the polymorphism distribution and coaction of uncoupling protein 3（UCP3）-55C/T,adiponectin（APN）＋45T/G and tumor necrosis factor（TNF）-α-308G/A on the onset and development of T2DM in a Northern Chinese Han population of 213[100 type 2 diabete（T2DM） patients and 113 health control subjects] by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisum（PCR-RFLP） method.Results demonstrate the polymorphism of UCP3-55C/T,APN＋45T/G,and TNF-α-308G/A related to T2DM onset and developement.And the individuals carrying UCP3-55T,APN＋45G and TNF-α-308A allele had higher T2DM risk.Those results are the first report to evaluate the association of the coaction of UCP3,APN,TNF-α genes polymorphism on T2DM risk and the susceptibility of T2DM in the Northern Chinese Han population.

UCP1蛋白和UCP3基因表达减少与OLETF鼠早期肥胖有关

目的观察肥胖2型糖尿病模型OLETF鼠体质量变化和解偶联蛋白(UCPs)转录基因或蛋白表达的相关性。方法测量OLETF大鼠和对照组LETO大鼠不同周龄阶段体质量,在7、10和25周时用Western blot方法测定棕色脂肪组织(BAT)中的UCP1蛋白,用Northern blot方法测定骨骼肌中UCP2和UCP3mRNA量。结果 OLETF大鼠体质量增加比LETO大鼠快,9周前后两组体质量增加差异最明显。10周时LETO组UCP1是OLETF组的1.9倍(P<0.05);UCP3mRNA量约为OLETF组的5.5倍(P<0.01)。结论体质量增加差异明显的阶段UCP1蛋白和UCP3基因表达的减少可能是引起OLETF大鼠肥胖的病因之一。

不同葡萄糖浓度对3T3-L1脂肪细胞诱导分化中解偶联蛋白2基因表达的影响

目的观察体外培养条件下葡萄糖浓度对3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中UCP2mRNA表达水平的变化。方法体外培养3T3-L1脂肪细胞,在诱导3T3-L1脂肪细胞分化成熟的基础上,经不同葡萄糖浓度5.5,25,45mmol/L培养后,3T3-L1脂肪细胞于第3,5,7天抽提总RNA,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测UCP2mRNA的表达。结果随着脂肪细胞逐渐分化成熟,在第7天,45mmol/L葡萄糖终浓度培养条件下,3T3-L1脂肪细胞UCP2mRNA的表达受到抑制(P<0.05);5.5mmol/L葡萄糖终浓度培养条件下,3T3-L1脂肪细胞可增加UCP2mRNA的表达(P<0.01)。结论体外培养中,葡萄糖浓度的变化对脂肪细胞中UCP2mRNA的表达与调控具有一定的影响。

温阳振衰颗粒调控miR-132-3p/UCP2表达对脓毒症大鼠心肌细胞自噬、凋亡的影响

探讨温阳振衰颗粒调控微小核糖核酸-132-3p(microribonucleic acid-132-3p,miR-132-3p)/解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)表达对脓毒症大鼠心肌细胞自噬、凋亡的影响。取60只SD大鼠随机分为模型组(50只)和假手术组(10只)。模型组大鼠通过盲肠结扎穿孔术构建脓毒症大鼠模型,将建模成功的大鼠随机分为温阳振衰颗粒低、中、高剂量组,模型组,阳性对照组。假手术组大鼠仅开腹游离盲肠不进行穿孔结扎。苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察大鼠心肌组织病理学改变;原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测大鼠心肌细胞凋亡;RT-qPCR检测大鼠心肌组织miR-132-3p表达、UCP2、微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)、Beclin-1、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达;Western blot检测大鼠心肌组织UCP2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-132-3p与UCP2的调控关系。脓毒症模型大鼠心肌纤维排列紊乱,有明显炎症细胞浸润和心肌细胞水肿、坏死现象。随温阳振衰颗粒剂量的增加,心肌组织病理学改变均得到不同程度的改善。与假手术组比,模型组,阳性对照组,温阳振衰颗粒低、中、高剂量组大鼠生存率及LVEF降低,心肌损伤评分和细胞凋亡率升高;与模型组比,阳性对照组及温阳振衰颗粒低、中、高剂量组大鼠生存率及LVEF升高,心肌损伤评分和细胞凋亡率降低。与假手术组比,模型组,阳性对照组,温阳振衰颗粒低、中、高剂量组大鼠心肌组织miR-132-3p、UCP2 mRNA表达及蛋白表达降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、caspase-3 mRNA及蛋白表达升高;与模型组比,阳性对照组及温阳振衰颗粒低、中、高剂量组大鼠心肌组织miR-132-3p表达、UCP2 mRNA及蛋白表达升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、caspase-3 mRNA及蛋白表达降低。温阳振衰颗粒可抑制脓毒症大鼠心肌细胞过度自噬和凋亡,改善心肌损伤,可能是通过调控miR-132-3p/UCP2表达发挥上述作用的。

UCP3、EIF2S1基因多态性与2型糖尿病患病风险的关联研究

目的探讨UCP3、EIF2S1基因多态性与2型糖尿病(T2DM)患病风险的关联,为T2DM的预防和治疗提供新的思路和科学依据。方法本研究基于"中国2型糖尿病患者肿瘤发生风险的流行病学研究"项目,按地理区域和经济状况选取南宁市3个社区开展研究,研究对象均于2010—2015年到广西医科大学第一附属医院进行集中体检。采用病例对照研究,纳入774名T2DM患者为T2DM组,886名非T2DM患者为对照组。采用logistic回归分析基因多态性与T2DM的关联、与体质指数(BMI)的交互作用。采用线性回归分析基因多态性与临床代谢指标的关系。结果 logistic回归分析结果显示,EIF2S1基因rs6573769位点基因多态性与BMI存在交互作用(P_(交互)<0.01),与携带TT或TC基因型正常BMI者相比,携带CC基因型的超重和肥胖者可能与T2DM患病风险升高有关(OR=2.220,95%CI:1.560~3.159;OR=2.458,95%CI:1.438~4.201)。线性回归分析结果显示,UCP3基因rs7930460位点的显性模型下,与AA基因型携带者相比,AG或GG基因型携带者可能与糖化血红蛋白(HbA_(1C))水平的降低有关(β=-0.061,P<0.05),可能与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平的升高有关(β=0.056,P<0.05)。结论 UCP3基因rs7930460位点、EIF2S1基因rs6573769位点多态性可能与T2DM风险有关。EIF2S1基因rs6573769位点与BMI存在交互作用,携带CC基因型的超重和肥胖者可能与T2DM患病风险的增加有关。